FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ACTIVIDAD CICATRIZANTE DEL EXTRACTO
HIDROALCOHÓLICO DE Calycophyllum spruceanum
(Capirona de bajío) EN RATONES ALBINOS
TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO
FARMACÉUTICO
AUTORES:
Bach. ZEVALLOS ESCALANTE, RUTH VIOLETA
Bach. LABAJOS TANANTA, GINA ISABEL
ASESOR:
Dr. VÍLCHEZ CÁCEDA, HÉCTOR ALEXANDER
LIMA – PERÚ
2022
i
DEDICATORIA
A mi padre Dios que siempre está conmigo
por regalarme esperanza en los momentos
de dificultad.
Ruth Violeta Zevallos Escalante
A Dios quien fue una guía importante en mi
carrera y no me dejó rendirme en tiempos
difíciles. A mi madre quien siempre me
alentó a seguir mis sueños y me dio su
fortaleza para seguir adelante. A mi
esposo, mi hija, mi padre y mi hermana,
que estuvieron a mi lado brindándome su
apoyo incondicional en esta etapa
importante de mi vida.
Gina Isabel Labajos Tananta
ii
AGRADECIMIENTO
A la Universidad María Auxiliadora por acogernos como suyos, para poder culminar
con nuestros estudios el sueño anhelado por todo estudiante.
Al Doctor Héctor Alexander VÍlchez Cáceda por su inagotable paciencia, apoyo,
disposición, consejos para alentarnos a seguir y culminar con lo emprendido.
A mi esposo e hijos porque junto a ellos aprendí a vivir esta increíble aventura y a
todos nuestros familiares que nunca dejaron de apoyarnos gracias por vernos
crecer.
Bach. Ruth Violeta Zevallos Escalante
Bach. Gina Isabel Labajos Tananta
iii
Índice General
Págin
as
Resumen ix
Abstract x
I. INTRODUCCIÓN 1
II. MATERIALES Y MÉTODOS 7
2.1 Enfoque y diseño de la investigación 7
2.2 Población, muestra y muestreo 7
2.3 Variables de investigación 8
2.4 Técnicas e instrumentos de recolección de datos 9
2.5 Proceso de recolección de datos 9
2.6 Métodos de análisis estadístico 14
2.7 Aspectos éticos 14
III. RESULTADOS 15
IV. DISCUSIÓN 31
4.1 Discusión de resultados 31
4.2 Conclusiones 34
4.3 Recomendaciones 35
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 36
ANEXOS 45
iv
Índice de Tablas
Tabla 1. Determinación del índice afrosimétrico 15
Tabla 2. Determinación del pH del extracto 15
Tabla 3. Solubilidades del extracto 16
Tabla 4. Marcha fitoquímica 17
Tabla 5. Actividad cicatrizante del grupo tratado con extracto
hidroalcohólico de capirona al 2,5 % 18
Tabla 6. Actividad cicatrizante del grupo tratado con extracto
hidroalcohólico de capirona al 5 %. 18
Tabla 7. Actividad cicatrizante del grupo tratado con extracto
19
hidroalcohólico de capirona al 10 %.
Tabla 8. Actividad cicatrizante del grupo tratado con extracto
hidroalcohólico de capirona al 20 %. 19
Tabla 9. Actividad cicatrizante del grupo tratado con Bepanthen (control
positivo) 20
Tabla 10. Actividad cicatrizante del grupo sin tratamiento (control negativo) 20
Tabla 11. Comparación de la cicatrización total de los diferentes grupos
21
de tratamiento
Tabla 12. Ficha de registro del peso en gramos de los ratones 22
Tabla 13. Estadística descriptiva 23
Tabla 14. Prueba de Normalidad 24
Tabla 15. Análisis de varianza (ANOVA) 25
Tabla 16. Diferencia honestamente significativa de Tukey 27
Tabla 17. Subconjuntos homogéneos 29
v
Índice de Figuras
Figura 1. Especie vegetal 56
Figura 2. Recolección de la corteza de Calycophyllum spruceanum
(capirona de bajío). 56
Figura 3. Secado de la corteza de Calycophyllum spruceanum (capirona
57
de bajío).
Figura 4. Pesado de la corteza de Calycophyllum spruceanum (capirona
de bajío). 57
Figura 5. Molienda de la corteza de Calycophyllum spruceanum
(capirona de bajío). 58
Figura 6. Prueba de solubilidad de Calycophyllum spruceanum (capirona
de bajío). 58
Figura 7. Marcha fitoquímica de Calycophyllum spruceanum (capirona
de bajío) 59
Figura 8. Maceración y extracción del principio activo. 59
Figura 9. Reducción del principio activo. 60
Figura 10. Melcocha en estado de gel. 60
Figura 11. Proceso de secado de la melcocha. 61
Figura 12. Obtención del extracto hidroalcohólico de capirona a
diferentes concentraciones. 61
Figura 13. Proceso de selección y aclimatación de los especímenes 62
Figura 14. Administración de Ketamina para el anestesiado de los
especímenes. 62
Figura 15. Depilación del lomo del ratón. 63
Figura 16. Medición y marcación del área (1 cm) de los especímenes. 63
Figura 17. Realización de la incisión en el lomo del ratón. 64
Figura 18. Administración vía tópica del extracto hidroalcohólico de
capirona a los diferentes grupos de estudio. 64
Figura 19. Realización de la prueba del dinamómetro 65
vi
Índice de Gráficos
Gráfico 1. Cajas y Bigotes de los grupos en tratamiento 30
vii
Índice de Anexos
Anexo A. Matriz de consistencia 46
Anexo B. Operacionalización de la variable 47
Anexo C. Instrumento de recolección de datos 48
Anexo D. Clasificación taxonómica 54
Anexo E. Constancia de bioterio de productos biológicos 55
Anexo F. Evidencias fotográficas del trabajo de campo 56
viii
RESUMEN
Objetivo: Evaluar  la  actividad  cicatrizante  del  extracto  hidroalcohólico  de
Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío) en ratones albinos Mus musculus.
Métodos: Se realizó el método de estudio experimental. La muestra fue
recolectada del departamento de Madre de Dios, provincia de Tambopata km 8
carretera de Infierno; con siete grupos en total y una muestra de 42 ratones Mus
musculus var. Albinos Balb/c/CNPB. Se aplicó el método tensiométrico (Vaisberg),
el análisis del test de cicatrización se realizó mediante instrumentos de recolección
de datos con el programa estadístico SPSS 26.
Resultado: El extracto hidroalcohólico presentó actividad cicatrizante en
concentraciones de 5 % y 10 % similares a las del grupo de control positivo
(Bepanthen) a diferencia de los grupos 2,5 %, 20 % y control negativo que
presentaron una menor actividad cicatrizante.
Conclusiones: Los metabolitos secundarios detectados en el extracto
hidroalcohólico de la corteza de capirona fueron flavonoides, taninos y compuestos
quinónicos, los que en conjunto serían los responsables de brindar la actividad
cicatrizante. La actividad cicatrizante del extracto hidroalcohólico de la corteza de
capirona al 5 % fue similar al estándar de marca de referencia o control positivo
(crema Bepanthen) en ratones albinos Mus musculus.
Palabras claves: Calycophyllum spruceanum, flavonoides, taninos, actividad
cicatrizante.
ix
ABSTRACT
Objective: To  evaluate  the  healing  activity  of  the  hydroalcoholic  extract  of
Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío) in Mus musculus albino mice.
Methods: The experimental study method was carried out. The sample was
collected in the department of Madre de Dios, province of Tambopata km 8 on the
highway to Infierno; with seven groups in total and a sample of 42 mice Mus
musculus var. albinos Balb/c/CNPB. The tensiometric method (Vaisberg) was
applied, the healing test analysis was performed using data collection instruments
with the SPSS 26 statistical program.
Results: The hydroalcoholic extract presented healing activity at concentrations of
5 % and 10 % similar to those of the positive control group (Bephantem) in contrast
to the 2,5 %, 20 % and negative control groups which presented lower healing
activity.
Conclusions: The secondary metabolites detected in the hydroalcoholic extract of
the capirona bark were flavonoids, tannins and quinone compounds, which together
were responsible for providing the healing activity. The wound-healing activity of the
5 % hydroalcoholic extract of capirona bark was similar to the reference brand
standard or positive control (Bepanthen cream) in Mus musculus albinos mice.
Keywords: Calycophyllum spruceanum, flavonoids, tannins, healing activity.
x
I. INTRODUCCIÓN
Tanto las heridas agudas como las heridas crónicas constituyen un importante
problema de salud pública lo cual impacta en la calidad de vida de los pacientes
que las desarrollan e implican un notable gasto económico para el Sistema Nacional
de Salud1.
En el caso de Estados Unidos, se reporta que las heridas crónicas afectan a 6,5
millones de personas aproximadamente, lo que representa un gasto anual de 25
billones de dólares2. En Europa, se estima una alta prevalencia de úlceras por
presión llegando hasta un 22 %.
En Perú, se reportó que entre 11,4 y 16 % de pacientes hospitalizados desarrollaron
úlceras por presión3. Por otro lado, en un estudio descriptivo realizado con registros
electrónicos en 3 904 pacientes hospitalizados el 24,6 % (962) presentaron un alto
riesgo de úlceras por presión al momento de la admisión hospitalaria4.
Perú reporta 1,109 plantas medicinales de las cuales 980 especies provienen de la
Amazonía5. Los árboles amazónicos del género Calycophyllum, especialmente
Calycophyllum spruceanum, es usado en forma tradicional desde la antigüedad6.
En los tiempos modernos se ha ido estudiando y demostrando sus propiedades
medicinales, cicatrizante entre muchas otras7.
Según la situación problemática planteada se formuló la siguiente pregunta:
- ¿Cuál es la actividad cicatrizante del extracto hidroalcohólico de
Calycophyllum spruceanum (capirona del bajío) en ratones albinos Mus
Musculus?.
Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío), es un árbol de 20 a 35 m de altura,
de 50 cm a 1,20 m de diámetro, con un tallo recto, cilíndrico y regular. Su corteza
es lisa, color verde, lustroso, y uniforme8. Sus hojas son opuestas y pequeñas con
una longitud de 5 a 10 cm y ancho de 3 a 5 cm9.
11
Calycophyllum spruceanum, está distribuida por toda la selva del Perú, de Bolivia y
Brasil, sin sobrepasar los 1200 msnm10. Se le encuentra en hábitat de alta
pluviosidad, pero también en zonas con estaciones secas marcadas11.
Los usos tradicionales de la especie vegetal que se conocen son: antidiabético,
antioxidante, antiséptico, astringente, bactericida, cicatrizante, insecticida, etc12.
Presenta acción anti-Leishmania13. Reporta la presencia de iridoides y
secoiridoides en su corteza. Los iridoides presentan una actividad baja contra
Trypanosoma cruzi 14.
Los Shipibo-Conibo de la comunidad nativa Nuevo Saposoa del departamento de
Ucayali usan la capirona para el tratamiento de manchas, cortes en la piel como
cicatrizante, descensos vaginales, en lavados vaginales y “sobreparto”15.
El pueblo ashéninka de la comunidad Dulce Gloria, emplean tradicionalmente la
capirona como cicatrizante16. Los nativos del río Apaporis (Colombia), toman un
cocimiento de la corteza de Calycophyllum obovatum en las parasitosis17.
La piel se compone de tres capas (epidermis, dermis e hipodermis) con composición
y funciones específicas18, considerada la primera barrera de protección del
organismo19.
12
Dentro de sus funciones se encuentran: protectora, termoreguladora, síntesis de
vitamina D, sensorial, vigilancia inmunológica, producción de melanina y reguladora
del equilibrio hidro-electrolítico20,21. La dermis tiene una capa superficial (papilar) y
otra profunda (reticular)22, la hipodermis contiene tejido adiposo y terminaciones
nerviosas23.
Entre sus componentes tenemos:
Células de Langerhans que representan una barrera inmunológica24, las células de
Merkel que detectan estímulos sensoriales25,26, la dermis papilar que contiene
paquetes vasculonerviosos27, y la dermis reticular que tiene vasos sanguíneos y
tejido conjuntivo28.
La cicatrización consta de 5 fases:
- Fase I: Hemostasia: Su propósito es detener el sangrado29,30.
- Fase 2: Fase inflamatoria/ defensiva: En esta fase, los neutrófilos ingresan a
la herida para la destrucción de los microorganismos31,32.
- Fase 3: Fase de proliferación: Cuyo propósito es llenar y cubrir la lesión33.
- Fase 4: Fase de maduración: En esta fase adquiere fuerza y flexibilidad
lentamente, durando entre 21 días y dos años34.
- Fase 5 - Remodelación o contracción: Es la etapa final, empieza al mismo
tiempo que la fibroplasia y continúa por meses35.
Las terapias tradicionales están basadas en compuestos de origen natural
(extractos de plantas, miel y larvas) 36.
Entre los antecedentes al desarrollo del trabajo de investigación se dispone de los
siguientes:
Roca M, et al (2019), determinaron la actividad bactericida y fungicida de tres tipos
de extractos de hoja y corteza de capirona (Calycophyllum spruceanum (Benth)
Hook f. ex Schumann). Los resultados mostraron que los tres tipos de extractos
(acuoso, etanólico, metanólico) de corteza y hojas del árbol de Calycophyllum
spruceanum evidenciaron una fuerte actividad bactericida. El extracto metanólico
de corteza mostró además poca actividad antifúngica 37.
13
Olivera L, et al (2018), evaluaron el efecto cicatrizante del extracto hidroalcohólico
al 70 % de los frutos de Morinda citrifolia (Noni) a diferentes concentraciones en
incisiones periodontales inducidas en ratas albinas de raza Holtzman. En
conclusión, el extracto hidroalcohólico al 70 % a una concentración del 5 % mostró
actividad cicatrizante y redujo las incisiones gingivales al séptimo día de tratamiento
38.
Garibay E, et al (2018), determinaron el efecto antiinflamatorio del extracto
hidroalcohólico del fruto de Genipa americana (wito) en animales de
experimentación. En el resultado de los tres niveles de dosis del extracto (100
mg/Kg, 300 mg/Kg y 500 mg/Kg) evaluados, el que mostró mejor porcentaje de
eficacia en el efecto antiinflamatorio fue para el grupo de dosis 500 mg/Kg (29,4 %).
Concluyendo, que el extracto hidroalcohólico de Genipa americana (wito) tiene
efecto antiinflamatorio en ratas 39.
Peixoto H, et al (2018), desarrollaron el artículo científico “Calycophyllum
spruceanum (Benth.), el árbol de la juventud amazónica prolonga la longevidad y
mejora la resistencia al estrés en Caenorhabditis elegans. Proporcionaron el primer
paso hacia una evidencia basada en la ciencia de los efectos beneficiosos de
Calycophyllum spruceanum en la promoción de la longevidad y en la modulación
de los marcadores relacionados con la edad. Los resultados mostraron que el
extracto de Calycophyllum spruceanum pudo mejorar la resistencia al estrés y
extender la vida útil junto con la atenuación de los marcadores asociados con el
envejecimiento en Caenorhabditis elegans 40.
Barros da Silva A, et al (2018), investigaron el artículo científico “Calycophyllum
spruceanum (Benth.) mejora la inflamación aguda en ratones. Evaluaron in vivo las
actividades antinociceptivas y antiinflamatorias del extracto hidroalcohólico de la
corteza de Calycophyllum spruceanum (Benth.) Hook. f. ex K. Schum. El extracto
hidroalcohólico de Calycophyllum spruceanum mostró un efecto antinociceptivo,
reduciendo el número de retorcimientos inducidos por ácido acético, también inhibió
14
el edema de la pata. Concluyendo, que el extracto hidroalcohólico de
Calycophyllum spruceanum muestra efectos analgésicos y antiinflamatorios en
ratones sin causar una toxicidad aguda aparente41.
Santos A, et al (2016), Detallaron una investigación  sobre  el  “Estudio  de  la
botá nica, etnofarmacología y la química de Calycophyllum spruceanum (Benth)
Hook f. ex K. Schum.” Los resultados mostraron que la especie conocida como
mulateiro es una Rubiaceae amazónica. Utilizada en etnomedicina en el tratamiento
de enfermedades gástricas, dermatológicas, metabólicas, del aparato
genitourinario y en la prevención del envejecimiento. En conclusión el mulateiro
posee metabolitos como taninos, fenoles y secoiridoides con actividad anti
trypanosoma. Es utilizada en diversas enfermedades, presentando actividad
antioxidante y fotoprotectora42.
Este estudio avalará científicamente las propiedades medicinales de Calycophyllum
spruceanum (capirona de bajío) para poder considerarla una especie promisoria
medicinal, para el tratamiento de afecciones dérmicas y no solo como una especie
maderable de la región de Madre de Dios.
Asimismo, el uso de plantas medicinales ha hecho posible el aislamiento y
caracterización de principios activos con interés farmacológico, lo cual será
sumamente provechoso para la población debido a su carácter natural y
económico43, 44.
El objetivo general del estudio fue evaluar la actividad cicatrizante del extracto
hidroalcohólico de Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío) en ratones
albinos Mus musculus.
La hipótesis general del estudio fue: El extracto hidroalcohólico de Calycophyllum
 spruceanum (capirona de bajío) presenta efecto cicatrizante en ratones
albinos Mus musculus.
15
II. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 ENFOQUE Y DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
Enfoque: Cuantitativo.
Experimental: Porque se manipula la variable independiente y se confirma su
impacto en la variable dependiente45.
Explicativo: Su propósito es encontrar causalidades en eventos y permite
explicar los fenómenos y circunstancias.
Correlacional: Su finalidad es conocer la relación entre dos categorías o
conceptos.
Longitudinal: Se realizó con el propósito de analizar los cambios que ocurren
en diferentes momentos del estudio45.
2.2 POBLACIÓN, MUESTRA Y MUESTREO
La población animal estuvo conformada por 42 ratones Mus musculus Balb c
var. Albinos de sexo masculino, aproximadamente de 45 días de edad; con un
peso promedio de 20 – 40 g, obtenidos del bioterio de Instituto Nacional de
Salud, Centro Nacional de Productos Biológicos (INS) - Lima.
La población animal se dividió en 7 grupos, cada grupo estuvo conformado por
6 ratones.
La población vegetal estuvo constituida por 6 kilos de corteza de la especie
Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío) en el mes de Abril 2021,
procedentes del kilómetro 8 carretera a Infierno, provincia de Tambopata,
departamento de Madre de Dios a una altura de 205 m.s.n.m.
El muestreo fue de carácter intencional, no probabilístico.
16
La identificación de la muestra vegetal se realizó en la Universidad Amazónica
de Madre de Dios por el taxonomista Hugo Dueñas Linares. (ANEXO C)
Las cortezas, se envolvieron en papel Kraft y se embaló en una caja de cartón
con su respectivo rótulo, enviándolo a la ciudad de Cusco al laboratorio de
Tecnología e Ingeniería de Procesos Industriales, donde se procedió a eliminar
las sustancias extrañas presentes en el material vegetal, luego de la separación
de las impurezas se procedió a lavar la muestra vegetal con agua destilada,
cortando la corteza en virutas de 0,5 - 1 cm.
Las virutas fueron puestas a secar en un horno a 40 °C. por 10 días. Una vez
seca las virutas se procedió con la trituración y pulverización mediante el uso
de un mortero.
El muestreo fue aleatorizado, considerando la zona de recolección.
La muestra vegetal estuvo constituida por 2 kg de corteza seca pulverizada de
Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío).
Luego con la muestra pulverizada se procedió a realizar el macerado utilizando
4 litros de alcohol etílico al 70 %, se colocó en un envase ámbar con tapa rosca
limpio, seco y desengrasado, donde permaneció el macerado por 10 días y
cada 12 horas se realizó agitación, a continuación se realizó la filtración
utilizando papel Whatman Grado 1, el extracto se recibió en 03 fuentes de
vidrio, a continuación se llevó al horno a 40 °C hasta obtener un peso constante,
obteniéndose el extracto seco (melcocha).
2.3 VARIABLES DE INVESTIGACIÓN
En el siguiente estudio se presentará como variable principal nuevas
oportunidades de tratamiento, es una variable cuantitativa y su escala de
medición es longitudinal.
Variable independiente: Extracto hidroalcohólico de Calycophyllum
spruceanum (capirona de bajío).
17
Definición conceptual: La concentración del extracto es extraída por el etanol,
que posee una composición química que le proporciona una acción
farmacológica útil en la terapéutica.
Definición operacional: Extracto elaborado por principios activos que sintetizan
los metabolitos secundarios.
Variable dependiente: Efecto cicatrizante en ratones albinos.
Definición conceptual: El diámetro de cicatrización es el proceso de reparación
y sustitución de células lesionadas.
Definición operacional: La actividad cicatrizante se evaluó mediante el Método
tensiométrico (Vaisberg) inducidos en lomo de ratones albinos.
2.4 TÉCNICAS E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS
La técnica que se utilizó en el estudio es la observación, y el instrumento de
recolección de datos fue mediante el uso de fichas en las que se recepcionó
los resultados de la prueba de solubilidad, marcha fitoquímica y fichas de
recolección de datos de la actividad cicatrizante en heridas incisas de ratones
albinos según Alcedo C (2018)46.
2.5 PROCESO DE RECOLECCIÓN DE DATOS
2.5.1 Análisis previo del extracto hidroalcohólico
Se realizó en el laboratorio de Tecnología e Ingeniería de procesos
Industriales en la ciudad de Cusco. Se hicieron las siguientes pruebas:
a) Índice afrosimétrico: Se colocó 1,00 gramo del extracto seco en
un tubo de ensayo y se le agregó 6 ml de agua destilada, se agitó
suavemente con el tubo cerrado por 1-2 minutos y se esperó
durante 5 minutos.
b) Determinación de pH: Se colocó 0,5 gramos del extracto seco en
un tubo de ensayo y se le agregó 5 mililitros de agua destilada, se
18
procedió a agitar hasta que se homogenizó. Este procedimiento se
realizó con ayuda del pH metro modelo pH-920 con ATC,
CHEMILABOR® debidamente calibrado. Se procedió a limpiar la
punta del electrodo con agua destilada, para evitar errores en la
lectura. Este procedimiento se llevó a cabo a temperatura
ambiente.
c) Prueba de solubilidad: Se utilizó el extracto seco (melcocha), con
la ayuda de una bagueta se tomó 0,3 g de la muestra seca,
colocándola en cada tubo de ensayo, a los cuales se les agregó 2
ml de los siguientes solventes: etanol de 96 %, etanol de 70 %,
agua destilada, acetona, benceno, cloroformo.
2.5.2 Marcha fitoquímica
Según el método de Olga Lock47 se identifica los metabolitos a través de
cambios de color y formación de precipitados denominado marcha
fitoquímica.
Para la identificación de flavonoides se utilizan tres tipos de reacciones:
- Agregando 3 gotas de tricloruro férrico en un tubo de ensayo con 2
ml de agua destilada.
- Agregando 3 gotas de tricloruro de aluminio al 2 % más 2 ml de agua
destilada y
- Agregando 5 gotas de acetato de plomo.
Para la identificación de alcaloides se utilizaron dos tipos de reacciones:
- Como reactivo se utilizó Dragendorff agregando 2 gotas ácido
clorhídrico al 4 % con 2 ml de agua destilada.
- La reacción de Stas Otto agregando 3 gotas de ácido sulfúrico al 80
%, con 5 gotas de solución de dicromato de potasio.
19
Para la identificación de antraquinonas y naftoquinonas se usó Bontrager,
con 2 ml de muestra y 2 ml de agua destilada, agregando tres gotas de
hidróxido de sodio al 5 % con 2 gotas de bencina.
Para identificación de saponinas se utilizó el método de la espuma, con 2
ml de muestra y 10 ml de agua destilada en tubo cerrado se agita por unos
dos minutos, se espera la presencia de espuma.
Para compuestos fenólicos se utilizó el reactivo Shinoda, diluido en 2
gotas de ácido clorhídrico concentrado con dos pedacitos de cinta de
magnesio metálico por 5 minutos.
2.5.3 Actividad cicatrizante método tensiométrico
Actividad cicatrizante: Vaisberg et al52.
Método: lesión inducida en lomo de ratón, se realizó en la veterinaria
“Clinican”.
a) Preparación de los extractos a ensayar
Se trabajó con 4 fiolas en las cuales se agregó: 2,5 g, 5 g, 10 g, y 20
g del extracto seco a los cuales se les agregó etanol al 70 % c.s.p.
100 ml.
b) Análisis farmacológico
- Distribución de la muestra
Los animales utilizados para esta prueba farmacológica fueron un
lote de 42 ratones albinos machos (Mus musculus), de 45 días de
edad, con un peso entre 20 a 40 gramos, los cuales fueron
distribuidos al azar en 7 grupos de 6 animales con peso similar48.
- Ambientación
Luego de ser pesados, acondicionados e identificados mediante
números en las orejas. Se los colocó en sus respectivas cajas de
madera con mallas protectoras, con lapsos de fotoperiodos de 12
20
horas para la luz y 12 horas para la oscuridad y una etapa de
adaptación de 7 días. Se les administró alimento balanceado y
agua clorada en horario diurno 2 veces al día.
- Depilación
Terminados los días de aclimatación, se procedió a anestesiar a
los ratones administrándoles una dosis de ketamina 70 mg/kg vía
subcutánea en la región interescapular paralela al eje vertebral,
previa desinfección con alcohol del área por depilar. Luego se
procedió a depilar con agua tibia y crema de depilación49.
- Incisión
Esta técnica se llevó a cabo de acuerdo al método propuesto por
Gonzales-Quevedo50 . Se realizó una incisión de 1 cm de longitud,
con una hoja de bisturí Nº 21, esta incluyó piel y tejido celular
subcutáneo. Pasados diez minutos del trauma se observó las
fases de coagulación y hemostasia en cada espécimen, este
procedimiento se ejecutó hasta completar todos los ratones del
estudio51.
- Aplicación
En el área de la herida se aplicó un hisopo empapado con el
extracto hidroalcohólico de Calycophyllum spruceanum (capirona
de bajío) cada 12 horas, a diferentes concentraciones (2.5 %, 5
%, 10 % y 20 %) en cada grupo experimental, excepto el grupo
con el control positivo al cual se le administró Bepanthen y el
grupo con el control negativo al cual no se le aplicará nada.
Asimismo se los clasificó en diferentes grupos:
Grupo I: Ratones tratados con extracto hidroalcohólico al 2,5 % de
corteza de capirona de bajío.
21
Grupo II: Ratones tratados con extracto hidroalcohólico al 5 % de
corteza de capirona de bajío.
Grupo III: Ratones tratados con extracto hidroalcohólico al 10 % de
corteza de capirona de bajío.
Grupo IV: Ratones tratados con extracto hidroalcohólico al 20 % de
corteza de capirona de bajío.
Grupo V: Ratones sin tratamiento (control negativo).
Grupo VI: Ratones tratados con Bepanthen (control positivo).
Grupo VII: Ratones con piel intacta (blanco).
Se observó y registró las diferentes etapas del proceso de
cicatrización en cada grupo, como son: sangrado, cambio de color,
agregación, degranulación, formación de costra, retracción de la
costra, exfoliación de todo el perímetro de la costra y desprendimiento
de la costra.
c) Actividad cicatrizante método tensiométrico:
La técnica operatoria se realizó de acuerdo con el método propuesto
por Vaisberg et al 52, el equipo fue un dinamómetro el cual se
fundamenta: “En la adición de la fuerza de tensión (medida en
gramos), necesaria para abrir una herida de 1 cm. de longitud
producidas en el lomo de ratón”. Después de finalizar el tratamiento,
los animales fueron sacrificados mediante sobredosis de anestesia e
inmediatamente se procedió a medir la fuerza de tensión.
Con el dinamómetro que fue adaptado con dos hilos de Nylon N⁰ 0,
que se sujetaron en ambos lados de la herida, uno de ellos fue llevado
a un punto fijo, mientras que el otro hilo se sujetó al extremo del
dinamómetro buscando provocar una fuerza opuesta. Una vez
realizada esta operación se aumentó progresivamente el peso en el
dinamómetro, hasta provocar la reapertura de la herida.
22
d) Interpretación de los resultados
Midiendo la resistencia de la cicatriz con el dinamómetro, se calculó
la fuerza tensión de la herida en gramos. Estos serán expresados
como datos descriptivos de frecuencia. El grupo que presente un
mayor promedio, presentará mejor efecto cicatrizante.
La eficacia de cicatrización, se calculó tomando como referencia los
gramos necesarios para abrir la cicatriz tratada, entre los gramos
necesarios para abrir la piel intacta, usando los datos obtenidos por el
método fuerza de tensión, aplicando la siguiente fórmula:
Eficacia de cicatrización= Gramos necesarios para abrir la cicatriz tratada X 100
Gramos necesarios para abrir la piel intacta
2.6. MÉTODOS DE ANÁLISIS ESTADÍSTICOS
Luego de la obtención de resultados de los análisis mencionados, se realizó
las evaluaciones mediante estadística descriptiva. Para la prueba de Hipótesis
se realizó una prueba ANOVA. Para las variables peso corporal y actividad
cicatrizante, se analizó mediante el test de Tukey. Todas las pruebas fueron
realizadas con una significancia de p < 0,05. Para el procesamiento de datos
se utilizó el programa estadístico SPSS versión 26 y Microsoft Excel versión
16.
2.7. ASPECTOS ÉTICOS
En la presente investigación se siguieron las normas éticas de la declaración
de Helsinki53. La ley 3040754. También se tomó en cuenta las
recomendaciones éticas del Instituto Nacional de Salud55.
23
III. RESULTADOS
3.1 De las pruebas del extracto hidroalcohólico
Tabla 1. Determinación del índice afrosimétrico
Índice afrosimétrico Resultados
Prueba de la espuma (Saponinas) +
Dónde: Ausencia (-) Leve (+) Moderado (++) Abundante (+++)
En la tabla 1, se muestra  el resultado del índice afrosimétrico, donde se
evidencia la leve presencia de espuma (saponinas).
Tabla 2. Determinación del pH del extracto hidroalcohólico desecado de
la corteza de capirona de bajío
Temperatura (°C) Resultados
Determinación del
pH 25 4,5
Dónde: ácido: <7 Neutro: 7  Básico: >7
En la tabla 2, se puede apreciar que el extracto hidroalcohólico desecado de
la corteza de capirona de bajío, presentó un pH de 4.5, lo que quiere decir
que el extracto es de naturaleza ácida.
24
Tabla 3. Prueba de solubilidad
SOLVENTES RESULTADOS
Agua destilada +++
Etanol 96 % +
Etanol 70 % +++
Acetona -
Cloroformo +
Benceno -
Donde: (-) Insoluble (+) Poco soluble (++) Soluble (+++) Muy soluble
En la tabla 3, se muestran los resultados de la prueba de solubilidad,
presentando como mejores solventes polares etanol al 70 % y agua destilada.
25
3.2 De la marcha fitoquímica
Tabla 4. Marcha fitoquímica del extracto hidroalcohólico desecado de
capirona de bajío
CONSTITUYENTES REACCIÓ
QUÍMICOS ENSAYO N
Reactivo FeCl3 2% +++
Flavonoides
Taninos Reactivo AlCI3 ++
Compuestos fenólicos
Reactivo Acetato de
Plomo +
Reactivo . Dragendorff ++
Alcaloides
Reactivo Otto ++
Antraquinonas
Naftoquinonas Reactivo Borntrager +++
Compuestos quinonicos
Dónde: (+++) Abundante  (++)   Moderado  (+)     Leve   (-)     Ausencia
En la tabla 4, se puede apreciar la marcha fitoquímica que se realizó con el extracto
hidroalcohólico de la corteza de capirona de bajío donde se determinó la presencia
importante de flavonoides, taninos, compuestos quinónicos, antraquinonas, y en
menor presencia se encontró alcaloides.
26
3.3 Actividad cicatrizante de los diferentes grupos con sus respectivos
tratamientos
Tabla 5. Actividad cicatrizante del grupo tratado con extracto
hidroalcohólico de capirona al 2,5 %
N CONCENTRACIÓN LONGITUD DE LA HERIDA (mm)
DIA 0 DIA 1 DIA 5 DIA 10 DIA 15
1 10,00 9,50 7,00 4,00 3,00
2 10,00 9,00 8,50 3,50 1,00
3 Extracto 10,00 9,50 9,00 3,50 2,00
hidroalcohólico
4 de capirona al 10,00 9,50 9,00 2,50 0,00
2,5 %
5 10,00 9,50 8,50 4,00 2,00
6 10,00 9,50 9,00 3,00 1,50
PROMEDIO 10,00 9,42 +/- DE 8,50 +/- 3,42 +/- 1,58 +/-
0,20 DE 0,77 DE 0,58 DE 1,02
Tabla 6. Actividad cicatrizante  del grupo tratado con extracto
hidroalcohólico de capirona al 5 %
N CONCENTRACIÓN LONGITUD DE LA HERIDA (mm)
DIA 0 DIA 1 DIA 5 DIA 10 DIA 15
1 10,00 9,00 8,50 4,00 2,50
2 10,00 8,50 7,50 3,50 0,00
3 Extracto 10,00 9,00 7,50 3,50 0,00
hidroalcohólico
4 de capirona al 5 10,00 8,50 7,00 3,00 3,00
%
5 10,00 9,50 7,50 3,50 0,00
6 10,00 9,00 8,00 4,00 0,00
PROMEDIO 10,00 8,92 +/- DE 7,67 +/- 3,58 +/- 0,92 +/-
0,38 DE 0,52 DE 0,38 DE 1,43
27
Tabla 7. Actividad cicatrizante  del grupo tratado con extracto
hidroalcohólico de capirona al 10 %
N CONCENTRACIÓN LONGITUD DE LA HERIDA (mm)
DIA 0 DIA 1 DIA 5 DIA 10 DIA 15
1 10,00 9,50 8,00 3,00 1,00
2 10,00 9,00 8,00 3,00 0,00
3 Extracto 10,00 8,00 7,50 4,00 0,00
hidroalcohólico
4 de capirona al 10 10,00 8,50 7,00 6,00 5,00
%
5 10,00 9,00 8,00 3,00 0,00
6 10,00 8,00 7,50 3,50 0,00
PROMEDIO 10,00 8,67 +/- 7,67 +/- 3,75 +/- 1,00 +/-
DE 0,61 DE 0,41 DE 1,17 DE 2
Tabla 8. Actividad cicatrizante  del grupo tratado con extracto
hidroalcohólico de capirona al 20 %
N CONCENTRACIÓN LONGITUD DE LA HERIDA (mm)
DIA 0 DIA 1 DIA 5 DIA 10 DIA 15
1 10,00 9,00 8,50 3,00 4,00
2 10,00 9,00 8,50 4,00 0,00
3 Extracto 10,00 9,00 8,50 3,50 2,00
hidroalcohólico
4 de capirona al 20 10,00 9,00 8,00 2,50 2,00
%
5 10,00 8,50 7,50 3,00 1,00
6 10,00 9,00 8,50 4,00 2,00
PROMEDIO 10,00 8,92 +/- 8,25 +/- 3,33 +/- 1,83 +/-
DE 0,20 DE 0,42 DE 0,61 DE 1,33
28
Tabla 9. Actividad cicatrizante del grupo tratado con Bepanthen
(control positivo)
N CONCENTRACIÓN LONGITUD DE LA HERIDA (mm)
DIA 0 DIA 1 DIA 5 DIA 10 DIA 15
1 10,00 9,00 8,50 4,00 3,00
2 10,00 9,00 8,50 3,00 0,00
3 CONTROL 10,00 9,00 8,50 4,00 2,00
POSITIVO
4 10,00 9,00 8,00 3,50 1,00
5 10,00 9,00 8,00 3,50 0,00
6 10,00 9,50 9,00 4,50 2,50
PROMEDIO 10,00 9,08 +/- 8,42 +/- 4,25 +/- 1,42 +/-
DE 0,20 DE 0,38 DE 0,41 DE 1,28
Tabla 10. Actividad cicatrizante del grupo sin tratamiento (control
negativo)
N CONCENTRACIÓN LONGITUD DE LA HERIDA (mm)
DIA 0 DIA 1 DIA 5 DIA 10 DIA 15
1 10,00 9,50 9,00 3,50 0,00
2 10,00 9,50 9,00 6,00 4,00
3 10,00 9,00 8,50 7,00 4,00
4 CONTROL 10,00 9,00 8,50 5,00 2,00
NEGATIVO
5 10,00 9,50 8,50 2,00 1,00
6 10,00 9,50 8,50 5,50 2,00
PROMEDIO 10,00 9,33 +/- 8,67 +/- 3,50 +/- 2,17 +/-
DE 0,26 DE 0,26 DE 1,81 DE 1,60
29
Tabla 11. Comparación de la cicatrización total de los diferentes grupos
de tratamiento
N° de E.H.C. E.H.C. E.H.C. E.H.C. Bepanthen( Sin
ratones 2,5% 5% 10% 20% Control tratamiento
positivo) (Control
negativo)
1 3,00 2,50 1,00 4,00 3,00 0,00
2 1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 4,00
3 2,00 0,00 0,00 2,00 2,00 4,00
4 0,00 3,00 5,00 2,00 1,00 2,00
5 2,00 0,00 0,00 1,00 0,00 1,00
6 1,50 0,00 0,00 2,00 2,50 2,00
Promedio 1,58 +/- 0,92 +/- 1,00 +/- 1,83 +/- DE 1,42 +/- DE 2,17 +/-
DE 1,02 DE 1,43 DE 2 1,33 1,28 DE 1,60
Mediana 1,75 0,00 0,50 2,00 1,50 2,00
En la tabla 11. Se puede observar los resultados del proceso de cicatrización de las
lesiones inducidas en ratones al quinceavo día, resultando que el extracto
hidroalcohólico de capirona al 5 % (0,92 +/- DE 1,43) favorece mucho mejor la
cicatrización seguida de capirona al 10 % (1,00 +/- DE 2).
30
Tabla 12. Ficha de registro del peso en gramos de los ratones
GRUPOS: R1 R2 R3 R4 R5 R6 PESO PESO
TOTAL TOTAL
DE ARENA
RATONE (gramos)
S
P.R. P.A. P.R. P.A. P.R. P.A. P.R. P.A. P.R. P.A. P.R. P.A. (gramos)
BLANCO 40 195 40 245 33 250 40 240 35 225 33 230 221 1385
CONTROL 40 170 40 225 33 214 40 180 35 214 40 223 228 1226
POSITIVO
CONTROL 40 80 40 130 40 150 40 180 38 130 36 140 234 810
NEGATIVO
E.H.C. 2.5 % 39 195 37 180 37 225 35 195 36 194 40 206 224 1195
E.H.C. 30 275 40 230 30 235 40 180 35 225 39 235 214 1380
5 %
E.H.C. 10 % 20 205 44 280 36 200 37 215 38 219 39 231 214 1350
E.H.C. 20 % 20 120 37 145 40 155 37 110 44 160 25 151 203 841
31
Tabla 13. Estadística descriptiva
BLANCO CONTROL CONTROL E.H.C 2,5 % E.H.C 5 % E.H.C 10% E.H.C 20 %
POSITIVO NEGATIVO
Media 230,8333 204,3333 135 199,1666 230 225 140,1666
Error típico 8,105210 9,545214 13,35415 6,172069 12,38278 11,86310 8,308295
Mediana 235 214 135 195 232,5 217 148
Moda amodal 214 130 195 235 amodal amodal
Desviación 19,85363 23,38090 32,71085 15,118421 30,33150 29,05856 20,35108
estándar
Varianza 394,16666 546,6666 1070 228,5666 920 844,4 414,16666
Rango 55 55 100 45 95 80 50
Mínimo 195 170 80 180 180 200 110
Máximo 250 225 180 225 275 280 116
Suma 1385 1226 810 1195 1380 1350 841
Cuenta 6 6 6 6 6 6 6
Confianza 20,83510 24,536753 34,3279 15,86581 31,83095 30,4950 21,357154
(95 %)
Eficacia de 100 % 88,52 % 58,48 % 86,28 % 99,64 % 97,47 % 60,72 %
cicatrización
Estadística descriptiva de los datos obtenidos al evaluar el efecto cicatrizante del
extracto de la corteza de capirona sobre heridas superficiales en ratones Mus
musculus var. albinus.
Interpretación: El resultado de las mediciones de la cicatrización se realizó por
peso en gramos con dinamómetro tubular Spring scale. Los mismos fueron
expresados como media, mediana, moda, varianza de la muestra, desviación
estándar, rango, mínimo y máximo, con una confianza del 95 %. Se evidencian los
32
valores reducidos para la media en el control negativo (135), seguido del extracto
hidroalcohólico de capirona al 20 % (140,17).
La piel tratada con extracto hidroalcohólico de capirona al 5 %, muestra un valor
superior a los anteriores señalados (230), dicho valor es menor y semejante al de
la piel intacta (230,83). Inmediatamente después se muestra el extracto
hidroalcohólico de capirona al 10 % (225).
También se determinó la eficacia de cicatrización, presentando un 99,64 % de
eficacia para el extracto de capirona al 5 %, seguido de capirona al 10 % (97,47 %).
Decisión: De los resultados obtenidos se concluye que el empleo de capirona al 5
% muestra el valor de media más alto y con mejor eficacia de cicatrización.
Tabla 14. Prueba de Normalidad
Pruebas de normalidad
Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk
TRATAMIENTO Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.
Blanco 0,218 6 0,200* 0,889 6 0,314
Control positivo 0,327 6 0,044 0,823 6 0,094
Control negativo 0,273 6 0,185 0,937 6 0,633
Extracto de capirona 2,5 % 0,275 6 0,174 0,913 6 0,457
Extracto de capirona 5 % 0,268 6 0,200* 0,900 6 0,372
Extracto de capirona 10 % 0,252 6 0,200* 0,827 6 0,101
Extracto de capirona 20 % 0,261 6 0,200* 0,872 6 0,236
*. Esto es un límite inferior de la significación verdadera.
a. Corrección de significación de Lilliefors
Para saber si los datos de los grupos en estudio siguen una distribución normal, se
aplicó la prueba de Shapiro-Wilk, dado que la población es menor a 50 individuos.
33
Dónde:
H0: La distribución del tiempo de cicatrización de los grupos en estudio es normal.
H1: La distribución del tiempo de cicatrización de los grupos en estudio no es
normal.
Decisión: Si p > 0,05; se acepta la H0 y se rechaza H1. Si p < 0,05; se rechaza la
H0, y se aprueba H1.
Resultado: Tenemos que la significancia de los grupos en estudio son: 0,457;
0,372; 0,101 y 0,236, correspondientes a los extractos hidroalcohólicos de capirona
al 2,5 %, 5 %,10 % y 20 % respectivamente; siendo estos mayores que 0.05; por lo
que, aceptamos la hipótesis nula. Dado que aceptamos H0, podemos decir que la
distribución del tiempo de cicatrización de los grupos en estudio es normal.
Tabla 15. Análisis de varianza (ANOVA)
ANÁLISIS DE LA VARIANZA
Origen de las Suma de Grados de Promedio de F calculada Probabilidad Valor crítico
variacio cuadrad libertad los para F
nes os cuadrad
os
Entre 60720,9 10120,1 16,0347 9,1324E- 2,37178
grupos 524 6 587 772 09 119
Dentro de 22089,8
los 333 631,138
grupos 35 095
Total 82810,7
857 41
Contraste de hipótesis:
H1 = Existe diferencia entre los grupos experimentales de la prueba tensiométrica.
H0=  No  existe  diferencia  entre  los grupos experimentales de la prueba
tensiométrica.
34
Decisión:
Si p < 0,05; se rechaza H0, y se aprueba H1. Si p > 0,05; se acepta H0.
Resultado:
Con el análisis de varianza se lograron comparar los resultados obtenidos de la
prueba tensiométrica de los seis grupos experimentales, tomando como variable
cuantitativa los gramos de arena (dinamómetro).
Para realizar el análisis ANOVA de un factor, primero se plantearon las hipótesis
nula y alternativa, luego se estableció el nivel de significación del 0,05 y
seguidamente se empleó la distribución de muestreo F. Lo resultados se resumen
en la Tabla N°15 donde el valor F calculado fue de 16,03 siendo mayor que la F
crítica de 2,37, en cuanto a la significación el valor de P fue de 9,1324 E-09 (P <
0,05), por todo esto se rechaza la hipótesis nula y se acepta la hipótesis alternativa,
que señala que si existen diferencias estadísticamente significativas entre los
grupos experimentales.
35
Tabla 16. Diferencia honestamente significativa de Tukey
Comparaciones múltiples
HSD Tukey
Intervalo de confianza al 95
Diferencia %
de medias Error Límite
(I) Tratamiento (I-J) estándar Sig. Límite inferior superior
C. positivo C. negativo 69,33333* 14,95140 ,001 23,8572 1114,8094
E.H.C. al 2,5 % 5,16667 14,95140 ,999 -40,3094 50,6428
E.H.C. al 5 % -25,66667 14,95140 ,532 -71,1428 19,8094
E.H.C. al 10 % -20,66667 14,95140 ,737 -66,1428 24,8094
E.H.C. al 20 % 64,16667* 14,95140 ,002 18,6906 109,6428
C. negativo C. positivo -69,33333* 14,95140 ,001 -114,809436 -23,8572
E.H.C. al 2,5 % -64,16667* 14,95140 ,002 -109,6428 -18,6906
E.H.C. al 5 % -95,00000* 14,95140 ,000 -140,4761 -49,5239
E.H.C. al 10 % -90,00000* 14,95140 ,000 -135,4761 -44,5239
E.H.C. al 20 % -5,16667 14,95140 ,999 -50,6428 40,3094
E.H.C. al C. positivo -5,16667 14,95140 ,999 -50,6428 40,3094
2,5 % C. negativo 64,16667* 14,95140 ,002 18,6906 109,6428
E.H.C. al 5 % -30,83333 14,95140 ,333 -76,3094 14,6428
E.H.C. al 10 % -25,83333 14,95140 ,525 -71,3094 19,6428
E.H.C. al 20 % 59,00000* 14,95140 ,005 13,5239 104,4761
E.H.C. al 5 C. positivo 25,66667 14,95140 ,532 -19,8094 71,1428
% C. negativo 95,00000* 14,95140 ,000 49,5239 140,4761
E.H.C. al 2,5 % 30,83333 14,95140 ,333 -14,6428 76,3094
E.H.C. al 10 % 5,00000 14,95140 ,999 -40,4761 50,4761
E.H.C. al 20 % 89,83333* 14,95140 ,000 44,3572 135,3094
E.H.C. al C. positivo 20,66667 14,95140 ,737 -24,8094 66,1428
10 % C. negativo 90,00000* 14,95140 ,000 44,5239 135,4761
E.H.C. al 2,5 % 25,83333 14,95140 ,525 -19,6428 71,3094
E.H.C. al 5 % -5,00000 14,95140 ,999 -50,4761 40,4761
E.H.C. al 20 % 84,83333* 14,95140 ,000 39,3572 130,3094
E.H.C. al C. positivo -64,16667* 14,95140 ,002 -109,6428 -18,6906
20 % C. negativo 5,16667 14,95140 ,999 -40,3094 50,6428
E.H.C. al 2,5 % -59,00000* 14,95140 ,005 -104,4761 -13,5239
E.H.C. al 5 % -89,83333* 14,95140 ,000 -135,3094 -44,3572
E.H.C. al 10 % -84,83333* 14,95140 ,000 -130,3094 -39,3572
*. La diferencia de medias es significativa en el nivel 0,05.
36
Decisión:
Si p-value < 0,05; si hay diferencia significativa entre los grupos de comparación.
Si p-value > 0,05; no hay diferencia significativa entre los grupos de comparación.
Resultados:
En la Cuadro Nº 16, se presentan los resultados de la prueba HSD de Tukey,
evaluando la diferencia entre dos grupos, obteniendo que:
- El control negativo presenta diferencia significativa con el control positivo, con el
extracto hidroalcohólico de capirona al 2,5 %, 5 % y 10 %
- El extracto hidroalcohólico de capirona al 20 % presenta diferencia significativa
con el control positivo, con el extracto hidroalcohólico de capirona al 2,5%, 5 % y
10 %
- El grupo control positivo no presenta diferencia significativa con el extracto
hidroalcohólico de capirona al 2,5 %, 5 % y 10 %
- El control negativo no presenta diferencia significativa con el extracto
hidroalcohólico de capirona al 20 %
- El extracto hidroalcohólico de capirona al 2,5 % no presenta diferencia significativa
con el extracto hidroalcohólico de capirona al 5 % y 10 %
- El extracto hidroalcohólico de capirona al 5 % no presenta diferencia significativa
con el extracto hidroalcohólico de capirona al 10 %.
37
Tabla 17. Subconjuntos homogéneos
HSD Tukey
Subconjunto para alfa = 0,05
TRATAMIENTO N 1 2
Control negativo 6 135,0000
Extracto de
capirona al 20 % 6 140,1667
Extracto de
capirona al 2,5 % 6 199,1667
Control positivo 6 204,3333
Extracto de
capirona al 10 % 6 225,0000
Extracto de
capirona al 5 % 6 230,0000
Sig. ,999 ,333
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 6,000.
Interpretación: El subconjunto 2 formado por el extracto hidroalcohólico de
capirona al 2,5 %, 5 %, 10 % y control positivo son homogéneos. De los cuales los
que presentan un valor más elevado que el resto de grupos son el extracto de
capirona al 5 % y 10 %. Además se puede evidenciar que los grupos que presentan
un valor más bajo son los pertenecientes al subconjunto 1.
Con un nivel de significación del 0.05, según los subconjuntos homogéneos de
Tukey podemos afirmar que el extracto de capirona al 5 %, tiene mejor efecto
cicatrizante.
38
Gráfico N°1. Cajas y Bigotes de los grupos en tratamiento
En el gráfico N° 1 se observa las diferencias que existen entre los diferentes grupos
de tratamiento. Podemos distinguir que la concentración de capirona al 5 % y 10 %
son similares en efectividad al control positivo (Bepanthen).
39
IV. DISCUSIÓN
4.1 Discusión de resultados
La cicatrización involucra una serie de pasos que la hacen compleja, con la
presencia de elementos celulares que elaboran proteínas, las cuales
intervienen en la inflamación y reparación del tejido, durante este proceso el
cuerpo trata de reparar parte del tejido lesionado con uno nuevo, imitando la
estructura y funcionalidad original que no son regeneradas56.
La presente investigación describe actividad cicatrizante del extracto
hidroalcohólico de la corteza de capirona, sobre lesiones en ratones Mus
musculus Balb/c/CNPB, a diferentes concentraciones 2,5 %, 5 %, 10 % y 20 %
sobre heridas inducidas en comparación con crema comercial (Bepanthen).
En la marcha fitoquímica del extracto hidroalcohólico de capirona la reacción
de precipitación y coloración fueron positivas para flavonoides, taninos y
compuestos quinónicos probablemente antraquinonas, según se demuestra en
la tabla N° 4. Los resultados de este estudio fitoquímico preliminar son
concordantes con los metabolitos secundarios reportados por Santamaría E,
(2013)57, donde se comprueba la relación de la cicatrización con la sinergia
entre taninos y flavonoides. Además, según Mendoza N, et. al (2019) 58, los
taninos poseen capacidad astringente, lo cual aumenta el número de enlaces
cruzados entre las fibras de colágeno. Evidenciando que los taninos ayudan a
la vasoconstricción, al reducir la permeabilidad vascular y producir una acción
antiinflamatoria. Del mismo modo, se sabe que poseen efecto antimicrobiano y
estimulan el crecimiento de la epidermis, ayudando a la reepitelización. Por su
parte Prado I, (2015)59, determina que los flavonoides poseen un efecto
cicatrizante significativamente mayor que el estándar, en su estudio con el
“Dermaclin”.
Se sabe además que los taninos realizan la inhibición de los radicales libres y
de las especies reactivas oxigenadas, lo cual facilita el cierre del diámetro de la
herida, ampliando la génesis de nuevos capilares sanguíneos (angiogénesis)
40
y la aparición de fibroblastos. Por otro lado, a pesar de que las saponinas,
poseen propiedades antioxidantes y antimicrobianas; probablemente también
sean las responsables de la disminución del cierre de la herida, aumentando la
tasa de reepitelización60 ; en este trabajo se evidencia la presencia de estas en
mínima concentración. Por tal motivo no podríamos atribuir los efectos
previamente citados a la presencia de saponinas.
En la tabla N° 11 se realiza la comparación de la cicatrización total de los
diferentes grupos de tratamiento. Se obtuvieron resultados con acción favorable
para la concentración del extracto hidroalcohólico de capirona al 5 %, seguida
de capirona al 10 %; frente al extracto hidroalcohólico de capirona al 20 % y
control negativo, cuyos resultados tuvieron una media mayor con poco
cicatrización en relación a los primeros. Esto se corrobora con los resultados
de la evaluación clínica, donde se evidencia el cierre total de la herida a los
trece días para el extracto hidroalcohólico de capirona al 5 %, mostrando
además una diferencia mínima con el extracto hidroalcohólico capirona al 10
%.
En la tabla N° 13 del análisis descriptivo, el grupo con una mayor media la
obtuvo el extracto hidroalcohólico de capirona al 5 % (230), seguido del extracto
al 10 % (225), comparado con el extracto hidroalcohólico de capirona al 20 %
(140.17) y control negativo (135). Donde se necesitó una mayor fuerza de
tensión para los dos primeros grupos, en la prueba tensiométrica. A diferencia
de los otros dos grupos donde la ruptura de la herida se presentó con mayor
facilidad.
En referencia a la actividad cicatrizante, el extracto de capirona al 5 % mostró
una mayor eficacia (99,64 %) con un tiempo de cicatrización más corto, frente
a los demás tratamientos; siendo el de menor eficacia el control negativo con
un 58,48 %.
Las comparaciones múltiples con HSD de Tukey (tabla N° 16), nos confirma la
diferencia estadística (p < 0,05) del extracto hidroalcohólico de capirona al 20
% y control negativo, cuya efectividad es menor, frente a los demás grupos. El
41
control positivo tiene un mejor efecto cicatrizante que el extracto de capirona al
2,5 %, sin ser este estadísticamente significativo. Continuando con el extracto
de capirona al 5 % y 10 %, presentan un mejor efecto cicatrizante que el resto
de grupos, sin ser estadísticamente relevante. Siendo el extracto de capirona
al 5 % el que obtuvo el mejor resultado.
Con respecto a la concentración, se corresponde a lo encontrado por Juro S,
et al (2010) 61, determinando que la concentración mínima efectiva cicatrizante
del Nogal es del 5 %, y encontrando una relación entre concentración-
cicatrización dentro del rango 2,5 % al 30 % y una relación formulación-
cicatrización, siendo la presentación en emulsión O/A (aceite en agua) e
hidrogel, los que tuvieron mayor resistencia a la tensión. Mogrovejo A. (2014) 62
también da un enfoque cuantitativo, encontrando que el gel de "Caléndula" al
10 % y el preparado comercial muestran la misma eficacia en el proceso de
cicatrización.
Con respecto al efecto cicatrizante, posiblemente se deba a que en la corteza
de la capirona se encuentran en su mayoría flavonoides, taninos y
antraquinonas. Según Harborne J. (1999)63, los taninos “condensados” son
importantes porque ayudan en la cicatrización de heridas y quemaduras,
mientras que los taninos “hidrolizables” han demostrado tener propiedades
antivirales y antitumorales.
Finalmente se concluye que los extractos hidroalcohólicos de capirona al 5 %
y 10 % presentan actividad cicatrizante mejor que el estándar de referencia de
marca comercial. De los cuales destaca el extracto al 5 %, y con una efectividad
algo menor el extracto al 10 %. En el caso del extracto hidroalcohólico de
capirona al 20 % su actividad cicatrizante es menor y similar al control negativo.
42
4.2 Conclusiones
Los estudios realizados en el  presente trabajo nos permiten  llegar a las
siguientes conclusiones:
- De los metabolitos activos encontrados en el extracto hidroalcohólico de la
corteza de capirona con posible actividad cicatrizante, se evidenciaron
flavonoides, taninos y compuestos quinónicos.
- Se logró evaluar el efecto cicatrizante del extracto hidroalcohólico de
capirona, encontrando un mejor resultado con una concentración al 5 %.
- La actividad cicatrizante del extracto hidroalcohólico de la corteza de
capirona al 5 % fue similar al estándar de referencia (crema Bepanthen) en
ratones albinos Mus musculus.
43
4.3 Recomendaciones
- Se sugiere continuar con las investigaciones sobre el efecto cicatrizante de
la corteza de capirona, mediante una forma farmacéutica adecuada; así
como también de las otras partes de la planta (hojas, raíces, etc.).
- Complementar estudios con pruebas toxicológicas del extracto
hidroalcohólico de la corteza de capirona para evaluar posibles efectos
adversos a largo plazo.
- Realizar estudios de la capirona con otras especies vegetales que contengan
la misma actividad cicatrizante.
- Comparar el extracto hidroalcohólico de la corteza de capirona con otros
cicatrizantes comerciales.
44
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hidroalcohólico de Junglas neotropica Diels "nogal" en ratones albinos. Folia
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62. Mogrovejo A. "Determinación del efecto cicatrizante de un gel estandarizado
de Caléndula oficinalis L. (Caléndula) en animales de experimentación."
[Tesis para optar al Título Profesional de Químico Farmacéutico]. Arequipa:
Universidad Católica de Santa Maria. 2014.
63. Harborne J. Phytochemical dictionary: a handbook of bioactive compounds
from plants. 2 ed. Londres: Taylor y Francis; 1999.
53
ANEXOS
54
ANEXO A. MATRIZ DE CONSISTENCIA
PROBLEMA OBJETIVOS HIPÓTESIS OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES
GENERAL GENERAL GENERAL
¿Cuál es la actividad El objetivo general del El extracto V1. DIMENSIÓN INDICADORES
cicatrizante del extracto estudio fue evaluar la hidroalcohólico de
hidroalcohólico de actividad cicatrizante del Calycophyllum
Calycophyllum extracto hidroalcohólico spruceanum (capirona
spruceanum (capirona de Calycophyllum de bajío) presenta efecto VARIABLE
del bajío) en ratones spruceanum (capirona cicatrizante en ratones INDEPENDIENTE Fitoquímica. Identificación de
albinos Mus Musculus?. de bajío) en ratones albinos Mus musculus. metabolitos
albinos Mus musculus. secundarios.
Extracto hidroalcohólico
de Calycophyllum Reacciones químicas de
spruceanum precipitación,
(Capirona de coloración y
bajío). pruebas de
PROBLEMAS OBJETIVOS HIPÓTESIS solubilidad.
ESPECÍFICOS ESPECÍFICOS ESPECÍFICAS
P.E.1:¿Qué metabolitos O.E.1: Detectar los H.1: El  extracto
secundarios con metabolitos hidroalcohólico de
actividad secundarios la corteza  de V2. DIMENSIÓN INDICADORES
cicatrizante tiene el activos que poseen Calycophyllum
extracto actividad spruceanum
hidroalcohólico de cicatrizante,  en (capirona de bajío) VARIABLE
Calycophyllum ratones  albinos posee metabolitos DEPENDIENTE Tiempo de Días de cicatrización.
spruceanum Mus musculus; secundarios con cicatrización.
(capirona  de presentes    en    el actividad Efecto cicatrizante en
bajío)?. extracto cicatrizante,   en ratones albinos
hidroalcohólico de ratones   albinos Resistencia de la  herida
P.E.2:    ¿ Cuál     es  la Calycophyllum Mus  musculus, Método Tensiométrico y a la fuerza de
concentración del spruceanum como flavonoides, Vaisberg. tensión.
extracto (capirona de bajío), taninos      y
hidroalcohólico de mediante análisis compuestos
Calycophyllum fitoquímico quinónicos.
spruceanum cualitativo.
(capirona de bajío) H.2: Existe   una
que  posee O.E.2: Precisar   la concentración del
actividad concentración del extracto
cicatrizante   en extracto hidroalcohólico de
ratones albinos hidroalcohólico de Calycophyllum
Mus musculus?. Calycophyllum spruceanum
spruceanum (capirona de bajío),
P.E.3:     ¿Cuál     es   la (capirona de bajío) que  posee
actividad que  posee actividad
cicatrizante  del actividad cicatrizante    en
extracto cicatrizante,   en ratones albinos
hidroalcohólico de ratones albinos Mus musculus.
Calycophyllum Mus musculus.
spruceanum H.3: El  extracto
(capirona de bajío) O.E.3: Comparar  la hidroalcohólico de
comparado con actividad Calycophyllum
Bepanthen en cicatrizante del spruceanum
ratones  albinos extracto (capirona de bajío)
Mus musculus?. hidroalcohólico de tiene actividad
Calycophyllum cicatrizante en
spruceanum comparación con
(capirona de bajío) Bepanthen en
con Bepanthen en ratones   albinos
ratones albinos Mus musculus
Mus musculus.
55
ANEXO B. OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES
VARIABLES TIPO DE VARIABLE DEFINICIÓN DEFINICIÓN DIMENSIONES INDICADORES N° ITEM VALOR FINAL CRITERIOS
CONCEPTUAL OPERACIONAL
Aquella sustancia Frecuencia de Horas 1 Cada 12 horas Registro de dosis
VARIABLE extraída    por    el Extracto tratamiento
INDEPENDIENTE Cualitativo y etanol, que posee hidroalcohólico y frecuencia
Longitudinal una composición es la forma
Extracto química que le práctica de
hidroalcohólico proporciona una concentrar y
de Calycophyllum acción obtener los
spruceanum farmacológica útil principios activos
(capirona de en la terapéutica. que sintetizan losbajío). metabolitos Al 2.5% Concentración
secundarios. final
Al 5%
Concentración del Concentraciones 7
extracto
hidroalcohólico específicas Al 10%
de Calycophyllum
spruceanum Al 20%
(Benth.) Hook. f.
ex K. Schum. Blanco
(capirona de
bajío) Control +
Control -
Fitoquímico Metabolitos 4
Abundante (+++)
Moderado (++)
Leve (+)
Ausencia (-)
VARIABLE Cuantitativo y La actividad El tiempo y el Tiempo de Valor en mm de 2 Milímetros Días
DEPENDIENTE Longitudinal cicatrizante es la tamaño de la cicatrización cierre de la heridaregeneración de herida se gramos
Actividad tejidos para la compara con lareconstrucción acción de un
cicatrizante de la piel cicatrizante Gramos Peso Valores del
farmacológico necesarios para la porcentaje del
conocido. abertura de la test de
A menos tiempo herida cicatrizada. cicatrización.
de cicatrización
tendrá un efecto
favorable. Una
rápida
regeneración de
la herida tendrá
un efecto
favorable.
56
ANEXO C. INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS
ÍNDICE AFROSIMÉTRICO
Índice afrosimétrico Resultados
Prueba de la espuma (Saponinas)
Donde: Ausencia (-) Leve (+) Moderado (++) Abundante (+++)
PH DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DESECADO DE LA CORTEZA
Temperatura (°C) Resultados
Determinación del pH
Donde: ácido: <7  Neutro: 7  Básico: >7
57
SOLUBILIDADES DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO
SOLVENTES RESULTADOS
Agua destilada
Etanol 96 %
Etanol 70 %
Acetona
Cloroformo
Benceno
Donde: (-) Insoluble (+) Poco soluble (++) Soluble (+++) Muy soluble
58
MARCHA FITOQUÍMICA DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO
CONSTITUYENTES QUÍMICOS ENSAYO REACCIÓN
Reactivo FeCl3 2%
Flavonoides
Taninos Reactivo AlCI3 2%
Compuestos fenólicos
Reactivo Acetato de Plomo
Reactivo . Dragendorff
Alcaloides
Reactivo Otto
Antraquinonas
Naftoquinonas Reactivo Borntrager
Compuestos quinonicos
Donde: (+++) Abundante  (++) Moderado  (+) Leve (-) Ausencia
59
FICHA DE OBSERVACIÓN Y REGISTRO DEL PROCESO DE CICATRIZACIÓN
N  DE GRUPO:
N CONCENTRACIÓN LONGITUD DE LA HERIDA (mm)
DIA 0 DIA 1 DIA 5 DIA 10 DIA 15
1
2
3
4
5
6
PROMEDIO
60
FICHA DE REGISTRO DE DOSIS Y FRECUENCIA DEL TRATAMIENTO
Registro de dosis y frecuencia de tratamiento del extracto hidroalcohólico de Calycophyllum
spruceanum (capirona de bajío)
Día de D D D D D D D D D D D D D D D
tratamiento í í í í í í í í í í í í í í ía a a a a a a a a a a a a a a
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 1 1 1 1
0 1 2 3 4 5
Dosis: 0.1 ml
c/12h x día
Grupo 1:
E.H.C 2.5%
Grupo 2:
E.H.C 5%
Grupo 3:
E.H.C 10%
Grupo 4:
E.H.C 20%
Grupo 5:
C. Positivo
Grupo 6 :
C. Negativo
Leyenda:
M: Dosis de tratamiento diurno.
N: Dosis de tratamiento nocturno.
E.H.C. Extracto Hidroalcohólico de Capirona.
61
FICHA DE REGISTRO DEL PESO EN GRAMOS
GRUPOS: R1 R2 R3 R4 R5 R6 PESO TOTAL PESO TOTAL
DE RATONES ARENA
P.R. P.A. P.R. P.A. P.R. P.A. P.R. P.A. P.R. P.A. P.R. P.A. (gramos) (gramos)
BLANCO
CONTROL
POSITIVO
CONTROL
NEGATIVO
E.H.C. 2.5%
E.H.C. 5%
E.H.C. 10%
E.H.C. 20%
Leyenda:
P.R. = Peso del ratón
P.A. = Peso de la arena
E.H.C = Extracto hidroalcohólico de capirona
62
ANEXO D. CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
63
ANEXO E. CONSTANCIA DE BIOTERIO DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS
64
ANEXO F. EVIDENCIAS FOTOGRÁFICAS DEL TRABAJO DE CAMPO
Fotografía N° 01: Especie vegetal Calycophyllum spruceanum (Benth.) Hook. f. ex K.Schum (capirona
de bajío) en su hábitat natural
Fotografía N° 02: Recolección de la corteza de Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío)
65
Fotografía N° 03: Secado de la corteza de Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío)
Fotografía N° 04: Pesado de la corteza de Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío)
66
Fotografía N° 05: Molienda de la corteza de Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío)
Fotografía N° 06: Prueba de solubilidad de Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío)
67
Fotografía N° 07: Marcha fitoquímica de Calycophyllum spruceanum (capirona de bajío), cambio de
color en los tubos de ensayo en respuesta a los metabolitos secundarios
Fotografía N° 08: Maceración y extracción del principio activo
68
Fotografía N° 09: Reducción del principio activo
Fotografía N° 10: Melcocha en estado de gel
69
Fotografía N° 11: Proceso de secado de la melcocha
Fotografía N° 12: Obtención del extracto hidroalcohólico de capirona a diferentes concentraciones
70
Fotografía N° 13: Proceso de selección y aclimatación de los especímenes de investigación en grupos
de seis
Fotografía N° 14: Administración de Ketamina para el anestesiado de los especímenes
71
Fotografía N° 15: Depilación del lomo del ratón
.
Fotografía N° 16: Medición y marcación del área (1 cm) de los especímenes
72
Fotografía N° 17: Realización de la incisión en el lomo del ratón
Fotografías N° 18: Administración vía tópica del extracto hidroalcohólico de capirona a los diferentes
grupos de estudio
73
Fotografía N° 19: Realización de la prueba del dinamómetro
74