FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
TAMIZAJE FITOQUÍMICO Y CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
COMPARATIVA IN VITRO DE LOS EXTRACTOS POLARES DE
LAS PARTES AÉREAS DE Ephedra americana humb. & bonpl. ex
will (PINCO-PINCO)
TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO
FARMACÉUTICO
AUTORES:
BACH. CUELA SUPO, MAGNOLIA PAOLA
https://orcid.org/0000-0002-6952-7420
BACH. MACHACCA AQUINO, JUANA YRIS
https://orcid.org/0000-0001-7815-9765
ASESOR:
Mg. INOCENTE CAMONÉS, MIGUEL ANGEL
https://orcid.org/0000-0003-0397-4356
LIMA - PERÚ
2022
DEDICATORIA
Para mis padres, familia y amigos,
quienes me han bridando su constante
apoyo en todo este camino.
Sin ustedes esto no habría sido posible.
Gracias
Magnolia Paola Cuela Supo
Primeramente, dedico el presente trabajo
de investigación a mi hijo Edissandrito por
darme inspiración y energías, para poder
continuar con este gran paso en mi vida.
A mi madre y hermanos por
acompañarme en todo momento, A
Sanderss, por estar apoyándome y
dándome ánimos.
Gracias.
Juana Yris Machacca Aquino
2
AGRADECIMIENTO
Agradecemos a Dios por habernos
permitido estar optima salud y poder
concluir el presente trabajo de tesis.
También debemos de agradecer la
constante orientación brindada por
nuestro asesor el Dr. Q.F. Inocente
Camonés, Miguel Ángel,
agradeciendo la ayuda brindada
durante el proceso de elaboración de
esta tesis.
Un agradecimiento especial a
nuestros docentes, amigos y
familiares que estuvieron con
nosotros a lo largo de este camino.
3
ÍNDICE GENERAL
DEDICATORIA ............................................................................................... 2
AGRADECIMIENTO ....................................................................................... 3
ÍNDICE GENERAL .......................................................................................... 4
ÍNDICE DE TABLAS ....................................................................................... 5
ÍNDICE DE FIGURAS ..................................................................................... 5
ÍNDICE DE ANEXOS ...................................................................................... 5
RESUMEN ...................................................................................................... 6
ABSTRACT. .................................................................................................... 7
I. INTRODUCCIÓN ...................................................................................... 8
II. MATERIALES Y MÉTODOS. .................................................................... 12
2.1. ENFOQUE Y DISEÑO DE INVESTIGACIÓN ..................................... 12
2.2. POBLACIÓN, MUESTRA Y MUESTREO ........................................... 12
2.3. VARIABLES DE INVESTIGACIÓN ..................................................... 13
2.4. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOPILACIÓN DE DATOS .... 13
2.5. PROCESO DE RECOPILACIÓN DE DATOS ..................................... 13
2.6. MÉTODOS DE ANÁLISIS ESTADÍSTICO .......................................... 17
2.7. ASPECTOS ÉTICOS .......................................................................... 18
III. RESULTADOS ......................................................................................... 19
IV. DISCUSIÓN ............................................................................................. 27
4.1 DISCUSIÓN DE RESULTADOS .......................................................... 27
4.2. CONCLUSIONES ............................................................................... 28
4.3. RECOMENDACIONES ....................................................................... 28
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................. 30
ANEXOS ....................................................................................................... 33
4
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1: Determinación taxonómica de la parte Aérea del Pinco Pinco (Ephedra
americana humb. & bonpl. ex will) ......................................................... 19
Tabla 2: Datos obtenidos en la recolección del Pinco Pinco (Ephedra americana
humb. & bonpl. ex Will) ......................................................................... 19
Tabla 3: Resultados del tamizaje fitoquímico del extracto acuoso y extracto
hidroalcohólico de Pinco Pinco.. ............................................................ 20
Tabla 4: Interpretación de resultados en el tamizaje fitoquímico de la parte Aérea del
Pinco Pinco (Ephedra americana humb. & bonpl. ex Will) .................... 21
Tabla 5: De la cuantificación de compuestos fenólicos ......................................... 22
Tabla 6: Resultados del patrón de referencia para DPPH: Trolox ......................... 22
Tabla 7: Estadística de Regresión ......................................................................... 23
Tabla 8: Análisis de la Varianza (ANOVA). ............................................................ 23
Tabla 9: Resultados de la capacidad antioxidante del extracto acuoso ................ 24
Tabla 10: Resultados de la capacidad antioxidante del extracto hidroalcohólico .. 25
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1: Reacción del radical con compuestos antioxidantes. ............................. 15
Figura 2: Cálculo para la capacidad antioxidante con DPPH. ............................... 17
Figura 3: Curva de calibración para compuestos fenólicos ................................... 21
Figura 4: Recta de Equivalente Trolox para DPPH. .............................................. 22
Figura 5: Capacidad antioxidante del extracto acuoso uM Equiv. Trolox. ............. 24
Figura 6: Capacidad antioxidante del extracto hidroalcohólico uM Equiv. Trolox .. 25
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo A. Operacionalización de las variables ...................................................... 34
Anexo B. Matriz de consistencia ........................................................................... 35
Anexo C. Instrumentos para la recopilación de datos ........................................... 36
Anexo D. Constancia de determinacion de muestras ............................................ 38
Anexo E. Evidencia del trabajo de campo (fotos) .................................................. 39
5
RESUMEN
OBJETIVOS: La presente investigación plantea como objetivo realizar el Tamizaje
Fitoquímico y Evaluar la Capacidad Antioxidante Comparativa in Vitro de los
Extractos Polares de las partes aéreas de Ephedra americana humb. & bonpl. ex
will (PINCO-PINCO).
MATERIALES Y MÉTODOS: La presente investigación tiene un enfoque analítico
y un diseño experimental; para ello se utilizó una población de 10 kg de parte aérea
de la especie vegetal Ephedra americana Humb. & Bonpl. ex Will. (Pinco-Pinco) la
cual provino del Distrito de Yarabamba, provincia de Arequipa, departamento de
Arequipa, a la cual se realizó una extracción acuosa e hidroalcohólica.  La
capacidad antioxidante fue determinada por el uso del método de espectroscopía
para la determinación de la capacidad antioxidante por el método DPPH (Técnica
2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo).
RESULTADOS: Los resultados evidencian de manera positiva el objetivo de la
investigación, así como también se puede observar la presencia de metabolitos
secundarios, siendo los más abundantes: Compuestos fenólicos, taninos,
flavonoides, tanto en el extracto acuoso e hidroalcohólico. La determinación de
capacidad antioxidante por el método DPPH evidencian resultados positivos, en los
extractos acuoso e hidroalcohólico, presentando la mayor concentración a 1000
ug/mL con un porcentaje de inhibición de: 82.154% y 97.038% respectivamente.
CONCLUSIONES: La investigación concluye dando como positivo la presencia de
metabolitos secundarios con efecto antioxidante en el extracto acuoso e
hidroalcohólico de Ephedra americana humb. & bonpl. ex will (PINCO-PINCO), así
como el porcentaje de inhibición, por lo que se demuestra mayor capacidad
antioxidante de Ephedra americana humb. & bonpl. ex will (PINCO-PINCO) en el
extracto hidroalcohólico, mediante el análisis por el método DPPH.
PALABRAS CLAVE: Ephedra americana, antioxidante, DPPH, Porcentaje de
inhibición, extracto hidroalcohólico, Pinco Pinco.
6
ABSTRACT
OBJECTIVES: The present research aims to carry out the Phytochemical
Screening and Evaluate the Comparative Antioxidant Capacity in Vitro of the Polar
Extracts of the aerial parts of Ephedra americana humb. & bonpl. ex will (PINCO-
PINCO).
MATERIALS AND METHODS: It presents an analytical approach and an
experimental design; For this, a population of 10 kg of aerial part of the plant species
Ephedra americana Humb was used. & Bonpl. ex Will. (Pinco-Pinco) which came
from the Yarabamba District, Arequipa province, Arequipa department, to which an
aqueous and hydroalcoholic extraction was carried out. The antioxidant capacity
was determined by the use of the spectroscopy method for the determination of the
antioxidant capacity by the DPPH method.
RESULTS: The results positively demonstrate the objective of the research, as well
as the presence of secondary metabolites, the most abundant being: phenolic
compounds, tannins, flavonoids, both in the aqueous and hydroalcoholic extract.
The determination of antioxidant capacity by the DPPH method shows positive
results, in the aqueous and hydroalcoholic extracts, presenting the highest
concentration at 1000 ug / mL with an inhibition percentage of: 82.154% and
97.038% respectively.
CONCLUSIONS: The research concludes with the positive presence of secondary
metabolites with antioxidant effect in the aqueous and hydroalcoholic extract of
Ephedra americana humb. & bonpl. ex will (PINCO-PINCO), as well as the
percentage of inhibition, which shows a greater antioxidant capacity of Ephedra
americana humb. & bonpl. ex will (PINCO-PINCO) in the hydroalcoholic extract, by
means of the analysis by the DPPH method.
KEY WORDS: Ephedra americana, antioxidant, DPPH, Percentage of inhibition,
hydroalcoholic extract, Pinco Pinco.
7
I. INTRODUCCIÓN
El año 2020 trajo consigo un escenario de caos para el sistema de salud mundial,
debido a la aparición del virus SARS-CoV-2 muchos de los países con alta
vigilancia sanitaria colapsaron, la pandemia de COVID-19 generó
desabastecimiento de algunos medicamentos en diversas partes, generando el
incremento en la demanda de los mismos y en consecuencia provocando un alza
en el precio de algunos de ellos. (1)
Esta pandemia desato una serie de acontecimientos, en los cuales la población
buscaba la manera de protegerse y tratarse de curar ciertas dolencias en base a
tratamientos ancestrales empleando plantas medicinales, haciendo que la
población se viera en la necesidad de utilizar productos de origen natural, para
combatir los síntomas, esto ante una ausencia de medicamentos desabastecidos
en el mercado farmacéutico. (1)
Durante el mes de febrero del 2021, el INS (Instituto Nacional de Salud), estimo
que el 40% de toda la población peruana (32 millones), de contagio con el
coronavirus. De los cuales hubo mayor contagio en la Capital, ante ello es de vital
importancia hacer estudios en base a la actividad antioxidantes, ya que dicha
función nos ayuda a combatir a los radicales libres, fortaleciendo nuestra salud,
mediante la regeneración de los vasos sanguíneos. (1)
En este escenario es importante realizar investigaciones que permitan el mejor uso
y conocimiento de las propiedades de diversas plantas medicinales.
El Pinco Pinco cuenta con actividad inmunoestimulante, entre sus componentes
contiene efedrina y pseudoefedrina. La planta es utilizada tradicionalmente en el
tratamiento de asma, bronquitis, enfriamientos, resfriados, tos, fiebre, dolor de
cabeza, congestión nasal y como un agente antialérgico. (2)
La Ephedra americana (Pinco Pinco) crece de manera abundantemente en las
ciudades de Cusco, Arequipa y Cajamarca, a esta planta se le atribuyen
concentraciones de metabolitos secundarios como flavonoides los cuales fueron
objeto de estudio en nuestra investigación ya que cuentan con propiedades
antioxidantes. Los antioxidantes son usados para evitar modificaciones indeseadas
8
debidas a la oxidación. La clasificación de los antioxidantes de acuerdo a su
estructura química puede ser: fenoles, quinonas, aminas, enzimas, etc. (3)
El estudio de plantas que tengan propiedades antioxidantes es importante pues
ayuda a futuras investigaciones enfocadas en la disminución de radicales libres, en
los últimos años se han realizado investigaciones parar determinar el papel de estos
en el desarrollo de las enfermedades. (4). Nos hemos basado en los siguientes
estudios para desarrollar nuestra investigación:
Yovera Sirlupú, V. P. (2019), evaluó el efecto antioxidante del extracto
hidroalcohólico de hojas de Bixarellana (Achiote) en Rattus rattus var. Albinus con
hepatotoxicidad inducida. En la parte de resultados de la investigación esta
evidencia que el extracto hidroalcohólico de las hojas de Bixa Orellana (Achiote)
presentó efecto antioxidante en Rattus rattus var. Albinus con hepatotoxicidad
inducida, presentando el efecto antioxidante en las dosis de: 300mg/kgpc(0.0265
μM de MDA) y 500mg/Kgpc(0.0180 μM de MDA). Recomendando el uso de Bixa
Orellana como parte de tratamiento en medicina natural en patologías asociadas a
la oxidación, que puedan aquejar a la sociedad. (6)
Zapana John (2018), este trabajo de tesis se realiza esperando evaluar una
respuesta tisular luego de la aplicación de extracto de Pinco-pinco (Ephedra
americana) en tejido óseo y mucosa oral de cobayos del género Cavia porcellus.
Trabajaron con una muestra de 16 cobayos divididos en 4 grupos y las
concentraciones de extracto aplicadas estuvieron al 100%, 75% y 50%.
Concluyeron que al extracto de E. americana inducia a la cicatrización de mucosa
oral en 14 días, a diferencia de la cicatrización de tejido óseo el cual no se completó
en los 28 días proyectados de aplicación, observando un desarrollo de
vascularización en comparación con otros grupos. En consecuencia, determinaron
que un tratamiento con extracto de Ephedra americana podría acelerar el proceso
de regeneración de la mucosa oral como del tejido óseo. (5)
Chilquillo Torres, H. M., & Cervantes Macizo, R. G. (2017). Realizan el trabajo de
investigación Efecto antiinflamatorio, analgésico y antioxidante del extracto
hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens (Humb. & Bonpl.) Cuatrec. “vira-
vira”, esta especie herbácea de uso medicinal analgésico y antiinflamatorio en el
9
cual se plantan investigar y corroborar sus efectos farmacológicos. Concluyendo
que el extracto hidroalcohólico de Senecio canescens (Humb. & Bonpl.) Cuatrec.
“vira-vira” contiene en su composición alcaloides, triterpenos, flavonoides y
saponinas. También concluyen que presenta mejor capacidad antiinflamatoria a
una dosis de 500 mg/kg en comparación del patrón ibuprofeno 120mg/kg y
prednisona 1,2mg/kg; mayor efecto analgésico en dosis de 1200 mg/kg en
comparación de una solución referencia de Tramadol. Se evidencia una capacidad
antioxidante determinada con la actividad de las enzimas SOD (176,52 y 184,11
U/mL) y GPx (6576,36 y 7039,02 U/mL) pues redujo los niveles de peroxidación
lipídica de MDA (10,76; 7,κλ y 5,4 ȝmol/mL sangre), todas ellas comparadas con su
el grupo control respectivo. (7)
Wajdy Al-Awaida (2018), Potenciales anticancerígenos, antiinflamatorios y
antioxidantes in vitro de Ephedra aphylla, este estudio nos habla de los efectos
medicinales de la variedad de E. aphyllla, su análisis fitoquímico muestra la
presencia de alcaloides, flavonoides, taninos condensados, triterpenos y glucósidos
cardiacos, compuestos que tienen actividad medicinal contra diversas
enfermedades (11). Dando como resultado que muestra un fuerte potencial
antiproliferativo contra las líneas celulares de cáncer de mama y que sus
propiedades se pueden deber a la presencia de fitoquímicos como los alcaloides,
fenoles y flavonoides. (12)
Hernán G. Bach (2017), elaboraron el trabajo “Dinámica de polifenoles en Ephedra
tweediana  Fisch  &  C.  A.  Mey.  emend.  J.  H.  Hunz.  (Ephedraceae)”,   en  el  cual
analizan la planta Ephedra tweediana  conocida como “tramontana”, utilizada en la
medicina popular como antiasmática, realizando un análisis comparativos entre los
extractos acuosos de los tallos herbáceos, lignificados y partes subterráneas de la
planta, provenientes de géneros masculinos y femeninos. Encontraron que en los
tallos se encontraba la mayor concentración de ácidos hidroxiamínicos totales y
flavonoides, observando variaciones que corresponde al sexo de la planta y a las
diferentes partes de la misma, por lo que las variaciones encontradas deben de ser
tomadas en cuenta para realizar extractos o preparados pues puede variar su
actividad biológica. (13)
10
Bouafia W (2020), Quantification of total bioactive contents and evaluation of the
antioxidant and antibacterial activities of crude extracts from Ephedra altissima. La
investigación describe la actividad biológica in vitro del extracto crudo de Ephedra
altissima, los análisis fitoquímicos revelaron la presencia de diversas clases de
metabolitos secundarios, se encontró que el extracto acuoso etanólico tuvo la
mayor capacidad antioxidante en comparación al extracto acuoso. Todos los
extractos mostraron efecto antibacteriano en las cepas estudiadas. Dando como
conclusión que la planta Ephedra altissima podría usase como una fuente de
moléculas bioactivas naturales con propiedades antioxidantes y antibacterianas.
(14).
Asimismo, el presente trabajo de investigación tiene como objetivo general:
Realizar el tamizaje fitoquímico y determinar la capacidad antioxidante comparativa
in vitro de los extractos polares de la parte aérea de Ephedra americana humb. &
bonpl. ex will (PINCO-PINCO).
Por ello se plantea como hipótesis general. El extracto polar de la parte aérea de
Ephedra americana humb. & bonpl. Ex Will (PINCO – PINCO), tiene capacidad
antioxidante, la cual está relacionada en forma proporcional a la concentración de
extracto polar de nuestra investigación.
11
II. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1. ENFOQUE Y DISEÑO DE INVESTIGACIÓN
a) Tipo de investigación
- Analítico: Se fijó la relación que hay entre las variables que forman parte
del estudio.
- Prospectivo: El procedimiento de la recolección de los datos que forman
parte del estudio, se realizaron después de iniciar con el trabajo de
investigación.
- Longitudinal: Con respecto a la variable independiente, esta fue
cuantificada en diferentes concentraciones.
b) Nivel de Investigación
- Explicativo: En la presente investigación los hechos se relacionaron
basándose en una explicación en las que se vincule a la causa-efecto.
c) Método de la investigación
- Deductivo: Esta investigación hizo uso del conocimiento en que
diversos extractos, elaborados de diferentes especies del reino vegetal
tienen capacidad antioxidante, en consecuencia, se infiere que el
extracto polar de Ephedra americana Humb. & Bonpl. ex Will (Pinco-
Pinco), poseería la capacidad antioxidante.
d) Diseño de la investigación
- Experimental: Nuestra investigación fue de diseño experimental, pues
se manipularon la variable independiente esto bajo control, empleando
equipos tecnológicos que nos aseguraron obtener datos exactos, todo
ello formando parte del desarrollo del método científico.
2.2. POBLACIÓN, MUESTRA Y MUESTREO
a) Población
- Se recolectó 10 kg de parte aérea de Ephedra americana Humb.  &
Bonpl. ex Will. (Pinco-Pinco) del distrito de Yarabamba, Provincia y
Departamento de Arequipa.
b) Muestra
- Se empleó 1 kg de parte aérea de Ephedra americana Humb. & Bonpl.
ex Will. (Pinco-Pinco) del distrito de Yarabamba, Provincia y
Departamento de Arequipa.
12
c) Muestreo
- Criterios de inclusión
Tallos en buen estado, verdes y hojas sanas.
- Criterios de exclusión
Tallos viejos, tallos amarillos, tallos perforados, tallos con presencia
organismos ajenos a la planta.
2.3. VARIABLES DE INVESTIGACIÓN
a) Variable independiente: Extracto polar de la parte aérea de Ephedra
americana Humb. & Bonpl. ex Will (Pinco Pinco).
b) Variable dependiente: Capacidad antioxidante.
2.4. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS
Se procedió a tabular los resultados de manera estructurada, en la cual se muestran
plasmados todos nuestros datos obtenidos una vez concluimos el tamizaje
fitoquímico y la capacidad antioxidante del extracto polar de la parte aérea de
Ephedra americana Humb. & Bonpl. ex Will. (Pinco-Pinco).
2.5. PROCESO DE RECOLECCIÓN DE DATOS
A. Plan de recolección de datos.
Nuestros resultados se obtuvieron dentro de las instalaciones del Instituto
Científico Michael Owen Dillon (IMOD) y del Instituto de Investigación
Traslacional y Biotransversal Ayru SAC.
B. Acondicionamiento de la muestra botánica
Se procedió a limpiar las muestras vegetales de la parte aérea de Ephedra
americana Humb. & Bonpl. ex Will. (Pinco-Pinco); las cuales estuvieron
comprendidas de tallos y hojas. Usando criterios de exclusión para aquellos
especímenes vegetales que no se encontraban aptos para ser parte de estudio
(hojas en mal estado, con presencia de manchas, marchitas, etc).
Una vez determinados los especímenes vegetales a utilizar, se eliminó residuos
en el mismo tales como tierra, manchas, etc.; con agua potable y luego se
13
procedió a la desinfección de los mismos para la eliminación de posibles
agentes contaminantes.
La muestra se tapa con papel filtro, evitando la exposición directa a la luz solar.
Una vez seco la muestra se cortó en trozos más pequeños hasta un equivalente
de 100mg de muestra.
C. Obtención del extracto polar de Ephedra americana Humb. & Bonpl. ex
Will. (Pinco-Pinco)
Extracto hidroalcohólico: Una vez alcanzado el peso equivalente de 100 g en
trozos de la parte aérea de Ephedra americana Humb. & Bonpl. ex Will. (Pinco-
Pinco), se transfirió la muestra a un recipiente de vidrio con capacidad nominal
mínima de 1 litro, se procede añadir la solución hidroalcohólica de 70°,
manteniendo una proporción de 1:10 de muestra/volumen (por cada litro de
solución hidroalcohólica le corresponde 100 gramos de muestra), siempre
dejando la muestra sumergida en el solvente durante 8 a 10 días, diariamente
se procede a realizar movimientos de uniformización por 3 minutos en la
mañana y tarde, al décimo día se procede a filtrar en un vaso precipitado
beaker, el cual fue llevado a baño maría  a temperatura de 40°C hasta la
vaporación del solvente, posteriormente el extracto fue obtenido mediante
raspado del beaker, utilizando una espátula de acero inoxidable, para luego ser
trasvasado, pesado y rotulado en un receptáculo de vidrio color ámbar y se
procedió a etiquetarlo.
Extracto acuoso: Luego de obtener 100 g de trozos de la parte aérea de
Ephedra americana Humb.  &  Bonpl.  ex  Will. (Pinco-Pinco), se sometieron a
infusión, luego se procede a realizar la filtración, para luego finalmente proceder
con la desecación y para ello se sometió la muestra a refrigeración a 5°C
durante 3 días.
14
D. Aplicación de instrumentos de recolección de datos
En el análisis del presente trabajo de investigación se emplearon equipos
analíticos como el espectrofotómetro ultravioleta – visible (UV.) Marca: Thermo
Scientific, tubos de ensayo y reactivo DPPH de la empresa Sigma Aldrich.
E. Determinación de la capacidad antioxidante mediante la técnica 2,2-
Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPH)
Se determinó la capacidad antioxidante del extracto polar usando la técnica que
utiliza el radical libre 2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPH), técnica elaborada por
Brand- William y mejor conocida como DPPH. La técnica se basa en la reacción
del radical con compuestos antioxidantes, mediante la cesión de un átomo de
hidrógeno que es brindado por el agente antioxidante. La reacción presenta una
fase inicial rápida, seguida por una reacción lenta, la cual puede medirse a
través del tiempo por la disminución de la absorbancia en función del tiempo.
La reacción química es una reacción de óxido – Reducción.
La reacción se presenta de la siguiente forma:
Figura 1: Reacción del radical con compuestos antioxidantes.
De acuerdo con la metodología el reactivo DPPH presenta un color azul-violeta
intenso al inicio de la reacción, decolorándose a en amarillo ligero luego de
reaccionar con el analito. Este cambio de color nos indica la transferencia de
hidrógeno desde el antioxidante presente en la muestra hacia el reactivo, es
decir que la variación de color en la muestra corresponde proporcionalmente a
la capacidad antioxidante.
Esta es medida a través de Espectroscopia Ultravioleta – Visible (UV) la
absorbancia del reactivo DPPH es de 517 nm, el valor de la misma se reduce
progresivamente al contacto con el antioxidante. La variación en la absorbancia
determino la actividad oxidante del analito y se calculó mediante la C.I.50
(capacidad inhibitoria media) por medio del porcentaje de reducción de DPPH,
15
es decir C.I.50 mide la concentración de antioxidantes requeridos para inhibir un
50% de las moléculas de DPPH, este proceso tiene un ciclo de tiempo
aproximado que varía de 15 a 30 minutos, por lo que a menor cantidad de C.I.50
se deduce una mayor capacidad antioxidante de la muestra. (16)
Procedimiento
Se procedió a preparar las siguientes soluciones:
- Solución para el patrón de referencia: Solución metanólica de Trolox a
1000uM (tipo de solución: solución madre). Desde la solución madre del
estándar de Trolox se realizaron disoluciones en metanol obteniendo
soluciones de 100, 200, 400, 800 y 1000 uM, estas soluciones sirvieron para
realizar la curva de calibración.
- Solución DPPH: solución metanólica de DPPH al 0.1 mM
- Solución Blanco: Se usaron 0,7mL del solvente (metanol) y se adicionó
1,4mL de DPPH con 1,4mL de metanol más y 0,7mL de agua desionizada,
esta solución se usó para ajustar el espectrofotómetro a cero.
- Blanco de la muestra: 1,4mL de metanol más 0,7mL de muestra.
- Preparación de las muestras con solución DPPH: Se evaluó la capacidad
antioxidante de acuerdo con el siguiente método; se usaron 3 tubos de
ensayo y en ellos se colocaron 0,7 mL de cada muestra (extracto polar de
Ephedra americana Humb. & Bonpl. ex Will. “Pinco-Pinco” en
concentraciones de 100 ug/mL, 500ug/mL y 1000ug/mL), se le adicionó 1,4
mL de la solución DPPH a 0,1 mM, se homogenizó en vórtex y se dejó en
reposo durante 30 minutos en temperatura ambiente y protegido de la luz,
transcurrido este periodo, se procedió a cuantificar la absorbancia a 517 nm
en el espectrofotómetro Ultravioleta-Visible. Los ensayos se realizaron en
triplicado (n=3) y los cálculos se expresaron en porcentaje DPPH remanente
(% DE INHIBICIÓN), así como también en equivalentes Trolox.
- El porcentaje de DPPH residual (% DE INHIBICIÓN) fue calculado según la
fórmula:
16
Figura 2: Cálculo para la capacidad antioxidante con DPPH.
Dónde:
- Ai: Absorbancia inicial de DPPH
- Af: Absorbancia final de DPPH después de 30 min.
El cálculo realizado para la expresión de la capacidad antioxidante en
equivalentes Trolox fue el siguiente:
- Se calculó la proporción porcentual de inhibición del radical DPPH con la
fórmula descrita.
- Se calculó la capacidad antioxidante equivalente a Trolox. Se despejó X en
la fórmula de la recta del estándar de Trolox (Y = a X + b), se sustituyó el
valor de la proporción porcentual de inhibición obtenida y se resolvió la
fórmula.
- Al valor resultante se multiplicó por el factor de dilución correspondiente para
obtener así la capacidad antioxidante equivalente al valor Trolox real.  En el
presente estudio correspondió a: 4/0.1 (donde 4 es el volumen final de
reacción expresado en mL y 0,1 el volumen expresado en mL de la muestra
tomada). Por lo que los resultados se expresaron finalmente en umol de
Trolox/100mL
- Finalmente, para expresar los resultados por gramo de producto, al valor
correspondiente obtenido se multiplicó por el equivalente en gramos de
muestra contenida en 100 mL. Se expresaron los resultados en uM
Equivalente Trolox.
2.6. MÉTODOS DE ANÁLISIS ESTADÍSTICO
El análisis estadístico que se empleó para establecer nuestros datos obtenidos fue
utilizando el software Microsoft Excel y los cálculos de linealidad entre las variables
de la capacidad antioxidante se llevó a cabo por regresión lineal. No obstante, se
utilizó el análisis de varianza al 95%.
17
2.7. ASPECTOS ÉTICOS
El presente trabajo de investigación se realizó respetando los preceptos de ética
con los que debe de contar una investigación, declaramos que los datos
consignados en la misma son válidos y legítimos, lo que le confiere la característica
de ser fiable, oportuna y pertinente.
Las muestras utilizadas fueron de origen vegetal y los análisis desarrollados en esta
fueron in vitro. Así mismo debemos indicar que los procesos efectuados se
realizaron de acuerdo con normativas correspondientes a un laboratorio de
investigación, dentro de las limitaciones en las cuales nos encontramos por la
coyuntura actual.
18
III. RESULTADOS
3.1. Determinación taxonómica de Pinco Pinco
Tabla 1: Determinación taxonómica de la parte Aérea del Pinco Pinco
(Ephedra americana humb. & bonpl. ex will)
Clase Equisetopsida C. Agardh
Subclase Gnetidae Pax
Orden Ephedrales Dumort
Familia Ephedraceae Dumort
Género Ephedra L.
Especie Ephedra americana Humb. &Bonpl. Ex Willd
3.2. Obtención de datos en recolección de Pinco Pinco
Tabla 2: Datos obtenidos en la recolección del Pinco Pinco (Ephedra
americana humb. & bonpl. ex Will)
DATOS RESULTADOS
Nombre Común: Pinco Pinco
Nombre Científico: Ephedra americana humb.  &
bonpl. ex will
Lugar de Departamento de Arequipa,
Recolección: Provincia de Arequipa, Distrito de
Yarabamba
Parte a utilizar: Parte Aérea
Extracto a utilizar: Extracto Acuoso / Hidroalcohólico
19
3.3. Del tamizaje farmacognóstico
Tabla 3: Resultados del tamizaje fitoquímico del extracto acuoso y
extracto hidroalcohólico de Pinco Pinco.
SUSTANCIAS RESULTADO DE REACCIÓN
QUÍMICAS ENSAYO Extracto
CONSTITUTIVAS Extracto acuoso hidroalcohólico
Compuestos fenólicos Reactivo de FeCl3 5% +++ +++
Taninos Reactivo de Gelatina 1% +++ +++
Flavonoides Reactivo de Shinoda +++ +++
Esteroides y Reactivo de Liebermann
- +
triterpenoides Burchard
Cardenólidos Reactivo de Baljet - ++
Reactivo de Dragendorff + ++
Alcaloides
Reactivo de Mayer + ++
Antraquinonas Reactivo de Borntranger - -
Saponinas Reacción Espuma - -
Tabla 4: Interpretación de resultados en el tamizaje fitoquímico de la parte
Aérea del Pinco Pinco (Ephedra americana humb. & bonpl. ex Will)
Leyenda Resultado
Abundante +++
Moderado ++
Leve +
Ausencia -
20
En la tabla N° 04. Se están presentando en forma detallada los resultados
obtenidos del tamizaje fitoquímico en el extracto acuoso e hidroalcohólico de la
parte aérea del Pinco-Pinco, dándonos como resultados una abundante presencia
de Compuestos fenólicos, taninos, flavonoides, tanto en el extracto acuoso e
hidroalcohólico. Tales principios activos le confieren al extracto capacidad
antioxidante. No obstante, en el extracto hidroalcohólico también hay presencia de:
alcaloides y cardenólidos de carácter moderado.
3.4. De la cuantificación de compuestos fenólicos
Curva de calibración para compuestos fenólicos
0.600
y = 0.001058x + 0.011612
0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
0 100 200 300 400 500 600
mg Equiv. ácido gálico/g extracto
Figura 3: Curva de calibración para compuestos fenólicos
Tabla 5: De la cuantificación de compuestos fenólicos
EXTRACTO EXTRACTO
DETERMINACIÓN
ACUOSO HIDROALCOHÓLICO
Cantidad de compuestos
Fenólicos totales (expresado en
5.229 8.174
miligramos de Equivalente ácido
gálico/gramo de extracto seco)
En la tabla N° 05. Se estas representando los resultados obtenidos en el cual el
extracto hidroalcohólico de la parte aérea del Pinco Pinco, presenta mayor cantidad
de fenoles totales en comparación con el extracto acuoso
21
Absorbancia
3.5. De la capacidad antioxidante según el método DPPH
Tabla 6: Resultados del patrón de referencia para DPPH: Trolox
ECUACIÓN RECTA DE TROLOX 100 200 400 800 1000
0.814 0.721 0.536 0.204 0.028
Absorbancias
Absorbancia Inicial DPPH: 0.8667 0.813 0.724 0.538 0.211 0.021
0.809 0.723 0.533 0.206 0.023
Media de absorbancias 0.812 0.723 0.536 0.207 0.024
Absorbancia Inicial DPPH – 0.055 0.144 0.331 0.660 0.843
promedio de Absorbancia TROLOX
Proporción Porcentual de Inhibición 6.308 16.615 38.192 76.115 97.231
120.000
Y = aX + b
97.231
100.000 Y = 0.1002051X – 3.21025641
2 76.115
80.000 R = 0.995
60.000
38.192
40.000
16.615
20.000
6.308
0.000
0 200 400 600 800 1000 1200
Trolox uM
Figura 4: Recta de Equivalente Trolox para DPPH.
Figura N° 04: Esta figura nos representa una recta que se obtuvo mediante el
empleo del software Microsoft Excel, en los cuales están vinculados los “X”
(Concentración de equivalente trolox), “Y” (Proporción porcentual de Inhibición),
esta relación entre los ejes, nos da un valor R2 de 0.995, esto nos lleva decir que
hay un 99.5% de probabilidad que a mientras mayor sea el valor del eje “X”, mayor
será “Y”, dicha relación es directamente proporcional, esto asegurando que
nuestros resultados serán positivos
22
% INHIBICIÓN
Tabla 7: Estadística de Regresión
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0.99976
Coeficiente de determinación R^2 0.99953
R^2 ajustado 0.99938
Error típico 0.966
En la tabla N° 07. Están representados por datos estadísticos de regresión, a partir
del programa Excel de Microsoft, donde podemos apreciar que el coeficiente de
correlación múltiple obtenido nos da un resultado equivalente a 0.99976, este
número es equivalente a 1, estos nos garantizan que hay una alta correlación entre
la concentración del trolox (Variable X) y el porcentaje de inhibición (Variable Y)
Tabla 8: Análisis de la Varianza (ANOVA)
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de Suma de Promedio de Valor
libertad cuadrados los Fcuadrados crítico de F
Regresión 1 6024.645 6024.600 6452.260 0.000
Residuos 3 2.801 0.934
Total 4 6027.446
En la tabla N° 08. Están representados los datos obtenidos mediante el programa
Excel de Microsoft, respecto al Análisis de la Varianza (ANOVA) el cual tiene un
grado de significancia de 95%, dato por el cual nos permite aceptar como también
rechazar la hipótesis nula, a continuación, se procede con ello:
H0: No existe correlación entre el eje “X” y “Y”
H1: Existe correlación entre el eje “X” y “Y”
23
El valor critico de F es 0.00, este dato es menor a 0.05 (grado de significancia al
95%), esto nos permite rechazar la hipótesis nula H0 y aceptar la hipótesis H1, y al
afirmar la H1 confirmamos que si hay relación entre nuestras variables “X” y “Y”
3.6. De la capacidad antioxidante del extracto acuoso
Utilizando el procedimiento DPPH, obtuvimos los siguientes resultados: 851.894 en
1000ug/mL, 553.275 en 500ug/mL y 181.922 en 100ug/mL, del extracto acuoso
siendo estos valores expresados en uM Equivalente Trolox.
Tabla 9: Resultado de la capacidad antioxidante del extracto acuoso
EXTRACTO ACUOSO DE PINCO PINCO 1000 ug/mL 500 ug/mL 100 ug/mL
0.157 0.416 0.735
Absorbancias 0.156 0.412 0.738
(Absorbancia Inicial DPPH: 0.8667) 0.151 0.413 0.734
Media de absorbancias 0.155 0.414 0.737
Absorbancia DPPH - Absorbancia Muestra 0.712 0.453 0.130
Proporción porcentual de Inhibición 82.154 52.231 15.019
uM Equivalente Trolox 851.894 553.275 181.922
900.000
800.000
700.000
600.000
500.000 851.894
400.000
300.000 553.275
200.000
100.000 181.922
0.000
100 ug/mL 500 ug/mL 1000 ug/mL
Figura 5: Capacidad antioxidante del extracto acuoso uM Equiv. Trolox.
Figura N°05. En esta figura se evidencia los valores resultantes, posterior a la
utilización del método DPPH, siendo directamente proporcional, esto quiere decir
24
uM Equivalente Trolox
que, a mayor concentración del extracto acuoso, mayor será el porcentaje de
inhibición, ello está representado mediante μM Equiv. Trolox.
3.7. De la capacidad antioxidante del extracto hidroalcohólico
De acuerdo con el método de DPPH, se obtuvieron: 1000.435 para 1000ug/mL,
781.845 para 500ug/mL y 442.733 para 100ug/mL del extracto hidroalcohólico,
estos resultados fueron expresados en uM Equivalente Trolox.
Tabla 10: Resultados de la capacidad antioxidante del extracto
hidroalcohólico
EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO 1000 ug/mL 500 ug/mL 100 ug/mL
0.023 0.217 0.509
Absorbancias 0.028 0.214 0.511
(Absorbancia Inicial DPPH: 0.8667) 0.026 0.213 0.510
Media de absorbancias 0.026 0.216 0.510
Absorbancia del Blanco DPPH –
Absorbancia de la Muestra (media) 0.841 0.651 0.357
Proporción porcentual de Inhibición 97.038 75.135 41.154
uM Equivalente Trolox 1000.435 781.845 442.733
1200.000
1000.000
800.000
600.000 1000.435
781.845
400.000
442.733
200.000
0.000
100 ug/mL 500 ug/mL 1000 ug/mL
Figura 6: Capacidad antioxidante del extracto hidroalcohólico uM Equiv. Trolox
Figura N° 06: En esta figura se evidencia los valores resultantes, posterior a la
utilización del método DPPH, siendo directamente proporcional, esto quiere decir
25
uM Equivalente Trolox
que, a mayor concentración del extracto hidroalcohólico, mayor será el porcentaje
de inhibición, ello está representado mediante μM Equiv. Trolox.
26
IV. DISCUSIÓN
4.1 Discusión de resultados
En nuestro trabajo de investigación se hizo identificación de metabolitos
secundarios encontrándose abundante Compuestos fenólicos, taninos,
flavonoides, tanto en el extracto acuoso e hidroalcohólico. Así mismo se puede
identificar la presencia de otros constituyentes químicos de interés como
Cardenólidos y Alcaloides, los cuales también presentan propiedades medicinales
y podrían ser sujeto de investigaciones posteriores.
Así como hay estudios referentes a la composición fitoquímica y capacidad
antioxidante del Pinco Pinco, también hay estudios referentes a propiedades
anticancerígenas y antiinflamatorias, tal es el caso de Wajdy Al-Awaida (2018),
sobre Ephedra aphylla, este estudio nos habla de los efectos medicinales de la
variedad de E. aphyllla, su análisis fitoquímico muestra la presencia de alcaloides,
flavonoides, taninos condensados, triterpenos y glucósidos cardiacos, compuestos
que tienen actividad medicinal contra diversas enfermedades (11). Finalmente
dando resultado que muestra un fuerte potencial antiproliferativo contra las líneas
celulares de cáncer de mama y que sus propiedades se pueden deber a la
presencia de fitoquímicos como los alcaloides, fenoles y flavonoides. (12)
Hernán G. Bach (2017), trabajo con Ephedra tweediana Fisch & C. A. Mey. emend.
J. H. Hunz., dicha planta pertenece a la misma familia del Pinco Pinco, la primera
en mención se le atribuyen propiedades antiasmáticas, para ello compararon sus
extractos acuosos en sus géneros (masculino y femenino), encontrando que el tallo
posee mayor concentración de ácidos hidroxiamínicos totales y flavonoides, por lo
que guarda relación en composición al Pinco Pinco, dichos datos serán
considerados en cuenta, para comprobar su actividad biológica. (13)
En la investigación realizada por Bouafia W (2020), donde realizaron la actividad
biológica in vitro de Ephedra altissima, en diferentes extractos (acuoso y etanólico),
hallando que el extracto etanólico, presenta mejor propiedad antibacteriana y
antioxidante, esto es un indicio de que plantas de la misma familia también tengan
dichas propiedades, lo cual se verificó en la investigación, ya que el extracto
27
hidroalcohólico del Pinco Pinco, si presento mayor porcentaje de inhibición que el
extracto acuoso (14).
4.2. Conclusiones
1. Se realizó el tamizaje fitoquímico y se determinó la capacidad antioxidante
comparativa in vitro de los extractos polares de la parte aérea de Ephedra
americana humb. & bonpl. ex will (PINCO-PINCO), concluyendo que el
extracto hidroalcohólico presenta mayor capacidad antioxidante, debido a su
mayor contenido de fenoles.
2. Se identificó los principales metabolitos secundarios mediante tamizaje
fitoquímico en los extractos polares de la parte aérea de Ephedra americana
humb. & bonpl. ex will (PINCO-PINCO), siendo los más abundantes:
Compuestos fenólicos, taninos, flavonoides, tanto en el extracto acuoso e
hidroalcohólico.
3. Se determinó la capacidad antioxidante comparativa in vitro del extracto
acuoso de la parte aérea de Ephedra americana humb. & bonpl. ex will
(PINCO-PINCO). Siendo directamente proporcional a su concentración: 100
ug/mL, 500 ug/mL y 1000 ug/mL, dando como resultados las siguientes
proporciones porcentuales de inhibición 15.019%, 52.231% y 82.154%
respectivamente
4. Se determinó la capacidad antioxidante comparativa in vitro del extracto
hidroalcohólico de la parte aérea de Ephedra americana humb. & bonpl. ex
will (PINCO-PINCO). Siendo directamente proporcional a su concentración:
100 ug/mL, 500 ug/mL y 1000 ug/mL, con las siguientes proporciones
porcentuales de inhibición 41.154%, 75.135% y 97.038% respectivamente
4.3.  Recomendaciones
A. Se recomienda el uso del Pinco Pinco, debido a su capacidad antioxidante, ya
que dicha propiedad confiere al organismo humano mayor salud frente a
diversas enfermedades.
B. Nuestra investigación va orientada a ser información estimable, para poder
inculcar a estudiantes de ciencias de salud y pacientes, la revalorización de
las propiedades de especies vegetales con propiedad antioxidante, en zonas
28
aledañas, en las que un producto farmacéutico no es accesible a ellos y
también a la población en general que quiera consumir productos naturales
C. Se recomienda en un futuro elaborar una forma farmacéutica, en base a
nuestra especie vegetal, para luego hacerle examen de estabilidad y poder
incentivar su uso masivo para toda la población que quiera mejorar su salud
29
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Pecho S, Navarro A, Panduro V, Arteaga K. COVID-19: ¿cómo proteger a
los que nos protegen? Rev Cubana Inv Bioméd. [Internet] 2020 [Consultado
10 May 2021]; 39(2). Disponible en:
http://www.revibiomedica.sld.cu/index.php/ibi/article/view/760/689 .
2. Ochoa W, Rodríguez L. Fitoterapia altoandina como potencial ante la
COVID-19. Rev Cubana Inv Bioméd [Internet] 2021 [Consultado 10 May
2021]; 39(4). Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-
03002020000400018#B5 .
3. Bonilla P, Pareja B. Flavonoides de Ephera americana (pinco pinco), Acción
biológica sobre el sistema inmunológico (IgE). Ciencia e investigación
[Internet] 2001 [Consultado 9 May 2021]; 4(1). Disponible en:
https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/farma/article/view/33
98 .
4. Viada E, Gómez L, Campaña I. Estrés oxidativo. Correo Científico Médico
[Internet] 2017 [Consultado  07 Abr 2021];  21( 1 ). Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1560-
43812017000100014&lng=es .
5. Zapana J. Respuesta Tisular a la aplicación del extracto de Pinco-Pinco
(Ephedra amercana) en mucosa oral y tejido óseo de cobayos (Cavia
porcellus) [Internet].  Puno – Perú; 2018. [Consultado 18 Oct 2021].
Disponible en: http://repositorio.unap.edu.pe/handle/UNAP/7144
6. Yovera V. Efecto Antioxidante Del Extracto Hidroalcohólico De Hojas De Bixa
Orellana (Achiote) En Rattus Rattus Var. Albinus Con Hepatotoxicidad
Inducida. [Internet] Trujillo – Perú; 2019 [Consultado 7 abr 2021]. Disponible
en: http://repositorio.uladech.edu.pe/handle/123456789/10985
7. Chilquillo H, Cervantes R. Efecto antiinflamatorio, analgésico y antioxidante
del extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio Canescens (Humb. &
Bonpl.) Cuatrec. “vira-vira”. [Internet] Lima – Perú; 2017 [Consultado 7 abr
30
2021]. Disponible en:
https://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/handle/20.500.12672/6416/Chilq
uillo_th.pdf?sequence=1&isAllowed=y
8. Arias A, Rueda L. Cinética de la reacción de los radicales libres con
antioxidantes naturales, fenoles [Internet] Bucaramanga – Colombia; 2016
[Consultado 10 abr 2021]. Disponible en:
https://www.researchgate.net/profile/Anderson-
Arias/publication/311678504_Cinetica_de_la_reaccion_de_los_radicales_li
bres_con_antioxidantes_naturales_fenoles/links/58540ae808ae81995eb1c
dc3/Cinetica-de-la-reaccion-de-los-radicales-libres-con-antioxidantes-
naturales-fenoles.pdf
9. Al-Awaida, Wajdy et al. “In vitro anticancer, anti-inflammatory, and
antioxidant potentials of Ephedra aphylla.” Journal of cancer research and
therapeutics vol. 14,6 (2018): 1350-1354. doi:10.4103/0973-1482.196760.
Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30488855/
10. Halliwell B. Antioxidants in human health and disease. Annu Rev Nutr.
1996;16:33-50. doi: 10.1146/annurev.nu.16.070196.000341. PMID:
8839918. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8839918/
11. Al-Awaida W, Al-Hourani BJ, Akash M, Talib WH, Zein S, Falah RR,
Aburubaiha Z. In vitro anticancer, anti-inflammatory, and antioxidant
potentials of Ephedra aphylla. J Cancer Res Ther. 2018 Oct-Dec;14(6):1350-
1354. doi: 10.4103/0973-1482.196760. PMID: 30488855. Disponible en:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30488855/
12. Bach H, Iturbe N, Agudelo I, Wagner M, Ricco R.  Dinámica de polifenoles
en Ephedra tweediana Fisch & C. A. Mey. emend. J. H. Hunz.
(Ephedraceae). Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales
y Aromáticas [Internet]. 2017 [Consultado 12 abr 2021];16(1). Disponible en:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=85649119001.
13. Bouafia W, Mouffouk S, Haba H. Quantification of total bioactive contents
and evaluation of the antioxidant and antibacterial activities of crude extracts
31
from Ephedra altissima Desf. Acta Sci. Biol. Sci. [Internet]. 30º de março de
2021 [citado 8º de abril de 2021];43(1):e52123. Disponíble en:
https://periodicos.uem.br/ojs/index.php/ActaSciBiolSci/article/view/52123
14. Instituto Nacional del Cáncer. Antioxidantes y prevención del cáncer.
Disponible en: https://www.cancer.gov/espanol/cancer/causas-
prevencion/riesgo/dieta/hoja-informativa-antioxidantes#r5 [ Fecha de
acceso: 07/04/2021).
15. Guija E, lnocente M, Ponce J, Zarzosa E. Evaluación de la técnica 2,2-
Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPH) para determinar la capacidad antioxidante.
SciELO (scientific electronic library online) [Internet] Lima – Perú,
Enero/Marzo 2015. [Consultado 28 Ago 2021] Disponible en:
http://www.scielo.org.pe/pdf/hm/v15n1/a08v15n1.pdf
16. Vidaurre M, Querevalú L, De los Rios E, Ruiz S. Características
farmacognósticas de las hojas de Capparis avicennifolia. Rev. Med.
Vallejiana [Internet]. 2007. [Consultado 28 Ago 2021] Disponible en:
https://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/rmv/v04n2/pdf/a04v4n2.pdf
32
ANEXOS
33
ANEXO A: Operacionalización de las variables
SEGÚN SU DEFINICION UNIDAD DE
VARIABLE DIMENSIONES INDICADORES ESCALA
INFLUENCIA CONCEPTUAL MEDIDA
Es el volumen con el que
Extracto polar Concentración 100 ug/mL
se va a trabajar, para luego
de la parte Variable del extracto
medir la capacidad que se 500 ug/mL % Cualitativa
área del Pinco Independiente Acuoso /le puede otorgar debido a
Pinco Hidroalcohólico 1000 ug/mL
su propiedad medicinal
Es la capacidad de un
componente o sustancia
% de reducción
Capacidad Variable de disminuir la Reducción del % de
del radical Cuantitativa
antioxidante Dependiente concentración de radicales radical DPPH InhibiciónDPPH
libres favoreciendo una
acción antioxidante
34
ANEXO B: Matriz de Consistencia
PROBLEMAS DE OBJETIVOS DE HIPÓTESIS DE TIPO Y NIVEL DE METODO Y DISEÑO DE VARIABLES POBLACION Y MUESTRA
INVESTIGACIÓN INVESTIGACIÓN INVESTIGACIÓN INVESTIGACIÓN INVESTIGACION
Problema Objetivo General Hipótesis General Tipo de Método de la Variable Población y muestra
General -El extracto polar de la Investigación: investigación Independiente
- Realizar el tamizaje fitoquímico parte aérea de Ephedra   -Analítico: Se Deductivo: Esta Población: Se recolectó 10
-¿Los extractos y determinar la capacidad americana humb. & pretende fijar la investigación hace uso del - Extracto polar kg de parte aérea de Ephedra
polares de la parte antioxidante comparativa in vitro bonpl. ex will (PINCO- relación que hay entre conocimiento en que de la parte aérea americana Humb. & Bonpl.
aérea de Ephedra de los extractos polares de la PINCO), tiene las variables que diversos extractos de Ephedra ex Will. (Pinco-Pinco) del
americana humb parte aérea de Ephedra capacidad antioxidante, forman parte del elaborados de diferentes americana distrito de Yarabamba,
& bonpl. ex will americana humb. & bonpl. ex will la cual esta relacionada estudio. especies vegetales, tienen Humb. & Bonpl. Provincia y Departamento de
(PINCO-PINCO), (PINCO-PINCO) en forma proporcional a   -Prospectivo: El capacidad antioxidante, por ex Will (Pinco Arequipa.
presentará la concentración del procedimiento de la ello se deduce que el Pinco).
capacidad Objetivo especifico extracto polar de recolección de los extracto polar de Ephedra Muestra: Se empleó 1 kg de
antioxidante? nuestra investigación datos que forman americana Humb. & Bonpl. parte aérea de Ephedra
Identificar los principales parte del estudio, se ex Will (Pinco- Pinco), Variable americana Humb. & Bonpl.
metabolitos secundarios Hipótesis específicas realizaran después de tendrán esta actividad. Dependiente ex Will. (Pinco-Pinco) delProblemas mediante tamizaje fitoquímico en iniciar con la distrito de Yarabamba,específicos los extractos polares de la parte investigación. Diseño de la - Capacidad Provincia y Departamento de
aérea de Ephedra americana -El extracto acuoso de   -Longitudinal: La investigación antioxidante Arequipa.
-¿Cuáles son los humb. & bonpl. ex will (PINCO- la parte aérea de variable Experimental: Esta
metabolitos PINCO). Determinar la Ephedra americana independiente será investigación es de este Muestreo
presentes en los capacidad antioxidante humb. & bonpl. ex will medida en diferentes diseño. Ya que se
extractos polares comparativa in vitro del extracto (PINCO-PINCO), medidas. manipulará la variable Criterios de inclusión
de Ephedra acuoso de la parte aérea de Presenta capacidad Nivel de independiente, esto bajo
americana humb? Ephedra americana humb. & antioxidante. Investigación control, empleando equipos Tallos en buen estado,
& bonpl. ex will bonpl. ex will (PINCO-PINCO).   -Explicativo: Se tecnológicos que nos verdes y hojas sanas.
(PINCO-PINCO)? Determinar la capacidad -El extracto pretende relacionar aseguraran de obtener
antioxidante comparativa in vitro hidroalcohólico de la los hechos basándose datos exactos, todo ello Criterios de exclusión
del extracto hidroalcohólico de la parte aérea de Ephedra en una explicación en formando parte del proceso
parte aérea de Ephedra americana humb. & las que se vincule la del método científico. tallos viejos, tallos amarillos,
americana humb. & bonpl. ex will bonpl. ex will (PINCO- causa-efecto. tallos perforados, tallos con
(PINCO-PINCO). PINCO), Presenta hongos.
capacidad antioxidante
35
ANEXO C: Instrumentos para la recopilación de datos
Determinación taxonómica de Pinco Pinco
Clase
Subclase
Orden
Familia
Género
Especie
Obtención de datos en recolección de Pinco Pinco
DATOS RESULTADOS
Nombre Común:
Nombre Científico:
Lugar de Recolección:
Parte de la planta a utilizar:
Extracto a utilizar:
Del tamizaje farmacognóstico
CONSTITUYENTES ENSAYO REACCIÓN
QUÍMICOS
Extracto Extracto
acuoso hidroalcohólico
Carbohidratos Rvo. Molish
Azúcares reductores Rvo. Fehling
Compuestos fenólicos Rvo. FeCl3 5%
Taninos Rvo. Gelatina 1%
Flavonoides Rvo. Shinoda
Esteroides y triterpenoides Rvo. Liebermann
Burchard
36
Cardenólidos Rvo. Baljet
Alcaloides Rvo. Dragendorff
Rvo. Mayer
Antraquinonas Rvo. Borntranger
Saponinas Rx. Espuma
Interpretación de resultados en el tamizaje fitoquímico
Leyenda Resultado
Abundante +++
Moderado ++
Leve +
Ausencia -
Resultados de la capacidad antioxidante del extracto acuoso
EXTRACTO ACUOSO DE PINCO PINCO 1000 ug/mL 500 ug/mL 100 ug/mL
Absorbancias
(Abs. Inicial DPPH:
0.8667)
Promedio de absorbancias
Abs. DPPH - Abs. Muestra
% Inhibición
uM Equivalente Trolox
Resultados de la capacidad antioxidante del extracto hidroalcohólico
EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO 1000 ug/mL 500 ug/mL 100 ug/mL
Absorbancias
(Abs. Inicial DPPH:
                                  0.8667)
Promedio de absorbancias
Abs. Blanco DPPH - Abs Muestra (promedio)
% Inhibición
uM Equivalente Trolox
37
ANEXO C: Constancia de Determinación de Muestras
38
Constancia de Determinación de Muestras
ANEXO E: Evidencia del trabajo de campo (Fotos)
39
40
41