FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA EFECTO ANTIDIARREICO DEL EXTRACTO HIDROALCÓHOLICO DE Piper peltatum l. (SANTA MARÍA), EN RATAS ALBINAS TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO FARMACÉUTICO AUTORES Bach. MENDOZA VALDIVIA, HUGO GERARDO https://orcid.org/0000-0003-3197-9445 Bach. ASTETE NÚÑEZ, BENEDICTA https://orcid.org/0000-0001-8295-3494 ASESOR Mg. MONTANCHEZ MERCADO, ENRIQUE https://orcid.org/0000-0003-0067-7778 LIMA – PERÚ 2022 DEDICATORIA A mi madre y padre quienes siempre tuvieron una palabra de aliento y apoyo para cumplir con mis metas de las cuales hoy una de ellas es alcanzada. Bach. Mendoza Valdivia, Hugo Gerardo. A mis padres de quienes sigo aprendiendo, creciendo y desarrollándome y han sido una fuente de aliento e inspiración para mí a lo largo de mi vida. Bach. Astete Núñez Benedicta. ii AGRADECIMIENTO A todos nuestros familiares y amigos que, a lo largo de nuestras vidas, nos han apoyado activamente en la determinación de encontrar, realizar y desarrollar nuestro potencial. A nuestro asesor quién nos ha apoyado en nuestros objetivos profesionales y trabajo activamente para brindarnos la protección académica y tiempo para perseguir esos objetivos. Estamos agradecidos con todos aquellos quienes hemos tenido el placer de trabajar durante el desarrollo de este proyecto. iii ÍNDICE GENERAL Páginas Dedicatoria ii Agradecimiento iii Índice de tablas v Índice de gráficos vi Resumen vii Abstract viii I. INTRODUCCIÓN 1 II. MATERIALES Y MÉTODOS 1 2.1 Enfoque y diseño de la investigación 7 2.2 Población, muestra y muestreo 7 2.3 Variables de investigación 8 2.4 Técnicas e instrumentos de recolección de datos 9 2.5 Proceso de recolección de datos 9 2.6 Métodos de análisis estadístico 11 2.7 Aspectos éticos 12 III. RESULTADOS 13 IV. DISCUSIÓN 21 4.1 Discusión de resultados 21 4.2 Conclusiones 23 4.3 Recomendaciones 23 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 24 ANEXOS 28 iv ÍNDICE DE TABLAS Tabla 1. Identificación fitoquímica del extracto hidroalcohólico Piper peltatum L. (santa maría) ........................................................................................................................ 12 Tabla 2. Tiempo de la primera deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. ................................................................................................. 13 Tabla 3. Frecuencia de deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. ........................................................................................................ 14 Tabla 4. Peso de las heces después de 4 horas de la administración del tratamiento y el agente diarreico. .................................................................................................... 15 Tabla 5. Tipo de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. .............................................................................. 16 Tabla 6. Color de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico ............................................................................... 17 Tabla 7. Aspecto de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico ............................................................................... 18 Tabla 8. Otras características de las heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico ................................................. 18 v ÍNDICE DE GRÁFICOS Figura 1. Valores medio del tiempo de la primera deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. ................................................ 13 Figura 2. Valores medio de la frecuencia de deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. ........................................................................ 14 Figura 3. Valores medio del peso de las heces después de 4 horas de la administración del tratamiento y el agente diarreico. ........................................................................ 15 Figura 4. Porcentaje del tipo de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. ................................................ 16 Figura 5. Color de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. .............................................................................. 17 Figura 6. Aspecto de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico ............................................................................... 18 Figura 7. Otras características de las heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. ................................................ 19 vi RESUMEN Objetivo: Determinar el efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L en ratas albinas. Métodos: Se realizó un estudio experimental prospectivo longitudinal cuantitativo. La muestra vegetal estuvo constituida por 10 Kg de hojas de la planta Piper peltatum L y la muestra animal por 20 ratas albinas machos, dividido en grupos controles y experimentales Resultado: 1ml d/con de 200 mg/kg del extracto hidroalcohólico presentó actividad antidiarreica. Conclusiones: El extracto hidroalcohólico de la Piper peltatum L puede tener una acción relajante del epitelio intestinal obteniendo un efecto antidiarreico Palabras clave: Piper peltatum L, flavonoides, efecto antidiarreico. vii ABSTRACT Objective: To determine the antidiarrheal effect of the hydroalcoholic extract of the Piper peltatum L plant in albino rats. Methods: A quantitative longitudinal prospective experimental study was carried out. The plant sample consisted of leaves of the 10 Kg Piper peltatum L plant and the animal sample of 20 male albino rats, divided into control and experimental groups. Result: 1ml d/con 200 mg / kg of the hydroalcoholic extract showed antidiarrheal activity. Conclusions: The hydroalcoholic extract of Piper peltatum L may have a relaxing action on the intestinal epithelium, obtaining an antidiarrheal effect. Key words: Piper peltatum L, flavonoids, antidiarrheal effect viii I. INTRODUCCIÓN La diarrea se basa en la existencia de una modificación de las emisiones intestinales habituales con un aumento de la cantidad, frecuencia y / o volumen de las deposiciones de consistencia líquida o semilíquida. Se considera como patológico la emisión de al menos 3 deposiciones (o emisiones intestinales) de consistencia modificada por día. Se habla de diarrea aguda cuando el episodio dura menos de 10 a 14 días y de diarrea persistente (o crónica) cuando persiste por más de 14 días. La diarrea aguda es un motivo de consulta extremadamente frecuente, incluso más frecuente en los países tropicales y subtropicales que en los países templados 1. En Perú, los episodios de enfermedades diarreicas agudas (EDA) en personas mayores de 5 años entre 2012-2017 tuvo una tendencia al incremento y un descenso en los menores de 5 años, 2. Las enfermedades diarreicas acompañan al hombre desde sus inicios y junto con las enfermedades respiratorias han sido las principales causas de morbilidad y mortalidad. El norte de Perú es considerado como el centro del eje central andino de salud, donde las prácticas medicinales tradicionales son un componente significativo en la vida cotidiana, sin embargo, en la actualidad la medicina tradicional está siendo mayormente considerada por los gobiernos nacionales y las empresas de servicios de salud 3. Es utilizada a nivel mundial y tiene una importancia económica en rápido crecimiento, por lo general, la medicina tradicional es el único tratamiento accesible y asequible en algunos países en desarrollo 4. Los efectos de los extractos de plantas sobre los microorganismos han sido estudiados y evaluados por muchos investigadores en estudios de descubrimiento de fármacos en diferentes partes del mundo 5-7. El interés por las plantas con propiedades antimicrobianas se ha reactivado debido a los problemas actuales asociados con una reducción en el número de posibles nuevos fármacos antimicrobianos, un aumento de la resistencia a los antimicrobianos y la necesidad de tratamientos para patógenos 1 emergentes 7,8. En América del Sur existe una gran diversidad de plantas que son pertenecientes a la familia Piperaceae, con diferentes funcionalidades biológicas. Por su parte, la especie Piper peltatum L. o Pothomorphe peltata (L.) Miq. es conocida popularmente como " Santa María " en regiones como la Amazonía peruana y boliviana y crece en forma de maleza, estas suelen ser utilizadas como agente antiinflamatorio, diurético e incluso como antipirético de uso interno y externo 9. Sin embargo, hasta los momentos, no se ha encontrado ningún trabajo que investigue las propiedades antidiarreicas del extracto hidroetanólico de la planta Piper peltatum L. Las plantas contienen cientos de sustancias de diferentes tipos, y se dividen en primarios y secundarios, de los cuales los secundarios son considerados de gran importancia por su actividad biológica. Las plantas pueden actuar como verdaderos tratamientos farmacológicos o medicamentos sintetizados, y pueden tener un comportamiento igual que estos en el organismo, por tanto, es importante resaltar que pueden producir reacciones indeseables secundarias, que pueden ser tóxico o intolerables por el individuo, sin embargo, diferentes culturas las han utilizado como recurso medicinal por largos tiempos 10. Diversos estudios han descrito los usos tradicionales de la Piper peltatum, se ha reportado el uso de infusiones de hojas y raíces de Piper peltatum en la medicina tradicional de Brasil para tratar la erisipela, la malaria, la leishmaniasis y la hepatitis11. Otros estudios describen que las hojas tienen efectos antiinflamatorios, antineurálgicos y sudoríficos. Las hojas de Piper peltatum se hierven y el agua se usa como baño de hierbas o para lavar la piel para reducir la fiebre alta. Las hojas calentadas se atan o envuelven alrededor de la cabeza y la frente como un parche para tratar los dolores de cabeza, mientras que la infusión de hojas lo usan para tratar la fiebre 12. En este sentido, se puede observar como la Piper peltatum L. ha presentado una gran variedad de aplicabilidad en el área médica. En la Amazonía peruana, así como en los países tropicales de América del Sur, el uso de especies medicinales de Piper es una práctica común, particularmente contra los síntomas de infección por parásitos 2 protozoarios13. Sin embargo, no se ha reportado hasta el momento estudios que describan su actividad antidiarreica, surgiendo la necesidad de investigar sobre este posible efecto. Poco son los estudios nacionales que se han publicado actualmente sobre la Piper peltatum, escasamente se encontraron los siguientes: Vásquez-Ocmín P et al., (2021)13, registraron y validaron el uso de especies medicinales de Piper por pobladores rurales de la provincia de Alto Amazonas (Perú) y anotaron compuestos activos mediante un estudio de correlación y un enfoque de minería de datos. Encontraron que una serie de especies de Piper con pocos datos fitoquímicos previamente disponibles tienen una buena actividad anti protozoaria. Quiñonez R, (2018)14, en su estudio in vitro evaluó la actividad leishmanicida de algunas especies vegetales, de los cuales estuvo incluida los extractos etanólicos de la Piper peltatum. La Piper peltatum fue una de las que presentó mayor actividad IC50=27,6µg/mL, y entre las fracciones que se obtuvieron la de hexano de Piper peltatum fue la que mostró mayor actividad. Fuertes, (2018)15, realizó un estudio para evaluar el efecto etanólico de cinco especies del género Piper frente a la línea clonal de referencia de promastigotes de Leishmania braziliensis. Los extractos etanólicos mostraron una actividad leismanicida in vitro. En cuanto a los antecedentes encontrados a nivel internacional destacan los siguiente: Pilco G et al., (2020)16, determinaron los efectos inhibitorios de los extractos de la Piper peltatum L en la hialuronidasa bovina y del veneno de la Naja naja atra y Botrox atrox. Los autores concluyeron que en la hialuronidasa bovina hubo mayor inhibición, seguida del veneno de Naja naja atra y sobre B. atrox, pero en esta no fue significativa. Moyano M, (2019)17, evaluó en ratas albinas de laboratorio la actividad diurética del extracto hidroalcohólico de la raíz de Piper peltatum L., en dosis de 25 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg, en el cual no se evidenciaron diferencias estadísticamente significativas al ser comparados con la furosemida. 3 Bermúdez J, (2017)18, realizó un estudio in vitro para evaluar la actividad antiinflamatoria, antioxidante y la citotóxica del extracto hidroalcohólico de la Piper peltatum L. La actividad antioxidante de 3891.67mg de extracto/μ mol de DPPH fue de un IC50, obteniendo una moderada actividad antiinflamatoria, pero esta fue menor al ácido acetilsalicílico (sustancia de referencia) y se encontró una baja actividad citotóxica sobre los neutrófilos aislados. Aproximadamente el 64% de los remedios utilizados en Perú, se preparan con material vegetal fresco. Muchas de estas especies se cultivan en campos y jardines, en su mayoría las especies que son autóctonas son recolectadas en la naturaleza 4. Mucha de las propiedades de las plantas medicinales depende de diversos factores, destacando las condiciones del clima, la composición y naturaleza del suelo de la región de cultivo, la fase vegetativa, por lo que se sugiere realizar un estudio de la flora en diferentes zonas geográficas y países. Los tratamientos a base de plantas son las forma más populares de medicina tradicional y se utilizan comúnmente como atención primaria de salud 19, es importante destacar que la Piper peltatum L ha sido utilizada para el tratamiento de la inflamación, la malaria y otras dolencias, donde el 4-nerolidilcatecol (4-NC) es un componente de los extractos de Piper peltatum y Piper umbellatum, el cual se utiliza en cosmética 20, y es considerado como un producto natural valioso que tiene importantes propiedades antiinflamatorias, antipalúdicas, antioxidantes, entre otras. Escasos estudios se han reportado sobre el efecto antidiarreico de esta planta, por lo tanto, el presente estudio permitirá determinar su efectividad y estandarizar las concentraciones y tiempos de respuesta del extracto de la planta Piper peltatum L lo cual podrán ser consideradas en futuras investigaciones. En relación a lo anteriormente expuesto, es importante destacar que los resultados del presente estudio ayudarán a ampliar el potencial medicinal que tienen los componentes la planta Piper peltatum L (Santa María) sobre todo su posible efecto antidiarreico el cual ha sido poco reportado, y justifica el desarrollo de la investigación. 4 El objetivo general del estudio será determinar el efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L (Santa María) en ratas albinas. La hipótesis general del estudio se describe como: El extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L (Santa María) presentara efectos antidiarreicos en las ratas albinas. 5 II. MATERIALES Y MÉTODOS 2.1. Enfoque y diseño de la investigación Enfoque: Cuantitativo. Experimental: Debido a que hubo manipulación de las variables. Aplicativo: Debido a que planteó solventar problemas o intervenir en la historia natural de la enfermedad. Inductivo: Se trata de un estudio que es basada en la elaboración de conclusiones en base a las observaciones realizadas, sin embargo, no establece generalizaciones o predicciones. Prospectivo: Se debe a que los datos fueron analizados en un determinado tiempo transcurrido en el futuro. Longitudinal: Porque se investigó un proceso en diferentes momentos en relación a la intervención. 2.2. Población, muestra y muestreo La población vegetal estuvo constituida por las hojas de la planta Piper peltatum L "Santa María", 10 Kg, procedentes del departamento de: Madre de Dios, Provincia: Tambopata, Distrito: Tambopata, Capital Puerto Maldonado. En la localidad de la comunidad nativa de chorrillos kilómetro 18 fuera de la ciudad a 500 m.s.n.m. La población animal estuvo constituida por Ratas albinas, las cuales fueron obtenidas del criadero pacífico con trol en Lima, Panamericana Sur, km23.5 en villa El Salvador. La muestra estuvo constituida por 20 Ratas albinas machos de 3 meses, los cuales fueron divididos en los siguientes grupos: 6 - Grupo control blanco (G1): Constituido por las ratas que recibieron 1ml de agua destilada. - Grupo Control negativo (G2): Constituido por las ratas que recibieron 1ml de agua destilada + 1ml de Aceite de ricino. - Grupo Control positivo (G3): Constituido por las ratas que recibieron 0.0068 mg loperamida suspendida en 1ml de agua destilada + 1ml de Aceite de ricino. - Grupo Experimental 1 (G4): Constituido por las ratas que recibieron 1ml del extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L (Santa María) de 100 mg/kg del extracto + 1ml de Aceite de ricino. - Grupo Experimental 2 (G5): Constituido por las ratas que recibieron 1ml del extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L (Santa María) de 200 mg/kg del extracto + 1ml de Aceite de ricino. El muestreo fue aleatorizado, considerando los criterios de selección en el caso de las plantas. 2.3. Variables de investigación Variable independiente: Extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L (Santa María) Definición conceptual: Un extracto sólido obtenido extrayendo los principios solubles del fármaco con alcohol y agua, seguido de la evaporación de la solución. Definición operacional: El extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L (Santa María) será utilizado como tratamiento antidiarreico en animales de experimentación. Variable dependiente: Efecto antidiarreico en ratas albinas. Definición conceptual: Es el efecto que producen los medicamentos antidiarreicos utilizados para aliviar la diarrea. Definición operacional: A los animales se les inducirá diarrea para ser tratados con el extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L (Santa María) y poder determinar su efecto antidiarreico. 7 2.4. Técnica e instrumentos de recolección de datos Se realizó un estudio in vivo, para cual se utilizó la técnica de la observación experimental, la cual permitió determinar la frecuencia de fenómenos biológicos que se fueron desarrollando una vez administrado las soluciones de estudio. Como instrumento, se utilizó una ficha de registro de datos el cual estuvo constituido por una serie de indicadores que fueron observados y anotados, como, por ejemplo, hora de comienzo, tiempo de la primera deposición fecal, frecuencia de deposiciones, peso, tipo de heces y características físicas, y cualquier otra observación que fuese útil para el análisis de los resultados. 2.5. Plan de recolección de datos Los datos serán recolectados utilizando el siguiente procedimiento: 2.5.1. Selección de las hojas de la Piper peltatum (Santa María) Para la selección de las hojas se descartaron aquellas partes de la planta que se encontraban deterioradas, tomando en cuenta el color y estado físico de la planta, luego fueron lavadas con abundante agua potable y se desinfectaron con Kilol DF 100, para un total de 10 Kg de hojas. Finalmente fueron secadas en una estufa con aire circulante a una temperatura de 120° durante 12 horas. Una vez secas las hojas fueron trituradas en un recipiente limpio hasta obtener pequeñas partículas que luego fueron almacenadas en bolsas de plástico para evitar el contacto con luz y humedad. 2.5.2. Preparación del extracto hidroalcohólico de la Piper peltatum L Para la preparación del extracto, se colocaron 100g de droga cruda en un frasco color ámbar, y como solvente se utilizó 1000 ml de etanol al 70% y se dejó reposar durante 48 horas. Pasado el tiempo fueron colocadas por 2 horas en un sonicador. Se obtuvo un extracto que fue filtrado para concentrarlo en el rotavapor a una temperatura de 33 °C quedando una solución libre de alcohol. Finalmente, el extracto ya filtrado fue congelado y liofilizado por un tiempo determinado hasta quedar libre de agua. 8 Se realizó una evaluación de calidad del extracto hidroalcohólico considerando las características organolépticas (olor, color, sabor y aspecto), densidad relativa, índice de refracción, pH y sólidos totales. 2.5.3. Determinación de la actividad antidiarreica Para determinar la actividad antidiarreica de las hojas de Piper peltatum L., en primer lugar, se dispusieron las dosis del extracto, para lo cual se preparó una solución madre de 55 mg/ml usando como disolvente agua destilada y a partir de allí se obtuvo una dosis de 100 y 200 mg/kg 21. 2.5.4. Selección de los animales experimentales Las ratas albinas machos que se utilizaron fueron criadas a una temperatura de 22 ± 2 °C, humedad de 50 ± 10 %, fotoluminiscencia de 12 horas de claridad y 12 horas de oscuridad, con una alimentación balanceada para roedor de 20g al día y la hidratación con agua purificada ad libitum. Las ratas fueron separadas en 5 grupos (n=4). A cada uno se les administraron las sustancias por la vía oral intragástrica quedando de la siguiente manera: El grupo control blanco (G1) recibió 1ml de agua destilada, el control negativo (G2) recibió 1ml de agua destilada, el control positivo (G3) 0.0068 mg de loperamida suspendida en 1ml de agua destilada, el grupo experimental 1 (G4) recibió 1 ml de la concentración de 100 mg/kg del extracto y el experimental 2 (G5) 1 ml de la concentración de 200 mg/kg del extracto. A los grupos 2, 3, 4 y 5 les suministraron 1 ml de aceite de ricino 30 min después de las soluciones, con el fin de inducir la diarrea. Luego, fueron ser trasladados a jaulas individuales y se les colocó papel aluminio (previamente pesado) sobre el piso o fondo, con el fin de pesar las heces con facilidad. Posteriormente, se observó el progreso del ensayo cada 30 minutos en un total de 4 horas. Los experimentos fueron realizados de forma separada y en distintos días por grupo 21. 9 2.5.5. Evaluación del proceso diarreico Para la evaluación del proceso diarreico, se consideró el tiempo de la primera deposición fecal, la frecuencia de deposiciones, el peso, tipo de heces y características físicas. El tiempo de la primera deposición correspondía al total del tiempo que se generó de los cuatro animales de cada grupo en experimentación (promedio del tiempo). La frecuencia correspondió a las veces que hicieron deposiciones en el periodo de tiempo evaluado por grupo. El peso se obtuvo sumando el peso de las heces a las 4h después de la administración del aceite de ricino de cada ratón y de allí se sacó el promedio por cada grupo. El tipo de heces fueron consideradas según su estado físico, las cuales se dividen en diferentes grupos, como: normales, blandas y diarreicas, y según su textura: dura, blanda (heces con mayor humedad y volumen en comparación a las duras), semilíquida, líquida. Para las características físicas se tomó en cuenta el color que poseían las heces, el aspecto que puede ser homogéneo y heterogéneo y otros como: presencia de sangre, moco, entre otras características que fueron de importancia. 2.6. Métodos de análisis estadístico Los datos obtenidos fueron analizados según los test estadísticos descriptivos los cuales están expresados en porcentajes y promedios por grupo. Para comparar los grupos de estudio se utilizó el análisis de varianza (ANOVA) de un factor, al igual que la prueba de normalidad y test de homogeneidad. La diferencia se registró como significativa considerando el valor p (p <0,05). Todos los análisis estadísticos fueron desarrollados de manera automatizada utilizando el programa estadístico SPSS. 10 2.7. Aspectos éticos Los animales incluidos en el estudio fueron tratados de acuerdo a las normativas de bioética sobre protección de animales utilizados para experimentación y otros fines científicos 22. 11 III. RESULTADOS 3.1. Marcha fitoquímica Tabla 1. Identificación fitoquímica del extracto hidroalcohólico Piper peltatum L. (Santa María) METABOLITO/METD. PROCEDIMIENTO CAMBIO COLOR APLICACIÓN A: 1º FLAVONOIDES 2.0 ml de muestra (Aq) + Presenta cambio de color: Contiene Cloruro férrico 2.0 ml de H2O destilada. verde oscuro a negro flavonoides y (FeCl3) + 5 gotas de s/n FeCl3 2% verdusco. flavonoles R: (+) Calificación: (+++) 2º FLAVOLOIDES 2.0ml de muestra (Aq) + 2.0 No presenta cambios No contiene Tricloruro de ml de H2O destilada + 5 R: (-) flavonas aluminio AlCl3 gotas de AlCl3 s/n al 2% Calificación: (- - -) 3º FLAVOLOIDES 2.0 ml de muestra (Aq) + No presenta cambio No contiene Acetato/plomo 2.0 ml de H2O destilada +5 R: (-) flavonoides gotas de acetato de plomo Calificación: (- - -) catequina 4º ALCALOIDES 2.0 ml de muestra (Aq) + No presenta cambios No contiene Dragendorff 2.0 ml de H2O destilada + R: (-) alcaloides 2.0 gotas de ácido 4% + 5.0 Calificación: (- - -) gotas reactivo dragendorff 5º ALCALOIDES 2.0 ml de muestra (Aq) + No presenta cambios No contiene OTTO 2.0ml de agua destilada + R: (-) alcaloides 2.0 gotas de H2CO4 80% Calificación: (- - -) Indólicos: estricnina + 5 gotas s/n dicromato 6º. BORNTRAGER 2.0 ml de muestra (Aq) Presenta ligero cambio. Contiene mínima Antraquinonas +2.0ml de H2O destilada + Naranja en fondo verde concentración de Naptoquinonas 1.0 ml de bencina + 5.0 R: (+) quinonas gotas de NaOH 5% Calificación: (+ - -) 7º SAPONINAS 2.0 ml de muestra (Aq) + 10 Espuma persistente a los Contiene: saponinas MET ml de H20 destilada 20 minutos Y sapogeninas ESPUMA agitación en tubo de ensayo R: (+) cerrado, por 2 minutos Calificación: (+++) CPTOS FENÓLICOS 2.0 ml de muestra (Aq) + Presenta cambios de Mediana SHINODA 2.0 ml de H2O destilada + color naranja a rojo concentración de trocitos de MG. (s) + 3 gotas R: (+) flavonoides HCL (c) Calificación: (++-) Benzopiranicos Dónde: R: Respuesta positiva (+) / Respuesta negativa (-). Aq: Acuoso. d: Destilada. s/n: Solución Calificación: Abundante (+++) Mediana: (++ -) Poca o mínima: (+ - -) No presenta: (- - -) En la tabla 1 se puede apreciar el extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L. (Santa María) que está básicamente constituido por diversos metabolitos, a mencionar: flavonoles, flavonoides, saponinas y sapogeninas. 12 3.2. Actividad antidiarreica 3.2.1. Tiempo de la primera deposición Tabla 2. Tiempo de la primera deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. N Mínimo Máximo Media Desv. ANOVADesviación Valor P Grupo 1 4 1,28 1,30 1,2875 ,00957 Grupo 2 4 ,32 1,29 1,0425 ,48169 Grupo 3 4 ,55 1,28 1,0975 ,36500 Grupo 4 4 ,55 1,28 1,0950 ,36336 Grupo 5 4 ,55 1,31 1,1050 ,37027 0,448 Total 20 ,32 1,31 1,1255 ,32803 Figura 1. Valores medio del tiempo de la primera deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. En la tabla 2 y figura 1 se presentan los datos descriptivos de la primera defecación de los grupos estudiados, observando que el grupo G1 tuvo un promedio de 1h29min, G2 de 1h04min, G3 y G4 1h09min y el G5 1h10min, a pesar que se observa una diferencia gráficamente al aplicar la prueba ANOVA no se observaron diferencias estadísticamente significativas, lo que se considera que todos los animales tuvieron un tiempo de deposición similar. 13 3.2.2. Frecuencia de deposición Tabla 3. Frecuencia de deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. Desv. ANOVA N Mínimo Máximo Media Desviación Valor P Grupo 1 4 2,00 2,00 2,0000 ,00000 Grupo 2 4 4,00 4,00 4,0000 ,00000 Grupo 3 4 2,00 3,00 2,5000 ,57735 Grupo 4 4 2,00 3,00 2,7500 ,50000 Grupo 5 4 2,00 2,00 2,0000 ,00000 0,0046 Total 20 2,00 4,00 2,6500 ,81273 Figura 2. Valores medio de la frecuencia de deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. La frecuencia de las deposiciones fue evaluada en un periodo de tiempo de 4h para cada grupo se observó que el G1 tuvo un promedio de 2 veces, el G2 4 veces, G3 2.5, G4 2,75 veces y el G5 2. Gráficamente se observa que el grupo 2 tuvo mayor frecuencia de deposiciones en comparación a los otros y el grupo G1 y G5 tuvieron la misma tendencia de tener menos frecuencia. Estos valores al ser comparados con la prueba de Kruskal-Wallis se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre G1 con G2 y G2 con G5 con una p<0.01. Se puede observar un posible efecto antidiarreico al utilizar 200mg/kg de extracto. 14 3.2.3. Peso de las heces Tabla 4. Peso de las heces después de 4 horas de la administración del tratamiento y el agente diarreico. Desv. ANOVA N Mínimo Máximo Media Desviación valor P Grupo 1 4 1,30 1,80 1,5500 ,20817 Grupo 2 4 3,50 3,90 3,6250 ,18930 Grupo 3 4 2,00 2,40 2,2375 ,17970 Grupo 4 4 2,90 3,20 3,0500 ,12910 Grupo 5 4 2,20 2,60 2,3750 ,20616 <0,0001 Total 20 1,30 3,90 2,5675 ,74838 Figura 3. Valores medio del peso de las heces después de 4 horas de la administración del tratamiento y el agente diarreico. Se realizó un promedio del peso de las heces después de 4 horas por grupo, se obtuvo un peso medio de 1,55gr en el grupo G1, el G2 tuvo 3,63gr siendo el de mayor peso entre los grupos, el G3 2,24gr, G4 3,05gr y G5 2,38. Las medias se compararon utilizando la prueba de Turkey para pruebas paramétricas encontrando diferencias estadísticamente significativas entre el G1 con G2, G3, G4 y G5; el G2 con G3, G4 y G5; G3 con G4 y G4 con G5. Se destaca que tanto el grupo que recibió los 100mg/kg como el que recibió los 200mg/kg del extracto presentaron menos cantidad en peso 15 de heces en comparación al grupo control negativo que no recibió ningún tratamiento demostrando una posible eficacia del extracto. 3.2.4. Tipo de heces Tabla 5. Tipo de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. G1 G2 G3 G4 G5 F % F % F % F % F % Válido Duro 7 87,5 3 18,8 0 0 3 27,3 3 37,5 Blanda 1 12,5 4 25,0 6 60,0 2 18,2 3 37,5 Semilíquida 0 0 3 18,8 4 40,0 4 36,4 2 25,0 Líquida 0 0 6 37,5 0 0 2 18,2 0 0 Total 8 100,0 16 100,0 10 100,0 11 100,0 8 100,0 ANOVA Turkey p=0,7124 Figura 4. Porcentaje del tipo de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. En cuanto al tipo de heces en la tabla 5 se puede observar la frecuencia y los porcentajes que se presentaron en cada grupo y se destaca que el grupo 2 presento con mayor frecuencia el tipo diarreica y el G5 tuvo un mejor comportamiento ya que sus heces estuvieron entre lo normal y blandas, indicando un posible efecto antidiarreico. Sin embargo, no se consiguieron diferencias significativas. 16 3.2.5. Características de físicas de las heces Tabla 6. Color de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico G1 G2 G3 G4 G5 F % F % F % F % F % Válido Negras 5 62,5 4 25,0 3 30,0 4 36,4 3 37,5 Marrón 3 37,5 7 43,8 4 40,0 4 36,4 1 12,5 Verde 0 0 0 0 0 0 0 0 1 12,5 Marrón/verde 0 0 1 6,3 0 0 0 0 2 25,0 Marrón/amarillo 0 0 0 0 0 0 0 0 1 12,5 Brilloso 0 0 4 25,0 3 30,0 3 27,3 0 0 Total 8 100,0 16 100,0 10 100,0 11 100,0 8 100,0 ANOVA Turkey p=0,8469 Figura 5. Color de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. 17 Tabla 7. Aspecto de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico G1 G2 G3 G4 G5 F % F % F % F % F % Válido Homogénea 8 100,0 7 43,8 7 70,0 5 45,5 8 100,0 Heterogénea 0 0 9 56,3 3 30,0 6 54,5 0 0 Total 8 100,0 16 100,0 10 100,0 11 100,0 8 100,0 ANOVA Turkey p=0,8265 Figura 6. Aspecto de heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico Tabla 8. Otras características de las heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico G1 G2 G3 G4 G5 F % F % F % F % F % Válido S/E 8 100,0 3 18,8 4 40,0 4 36,4 8 100,0 Aceitoso 5 31,3 4 40,0 3 27,3 Moco 1 6,3 Espumoso 3 18,8 2 20,0 4 36,4 Sangre 1 6,3 Moco/sangre 1 6,3 Abundante 2 12,5 Total 8* 100,0 16* 100,0 10 100,0 11 100,0 8* 100,0 ANOVA Turkey p=0,0056 Dónde: S/E: Sin evidencia * p<0.05 G2 Vs G1 / G2 Vs G5 18 Figura 7. Otras características de las heces de cada deposición después de la administración del tratamiento y el agente diarreico. En relación a las características físicas de las heces que se consideraron está el color, donde lo que más se destaca, es que hubo mayor variedad en el G5 encontrando heces verdes, marrones y combinadas, atribuible a la concentración del extracto, al realizar la comparación de todos los grupos no se encontraron diferencias significativas. En cuanto al aspecto los grupos G1, G3 y G5, presentaron con mayor frecuencia heces homogéneas y en el G2 y G4 heterogéneas, se encontraron diferencias no significativas. Finalmente, al observar las heces se hallaron otras características de los cuales el G2 presentó mayor variedad, de las 16 deposiciones 5 (31,3%) eran aceitosas, 1 (6,3%) con moco, 3 (18,8%) espumosa, 1 (6,3%) con sangre, 1 (6,3%) con sangre y moco y 2 (12,5%) fueron abundantes. El G1 y G5 no presentó otras características a parte de las ya descritas anteriormente; y el G3 y G4 presentaron heces aceitosas, 4 (40%) y 3 (27,3%); espumoso, 2 (20%) y 4 (36,4%), respectivamente. Al comparar los grupos se observaron diferencias significativas entre el G2 con el G1 y G2 con G5. 19 IV. DISCUSIÓN 4.1 Discusión de resultados Al realizar la marcha fitoquímica en la Piper peltatum L, se pudo observar la variabilidad de compuestos que están presentes en esta especie, destacándose la presencia de flavonoides, sapogeninas y benzopiranicos. Estos metabolitos coinciden con los reportados por Soto M 23 quienes realizaron un estudio fitoquímico de las hojas de Piper peltatum L. Los flavonoides en particular presentan múltiples propiedades sobre la respuesta inflamatoria, por lo que pueden ser considerados para diseñar nuevos fármacos que pueden ser útiles en el tratamiento de la enfermedad crónica del intestino, y esto se debe a que son de baja toxicidad, tienen la capacidad de inhibir diferentes enzimas que se incrementan en los procesos inflamatorios, presentan propiedades antioxidantes y/o antirradicalarias contribuyendo a incrementar el contenido intestinal de glutation, lo que protege al intestino del daño de tipo lipoperoxidativo que se generan cuando hay una superproducción de radicales libres24. En cuanto al efecto antidiarreico de esta planta no se han reportado estudios al respecto, sin embargo, en el presente estudio a partir de los resultados encontrados se puede observar que el extracto hidroalcohólico de la Piper peltatum L puede tener una acción relajante del epitelio intestinal debido a los resultados que se obtuvieron. En relación al tiempo que tardaron los animales en realizar su primera deposición no se observaron diferencias significativas al comparar los grupos estudiados, sin embargo, al observar gráficamente los valores de las medias, el grupo 5 tratados con la concentración más alta del extracto obtuvieron los tiempos medios más altos en comparación a los grupos que también fueron estimulados con el aceite de ricino. Esto puede atribuirse a la disminución de la motilidad intestinal provocada por algunos flavonoides presentes en la planta lo cual podría indicar un posible efecto antidiarreico21. En relación a la frecuencia se pudo observar diferencias significativas al comprar al grupo G1 con el G2 siendo mayor en este último, esto se debe al aceite de ricino (agente patológico para inducir diarrea) que recibió el G2. De igual manera, al comprar el G2 con el G5 se observaron diferencias significativas, donde el G5 quien fue el grupo 20 que recibió el extracto a mayor concentración tuvo menor frecuencia de deposiciones después de recibir el tratamiento, lo que puede observarse un posible efecto antidiarreico del extracto a esta concentración (200mg/Kg) incluso más que la loperamida. En cuanto al peso de las heces se puede resaltar que obviamente el G2 tuvo mayor peso en comparación al resto de los grupos siendo significativo con respecto al G3, G4 y G5. Para evaluar el efecto del extracto se encontró diferencias significativas entre el G4 y G5 obteniendo el G5 menor peso lo que coincide con la menor frecuencia de deposiciones que tuvo este grupo con respecto al G4. En cuanto al tipo de heces como era de esperar el G1 presentó 87,5% dura y 12,5% blandas considerado como heces normales. En relación al G2, a pesar de no haber recibido ningún tratamiento antidiarreico de las 16 deposiciones 7 fueron normales (3 duras y 4 blandas), esto puede deberse al tiempo que tarda el aceite de ricino en hacer su efecto21, sin embargo, la mayoría de sus heces fueron diarreicas 18.8% semilíquidas y 37,5 líquidas. El G3 tuvo 60% blanda (normal) y 40% semilíquida (diarreica). En relación a los grupos que recibieron el extracto se observó que el G4 presento más deposiciones (11) de los cuales 5 fueron normales (3 duras y 2 blandas) y 6 diarreicas (4 semilíquidas y 2 líquidas); el G5 mostró menos deposiciones (8) de los cuales la mayoría fueron normales (3 duras y 3 blandas) y solo 2 fueron diarreicas de consistencia semilíquida, lo que puede atribuirse al posible efecto de los flavonoides presentes en la Piper peltatum a una concentración del extracto de 200mg/kg. A pesar de estos hallazgos no se encontraron diferencias estadísticamente significativas. Resultados similares se han encontrado en estudios 21, 25 donde se han utilizado plantas con compuestos fenólicos para evaluar su efecto antidiarreico. En cuanto a las características de las heces no se encontraron diferencias estadísticamente significativas en el color de las heces, el hallazgo más resaltante que se puedo observar es que el G5 presentó mayor diversidad de colores en sus heces que iban de negras, marrón, verdes y amarillas. En relación, al aspecto el G1 y G5 presentaron heces homogéneas en su totalidad, los otros grupos presentaron variedad entre homogénea y heterogéneas sin presentar diferencias significativas. Finalmente, 21 al evaluar otras características se observaron resultados similares entre el G1 y G5 quienes no evidenciaron otros hallazgos a los ya descritos anteriormente, estas al ser comparadas con el grupo G2 se observaron diferencias estadísticamente significativas, siendo el único grupo que presentó sangre y moco en sus heces entre otras características. 4.2 Conclusiones Los estudios realizados en el presente trabajo permiten llegar a las siguientes conclusiones: - Los flavonoides presentes en la Piper peltatum le pueden atribuir un efecto antidiarreico al recurso vegetal. - En condiciones experimentales, el extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum a dosis de 200mg/kg demostró presentar un posible mayor efecto antidiarreico en comparación a 100mg/kg. 4.3 Recomendaciones - Realizar estudios de tipo correlativo que permitan relacionar las dosis utilizadas con la efectividad antidiarreica de la Piper peltatum. - Realizar evaluaciones de la actividad antidiarreica a otras concentraciones del extracto para determinar la concentración terapéutica más recomendable. - Se hace necesario continuar con estudios clínicos en esta línea de investigación ya que hasta el momento no se han publicados estudios que evalúen el efecto antidiarreico de la Piper peltatum, por lo que se considera incluir otras variables importantes a considerar, como la toxicidad. 22 REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS 1. 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Tratamiento y dosis: 1 ml de agua destilada Otros: presencia de sangre, moco etc. Tipo de heces: Dura, blanda, semilíquida y líquida Evaluación de actividad antidiarreica Rata 1 2 3 4 Hora de administración del aceite de 5:00 am 5:04 am 5:06 am 5: 10 am ricino Hora de la primera deposición 6:30 am, 6:32 am, 6:34 am 6.39 am Peso de las heces después de 4h 1.6gr 1.8gr 1.5gr 1.3gr Frecuencia de deposiciones (horas) 7:30 8:3 9:30 6:32 am 8:13 am 6:34 am 7:20 am 6:39 am 9:50 am: 6:30a 0 am m Tipo de heces Dura - blandas Dura y dura Dura y dura dura dura y alargada alargadas Alarg ada Color Negr -- Negras Negras y Negras y marrón Marrón Negras Marrón as brilloso Brilloso brilloso brillos Características de físicas o de las heces Aspecto Homo Homog Homogénea homogéne Homogéne homogéne Homogénegéne - éneas s as o as o Homogéne o as Otros norm - normal Normal normal normal normal normal normal al FICHA 1. Resultado del efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de piper peltatum l (santa maría), en ratas albinas Día 22 del grupo G1 FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA FICHA DE RESULTADOS EFECTO ANTIDIARREICO DEL EXTRACTO HIDROALCÓHOLICO DE piper peltatum L (SANTA MARIA), EN RATAS ALBINAS DIRIGIDO POR: BACH. MENDOZA VALDIVIA, HUGO GERARDO BACH. ASTETE NÚÑEZ, BENEDICTA Características de físicas de las heces Día experimental: 23/06/21 Color: color que poseen las heces. Grupo de experimentación: G2 Aspecto: homogéneo, heterogéneo. Tratamiento y dosis: 1 ml de H2O destilada + 1ml aceite de ricino Otros: presencia de sangre, moco etc.Tipo de heces: Dura, blanda, semilíquida y Evaluación de actividad antidiarreica líquida Rata 1 2 3 4 Hora de administración del aceite 5:00 am 5:04 am 5:06 am 5: 10 am de ricino Hora de la primera deposición 5:32 am, 6:32 am, 6:34 am 6.39 am Peso de las heces después de 4h 3.6gr 3.8 gr 3.5gr 3.9 gr Frecuencia de deposiciones 6:32 6: 52 8:12 9:28 6:32 6:55 am 8:14 9:30 6:34 6:55 7:20 9: 12 6:39 7:35 8am 9:33 (horas) am am am am am am am am am am am Tipo de heces Dura y Aplan semilí Liqu Dura blandas semilí liquid Dura bland semilí liquid bland semilí liquid liquidas Alargad adas quida idas y quida a y as quida a a quida as a y alarga s alarg s bland da adas as Color Negras Marro Brillos brill Negra Negras brillan brillo marro marró marró marró Negr marró Marró marrón nes o oso s tes so nes n n n as n n verdu sco Aspec Homog Homo hetero hete homogé heter heter Hom Hom heter heter heter heter heterog Características de físicas to éneo géneo géneo rogé Homo neas ogéne ogén ogén ogén Hom ogén ogén ogén ogén éneo de las heces neo génea o eo eo eo ogén eo eo eo eos eo Otros normal Aceito moco esp Norm Aceitos Sang Moc norm abun Aceit Aceit aceit Espu Abun Espum sa umo al as uinole o al dante osas, osa, osas mosa dante osa, sa ntas con abun liquid , , liquidas sang dante as abun liquid re dante a FICHA 2. Resultado del efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de piper peltatum l (santa maría), en ratas albinas Día 23 del grupo G2 28 FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA FICHA DE RESULTADOS EFECTO ANTIDIARREICO DEL EXTRACTO HIDROALCÓHOLICO DE piper peltatum L (SANTA MARIA), EN RATAS ALBINAS DIRIGIDO POR: BACH. MENDOZA VALDIVIA, HUGO GERARDO BACH. ASTETE NÚÑEZ, BENEDICTA Características de físicas de las heces Día experimental: 24/06/21 Grupo de experimentación: G3 Color: color que poseen las heces. Tratamiento y dosis: Loperamida 0.0068 mg + 1ml de aceite de ricino Aspecto: homogéneo, heterogéneo.Otros: presencia de sangre, moco etc. Evaluación de actividad antidiarreica Tipo de heces: Dura, blanda, semilíquida y líquida Rata 1 2 3 4 Hora de administración del 5:00 am 5:04 am 5:06 am 5: 10 am aceite de ricino Hora de la primera 5:55 am, 6:32 am, 6:34 am 6.38 am deposición Peso de las heces después 2gr 2.4 gr 2.2gr 2.35gr de 4h Frecuencia de deposiciones 5:55 am 9:28 am 6:32 8:14 am 9:30 6:34 am 7:20 am 6:38 8:17 am 9:33 am (horas) am am Tipo de heces blanda y Blandas blandas blanda semilíq Blanda y semilíquid blanda semilíqu semilíquida Alargada y uida alargadas a idas s alargad a Color Negras Brilloso Negras brillantes brilloso marrones marrón Negras marrone marrón s Características de Aspe Homogéneo Homogé Homog heterogé heterog Homogéne Homogén heterog Homogé Homogéne físicas de las heces cto neo éneas neo éneo o eo éneo neo oOtros Espumo aceitosa normal aceitosas normal aceitosa espumosa sa aceitos a FICHA 3. Resultado del efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de piper peltatum l (santa maría), en ratas albinas Día 24 del grupo G3 29 FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA FICHA DE RESULTADOS EFECTO ANTIDIARREICO DEL EXTRACTO HIDROALCÓHOLICO DE piper peltatum L (SANTA MARIA), EN RATAS ALBINAS DIRIGIDO POR: BACH. MENDOZA VALDIVIA, HUGO GERARDO BACH. ASTETE NÚÑEZ, BENEDICTA Día experimental: 25/06/21 Características de físicas de las heces Grupo de experimentación: 1 G4 Color: color que poseen las heces. Tratamiento y dosis: 1 ml d/conc. De 100 mg/kg del extracto “Piper peltatum” + 1ml de aceite de ricino Aspecto: homogéneo, heterogéneo. Otros: presencia de sangre, moco etc. Evaluación de actividad antidiarreica Tipo de heces: Dura, blanda, semilíquida y líquida Rata 1 2 3 4 Hora de administración del 5:00 am 5:04 am 5:06 am 5: 10 am aceite de ricino Hora de la primera deposición 5:55 am, 6:32 am, 6:34 am 6.37 am Peso de las heces después de 3gr 3.1gr 2.9gr 3.2gr 4h Frecuencia de deposiciones 5:55 7:12 8:28 am 6:32 7 14 am 8:14 am 6:34 am 7:20 am 6:37 7:35 am 9:50 (horas) am am am am am: Tipo de heces Dura y semilíq Liquidas Dura blandas Semilíquid Dura y semilíquida blanda semilíq liquid Alargad uida y as alargadas uidas as a alarga da Color Negras brilloso Brilloso Negra Negras Brillantes marrones marrón Negras marrón marro s nes Aspe Homog hetero Heterogé Homo homogé Heterogén Homogéne Homogéne heterog heterog Características de cto éneo géneo neo génea neas eo o o éneo éneo Heter físicas de las heces s ogéne o Otros normal espum Espumos Norm aceitos espumosa normal aceitosas normal aceitos Espu osa a al as a mosa FICHA 4. Resultado del efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de piper peltatum l (santa maría), en ratas albinas Día 25 del grupo 1G4 30 FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA FICHA DE RESULTADOS EFECTO ANTIDIARREICO DEL EXTRACTO HIDROALCÓHOLICO DE piper peltatum L (SANTA MARIA), EN RATAS ALBINAS DIRIGIDO POR: BACH. MENDOZA VALDIVIA, HUGO GERARDO BACH. ASTETE NÚÑEZ, BENEDICTA Características de físicas de las heces Día experimental: 26/06/21 Color: color que poseen las heces. Grupo de experimentación: 2 G5 Aspecto: homogéneo, heterogéneo. Tratamiento y dosis: 1 ml d/conc. De 200 mg/kg del extracto “Piper peltatum” + 1ml de aceite de ricino Otros: presencia de sangre, moco etc.Tipo de heces: Dura, blanda, semilíquida y Evaluación de actividad antidiarreica líquida Rata 1 2 3 4 Hora de administración 5:00 am 5:04 am 5:06 am 5: 08 am del aceite de ricino Hora de la primera 5:55 am, 6:32 am, 6:34 am 6.39 am deposición Peso de las heces 2.2gr 2.5gr 2.2gr 2.6gr después de 4h Frecuencia de 5:55 am 8:28 am 6:32 am 8:14 am 6:34 am 7:20 am 6:39 am 9:50 am: deposiciones (horas) Tipo de heces Dura y Alargada blandas Dura y Blandas Dura y semilíquid blanda semilíquid alargada alargadas a as Color Negras verdusco Negras Marrones marrones Marrón Negras Marrones con con con manchas manchas manchas verdes verdes amarillent Características de a físicas de las heces Aspecto Homogé homogéne Homogénea Homogén Homogéne Homogén Homogéneneo as s eas o eo o Homogén eas Otros Normal blandas normal blandas normal blandas blandas semilíquid as FICHA 5. Resultado del efecto antidiarreico del extracto hidroalcohólico de piper peltatum l (santa maría), en ratas albinas Día 26 del grupo 2G5 31 Anexo B. Matriz de Consistencia. Formulación del Problema Objetivos Hipótesis Variables Diseño metodológico Problema General Objetivo General Hipótesis General Independiente: Tipo de Investigación - ¿El extracto hidroalcohólico - Determinar el efecto antidiarreico El extracto hidroalcohólico de la Extracto Aplicativo-inductivo. de la planta Piper peltatum L del extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L (santa maría) hidroalcohólico de la (santa maría) posee algún planta Piper peltatum L (santa maría) presentara efectos antidiarreicos en planta Piper peltatum Diseño de la efecto antidiarreico en ratas en ratas albinas. las ratas albinas. L (santa maría). investigación albinas? Diseño experimental de Dependiente: corte longitudinal. Problemas específicos Objetivos Específicos Hipótesis Específica Efecto antidiarreico en - ¿Existen metabolitos - Identificar los metabolitos - El extracto hidroalcohólico de la animales en ratas Población Muestra secundarios el extracto secundarios en el extracto planta P. peltatum L (Santa María) albinas. La población vegetal hidroalcohólico de la planta hidroalcohólico de la planta Piper tiene metabolitos secundarios que estará constituida por Piper peltatum L (santa maría) peltatum L (Santa María) que posean poseen efecto antidiarreico. las hojas de la planta que posean efecto antidiarreico? efecto antidiarreico. Piper peltatum L "Santa - Determinar el efecto antidiarreico - Hay mayor efecto antidiarreico del María". - ¿A qué concentración el del extracto hidroalcohólico de la extracto hidroalcohólico de la planta extracto hidroalcohólico de la planta Piper peltatum L (santa maría) P. peltatum L (santa maría) a mayor La población animal planta Piper peltatum L (santa a diferentes concentraciones. concentración. estará constituida por maría) posee mejor efecto - Comparar el efecto antidiarreico - Hay diferencias significativas al 20 Ratas albinas. antidiarreico? del extracto hidroalcohólico de la comparar el efecto el efecto - ¿Existen diferencias planta P. peltatum L (santa maría) antidiarreico del extracto significativas entre las entre las diferentes concentraciones. hidroalcohólico de la planta Piper concentraciones del extracto - Comparar el efecto antidiarreico peltatum L (santa maría) entre las hidroalcohólico de la planta del extracto hidroalcohólico de la diferentes concentraciones. Piper peltatum L (santa maría)? planta P. peltatum L (santa maría) - Hay diferencias estadísticamente - ¿Hay diferencias entre el grupo control y el grupo significativas al comparar el efecto estadísticamente significativas experimental. antidiarreico del extracto al comparar el efecto hidroalcohólico de la planta P. antidiarreico del extracto peltatum L (santa maría) del grupo hidroalcohólico de la planta control con el grupo experimental. Piper peltatum L (santa maría) del grupo control con el grupo experimental ?. 32 Anexo C: Operacionalización de las variables. VARIABLES Tipo de DEFINICIÓN DEFINICIÓNvariable CONCEPTUAL OPERACIONAL DIMENSIONES INDICADORES VALOR FINAL CRITERIOS VARIABLE Cualitativo y Un extracto sólido El extracto Calidad del Características Olor, color, Calidad del INDEPENDIENTE Longitudinal obtenido hidroalcohólico de extracto organolépticas. sabor y extracto extrayendo los la planta Piper hidroalcohólico aspecto. hidroalcohólico Extracto principios solubles peltatum L (santa de hojas de Densidad relativa. de hojas de hidroalcohólico de del fármaco con maría) será Piper peltatum Piper peltatum la planta Piper alcohol y agua, utilizado como L. Índice de refracción. L. peltatum L (santa seguido de la tratamiento maría) evaporación de la antidiarreico en pH solución. las ratas albinas. Sólidos totales VARIABLE Cuantitativo Es el efecto que A los animales se Inhibición de Tiempo de la Horas/minutos Evidencia de DEPENDIENTE y producen los les inducirá deposiciones primera deposición inhibición de Longitudinal medicamentos diarrea para ser diarreicas fecal. deposiciones Efecto antidiarreico antidiarreicos tratados con el diarreicas en ratas albinas. utilizados para extracto Frecuencia de Número de aliviar la diarrea. hidroalcohólico de deposiciones. veces. la planta Piper peltatum L (santa Peso. Kg/mg maría) y poder determinar su Tipo de heces. Dura, blanda, efecto semilíquida, antidiarreico. líquida. Características Color, aspecto físicas. y otros. 33 Anexo D. Documentos obtenidos para desarrollo de la investigación 34 35 36 Anexo E. Evidencias fotográficas del trabajo de campo. TAXONOMIA Reino: Plantae División: Magnoliophyta Clase: Magnoliopsida Orden: Piperales Familia: Piperaceae Género: Piper Especie: Piper peltatum L. FOTO 2. Hoja de Piper peltatum L (SANTA MARIA) y su taxonomía FOTO 1. Cosecha de la hoja Piper peltatum L (SANTA MARIA) 37 FOTO: 3: Secado de la hoja Piper peltatum L (SANTA MARIA).10 kg FOTO 4: trituración de la hoja Piper peltatum L (SANTA MARIA) 38 FOTO 5: extracto hidroalcohólico de piper peltatum l (santa María), al 100% y al 200% 39 Foto 6, 7 y 8: Presentación de los materiales y reactivos 40 Foto 9: reactivos 41 Foto 10 Y 11: Resultado de la marcha fitoquímica : 42 FOTO DEL RESULTADO DEL EFECTO ANTIDIARREICO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE PIPER PELTATUM L (SANTA MARÍA), EN RATAS ALBINAS Foto 12, 13,14, Y 15: Preparación del material farmacológico (loperamida) 43 FOTO 16, 17 Y 18: Administración de cada sustancia a las ratas albinas de acuerdo al grupo y pesado de las heces 44