FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA In vitro DEL LÁTEX DE Synadenium grantii (PLANTA DE LA VIDA) FRENTE A Salmonella entérica ATCC 51741 TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO FARMACÉUTICO AUTORES: Bach. LAUREANO HINOSTROZA, HESTEFANY SHEYLA Bach. MARTINEZ PABLO, LUZ VANESA ASESOR: Mg. ACARO CHUQUICAÑA, FIDEL ERNESTO LIMA – PERÚ 2021 DEDICATORIA Este trabajo de investigación se lo dedico a Dios y a mis padres (Walter y Mariela), por darme la fortaleza de resistir cada inconveniente que se me presentaba, por darme sabiduría de poseer conocimiento logrando usarla con prudencia y sensatez en el transcurso de mi formación profesional. Hestefany Laureano Dedico esta tesis a Dios y a mis padres (Celestino y Luz), que me apoyaron durante los 5 años de mi formación profesional, gracias a los valores que me inculcaron logre terminar la carrera, así poder aplicar mi conocimiento en el campo laboral. Luz Martinez ii AGRADECIMIENTO Agradecemos en primer lugar a Dios, forjador de nuestro camino, por permitirnos vivir este momento de gran importancia en nuestras vidas, tanto en el aspecto personal como profesional y para que siga bendiciéndonos con muchos más logros a lo largo de nuestra existencia. A la Universidad María Auxiliadora, nuestra alma mater, por formarnos con valores que nos harán mejorar cada día como seres humanos y como buenos profesionales, con pasión por la carrera y la labor en la sociedad. A nuestros docentes, por habernos brindado sabiduría, consejos y tiempo en cada ciclo académico, permitiendo adquirir conocimiento y experiencia durante toda nuestra formación universitaria, formándonos como farmacéuticos con perfil de líderes, exitosos, estudiante permanente, comunicador, gestor y sociable. A nuestro asesor Mg. Acaro Chuquicaña Fidel Ernesto, por guiarnos en cada revisión del proyecto, ejecución e informe final de la tesis, de forma meticuloso, tolerante y respetuoso, por apoyarnos y motivarnos en cada obstáculo e inconvenientes que se presentaba en el transcurso de la investigación. Te agradecemos por brindarnos tu sabiduría, dedicación, tiempo y experiencia, haciendo posible culminar nuestra tesis de manera victoriosa. A nuestros amigos y compañeros, por habernos apoyado incondicionalmente en todo el proceso universitario, por formar parte de nuestras vidas compartiendo sus consejos, experiencias. iii ÍNDICE GENERAL DEDICATORIA ................................................................................................... ii AGRADECIMIENTO .......................................................................................... iii ÍNDICE DE TABLAS .......................................................................................... v ÍNDICE DE ANEXOS ......................................................................................... vi RESUMEN ........................................................................................................ vii ABSTRACT ...................................................................................................... viii I. INTRODUCCIÓN ......................................................................................... 1 II. MATERIALES Y MÉTODOS ....................................................................... 5 2.1. Enfoque y diseño de investigación…………………………………………..5 2.2. Población, muestra y muestreo………………………………………………5 2.2.1. Población………………………………………………………………...5 2.2.2. Muestra…………………………………………………………………..¡ Error! Marcador no definido. 2.3. Variables de investigación……………………………………………………6 2.4. Técnica e instrumento de recolección de datos……………………………7 2.4.1. Técnica…………………………………………………………………..7 2.4.2. Instrumento……………………………………………………………...7 2.5. Proceso de recolección de datos……………………………………………7 2.6. Métodos de análisis estadísticos…………………………………………….10 III. RESULTADOS .......................................................................................... 11 IV. DISCUSIÓN ................................................................................................ 20 4.1. Discusión………………………………………………………………………20 4.2 Conclusiones…………………………………………………………………..24 4.3 Recomendaciones……………………………………………………………25 iv REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................ 22 ANEXOS .......................................................................................................... 26 ÍNDICE DE TABLAS Tabla 1: Ensayo de análisis fitoquímico. ............................................................ 9 Tabla 2: Resultados del ensayo de solubilidad. ............................................... 11 Tabla 3: Resultados del análisis fitoquímico. ................................................... 12 Tabla 4: Resultados del ensayo antimicrobiano frente a Salmonella enterica ATCC 51741. .................................................................................................... 13 Tabla 5: Prueba de homogeneidad de varianzas. ........................................... 15 Tabla 6: Test de Shapiro-Wik. ......................................................................... 16 Tabla 7: Test de Dunnett luego de 24 horas de incubación. ............................ 17 Tabla 8: Test de Dunnett luego de 48 horas de incubación. ............................ 18 Tabla 9: Test de Dunnet luego de 72 horas de incubación. ............................. 19 v ÍNDICE DE ANEXOS Anexo A. Operacionalización de la variable o variables .................................. 26 Anexo B. Instrumento de recolección de datos ............................................... 27 Anexo C. Validación de instrumento ................................................................ 28 Anexo D. Informe de resultados del ensayo microbiológico ............................ 29 Anexo E. Certificado taxonómico de la muestra vegetal ................................. 29 Anexo F. Certificado de análisis de Salmonella entérica ATCC 51741 ........... 29 Anexo G. Evidencia fotográfica de campo ....................................................... 29 Anexo H. Diagramas........................................................................................ 29 vi RESUMEN Objetivo: La investigación presenta como objetivo principal, determinar la actividad antibacteriana in vitro del látex de Synadenium grantii frente a Salmonella entérica ATCC 51741. Material y método: El estudio tuvo un enfoque cuantitativo, de diseño experimental y tipo analítico. El desarrollo experimental del estudio, primero se llevó a cabo con los ensayos de solubilidad y de análisis fitoquímico, este último siguiendo el método de Olga Lock. Mientras que, para el ensayo microbiológico, se realizó el método de difusión en agar propuesto por Kirby Bauer, utilizando las concentraciones del látex al 100, 75, 50 y 25 %, así como un control negativo y un control positivo que fue ciprofloxacino de 5 ug, frente a las cepas de Salmonella entérica ATCC 51741. Resultados: Los resultados con respecto al ensayo de solubilidad, el agua destilada fue la única sustancia con la que la muestra fue muy soluble, durante el análisis fitoquímico se halló la presencia, principalmente, de alcaloides y saponinas. En cuanto al ensayo microbiológico los halos de medición para todas las concentraciones utilizadas, luego de 24, 48 y 72 horas fueron de 6 mm de diámetro en cada uno de los tiempos reportados. Conclusión: Se concluye que el látex de la especie Synadenium grantii no presenta actividad antibacteriana mayor al control positivo y negativo frente a Salmonella entérica ATCC 51741, luego de 24, 48 y 72 horas. Palabras clave: Actividad antibacteriana, in vitro, Salmonella entérica, Synadenium grantii vii ABSTRACT Objective: The main objective of the research is to determine the in vitro antibacterial activity of Synadenium grantii latex against enteric Salmonella ATCC 51741. Material and method: The study had a quantitative, experimental design and analytical approach. The experimental development of the study was first carried out with solubility tests and phytochemical analysis, the latter following the method of Olga Lock. While, for the microbiological assay, the method of diffusion in agar proposed by Kirby Bauer was performed, using the concentrations of latex at 100, 75, 50 and 25 %, as well as a negative control and a positive control that was ciprofloxacin of 5 ug, against the strains of enteric Salmonella ATCC 51741. Results: The results regarding the solubility test, distilled water was the only substance with which the sample was very soluble, during the phytochemical analysis the presence, mainly, of alkaloids and saponins was found. As for the microbiological test, the measuring halos for all the concentrations used, after 24, 48 and 72 hours were 6 mm in diameter in each of the times reported. Conclusion: It is concluded that the latex of the species Synadenium grantii does not present antibacterial activity greater than the positive and negative control against enteric Salmonella ATCC 51741, after 24, 48 and 72 hours. Keywords: Antibacterial activity, in vitro, Enteric Salmonella, Synadenium grantii viii I. INTRODUCCIÓN Algunos de los principales motivos de enfermedades infecciosas digestivas son la contaminación alimentaria por diversos patógenos1. Dentro de estos patógenos se encuentran las bacterias, parásitos, virus o las toxinas producidas por estos microorganismos, entre todas ellas la Salmonella tienen gran relevancia, debido a la seriedad de la infección que produce en los seres humanos que consumen alimentos crudos2. En este contexto se considera a estas infecciones como problemas latentes de salud. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS) el 70 % de enfermedades diarreicas se deben al consumo de alimentos contaminados3, mientras que, en países de Europa, las bacterias enteropatógenas son responsables de causar más de 200 muertes al año, siendo la Salmonella la bacteria de mayor prevalencia4, así como en Polonia que se reportaron más de 1000 casos de pacientes con esta infección bacteriana5. A nivel latinoamericano un estudio realizado en Cuba determinó que la Salmonella es el principal patógeno contaminante en toda la región del continente americano6, en Ecuador un total de 184 casos reportados por Salmonelosis en el año 2016 en la provincia de Los Ríos en donde la mayor incidencia por rangos de edades fue de 20 a 49 años tanto en la provincia de Los Ríos como en otras provincias, y finalmente en Colombia la Salmonella spp junto con otras bacterias son los principales agentes etiológicos de contaminación alimentaria7. En el contexto peruano la información epidemiologia es muy variada indicando que, en el año 2017, Lima reportó más 130 000 casos de enfermedades diarreicas, seguido de otros departamentos como Arequipa y Piura con 34,000 y 41,000 casos respectivamente8 y otro estudio reportó que, de 134 casos de pacientes con enfermedad diarreica, el 42.5 % fue por Salmonella, afectando principalmente a los niños9. Entre las causas de este problema a nivel de salud pública se considera la mala higiene de los manipuladores de alimentos10, lo que conlleva al deterioro de la salud de los pacientes11. Una de las soluciones terapéuticas que se está implementando, es el uso de la fitoterapia, especialmente de las plantas amazónicas peruanas, las cuales cuentan 1 con una gran biodiversidad de flora, poseyendo una amplia gama de metabolitos primarios y secundarios que, según el uso popular, tienen actividad antibacteriana y que además cuentan con el conocimiento empírico respaldado por las comunidades que los utilizan12. Con la información evidenciada y citada en párrafos anteriores se reconoce que es necesario seguir en la búsqueda de alternativas naturales que ayuden en la solución de esta problemática que afecta a múltiples países en el mundo. La Salmonella entérica, es una bacteria gram-negativa, de la familia Enterobacteriaceae 13. Su vía de transmisión es mediante las heces y la ingesta por los alimentos contaminados con ellas, luego de ingresar al cuerpo tiene un periodo de incubación de 14 días, posteriormente ataca al hígado, intestino delgado y el vaso, finalmente accede a la circulación causando bacteriemia14. Las principales manifestaciones clínicas que manifiesta el huésped infectado son gastroenteritis, fiebre entérica, bacteriemia e infecciones locales 15. Esta bacteria es considerada como resistente a una serie de antibióticos como cloranfenicol, ampicilina y sulfametoxazol-trimetoprim16. La familia Euphorbiaceae son plantas con flores más diversas y estudiadas para las búsquedas de nuevos agentes terapéuticos, comprende aproximadamente 8000 especies. Una de las especies de valor dentro de la medicina tradicional se ubica el Synadenium grantii, conocida comúnmente como lechero africano, planta de la vida17. Se distribuye principalmente en la amazonia del continente americano en países como Brasil, esta planta recibe un uso ornamental y medicinal por parte de las poblaciones locales18. El látex es usado para el tratamiento de enfermedades oncológicas y patologías gástricas19. Los principales metabolitos secundarios presentes son diterpenos, triterpenos y compuestos fenólicos20. Godoy et al. (2020), en Venezuela, desarrollaron el objetivo de evaluar el potencial antimicrobiano del látex del Croton gossypiifolius sobre diferentes bacterias y hongos. El método fue experimental. Los resultados mostraron efecto dosis dependiente para 0.6% en el crecimiento promedio fue 900 ufc/mL, y decreció en la medida que se incrementó la concentración del látex, hasta un mínimo menor a 10 ufc/mL. Los autores concluyeron que C. gossypiifolius presenta actividad antimicrobiana sólo frente a cepas de Staphylococcus aureus 21. De manera 2 semejante, Espadero et al. (2019), en Ecuador, desarrollaron el objetivo de analizar los compuestos orgánicos extraídos de las hojas de Euphorbia aff. viridis. El método fue experimental. Los resultados identificaron fenoles, taninos, saponinas, cumarinas, lactonas y flavonoides; y presentó un porcentaje de inhibición del 44% sobre Klebsiella pneumoniae y un 43% en Escherichia coli. Los autores concluyeron que los extractos orgánicos de Euphorbia aff. viridis presentan actividad antimicrobiana 22. De igual manera, Price (2019), en Perú, realizaron el objetivo de determinar el efecto antibacteriano del extracto puro de Croton lechleri frente a Staphylococcus aureus. El método fue experimental. Los resultados mostraron que el extracto puro de la muestra tiene efecto antibacteriano a concentraciones mayores al 77%. Los autores concluyeron que el extracto puro de C. lechleri posee efecto bactericida frente al S. aureus 23. De igual importancia, Espinoza et al. (2018), en Perú, plantearon el objetivo de determinar el efecto antibacteriano del látex de Croton lechleri contra Staphylococcus aureus. El método fue experimental. Los resultados mostraron que S. aureus es sensible al 25% y 50%, y sumamente sensible al 75% y 100%. Los autores concluyeron que el látex C. lechleri Müll. Arg. tiene efecto antibacteriano frente al S. aureus24. Además, Cavero (2018), en Perú, planteo el objetivo de determinar el efecto antimicrobiano in vitro en tres concentraciones del látex de Synadenium grantii frente a Escherichia coli. El método fue experimental. Los resultados mostraron que la concentración al 100% fue más eficaz contra esta bacteria. El autor concluyo que el látex de S. grantii tiene efecto antimicrobiano frente a cultivos de E. coli 25. Finalmente, Rwegoshora (2017), en Tanzania, desarrollaron el objetivo de aislar y probar los compuestos bioactivos de Synadenium glaucescens. El método fue experimental. Los resultados identificaron a los terpenoides y acetato de lupeol, también demostraron actividad de concentración mínima inhibitoria (0.01 mg/mL) contra Acinetobacter baumannii y Salmonella entérica. El autor concluyo que S. glaucescens presenta terpenoides y actividad antimicrobiana 26. El presente estudio de investigación tiene como justificación teórica, la finalidad de aportar información técnica y científica sobre el efecto antibacteriano del látex de Synadenium grantii, debido a que la información disponible a nivel nacional es escasa, con respecto a la actividad y a la droga vegetal en estudio, asimismo se pretende brindar una nueva alternativa terapéutica procedente de una fuente 3 natural contra infecciones provocada por Salmonella entérica, debido al bajo ingreso económico y el poco acceso a las instituciones públicas y privadas de salud. Como justificación práctica, la solución que aporta este estudio, es continuar con el apoyo hacia la lucha contra la resistencia a los antibióticos, evento que va en aumento progresivamente el cual ocasiona problemas de salud pública a nivel global, como alta tasa de mortalidad y morbilidad, finalmente como justificación metodológica, los ensayos fitoquímicos y microbiológicos con resultados confiables y seguros, servirán de aporte en el campo de la salud y futuras investigaciones, así mismo permitirá aplicarlo en las evaluaciones respectivas en animales de experimentación. El objetivo general del estudio es determinar la actividad antibacteriana in vitro del látex de Synadenium grantii frente a Salmonella entérica ATCC 51741. Como hipótesis general del estudio se plantea: H1: El látex de Synadenium grantii tiene actividad antibacteriana in vitro significativa frente a Salmonella entérica ATCC 51741 Ho: El látex de Synadenium grantii no tiene actividad antibacteriana in vitro significativa frente a Salmonella entérica ATCC 51741 4 II. MATERIALES Y MÉTODOS 2.1. Enfoque y diseño de investigación La presente investigación fue de enfoque cuantitativo, en cuanto al diseño metodológico fue una investigación experimental y el tipo de estudio fue analítico. Cuantitativo, debido a que los resultados obtenidos se presentaron mediante mediciones numéricas con la intención de buscar la exactitud de mediciones o indicadores con el fin de generalizar sus resultados a poblaciones. Durante el proceso de cuantificación numérica, el instrumento de recolección de datos juega un papel central 27. Experimental, porque el investigador manipuló la variable independiente observando el efecto que tiene en la variable dependiente. Se utiliza para evaluar la eficacia y efectividad de una intervención terapéutica (farmacológica) 27. Analítico, porque busca encontrar una relación causal entre los factores de estudio 28. 2.2. Población, muestra y muestreo 2.2.1. Población - En el departamento de Junín, provincia y distrito de Satipo, del anexo Rio blanco se obtuvo una muestra representativa de 50 plantas de Synadenium grantii, la parte utilizada para la extracción del látex fue el tallo. - En el laboratorio Microbiologics se adquirió cepas bacterianas inactivas de Salmonella entérica ATCC 51741, en forma de Kwik Stik. 2.2.2. Muestra - Para realizar la prueba de solubilidad, análisis fitoquímico y ensayo microbiológico, se extrajo 200 mL del látex de Synadenium grantii. 5 - En el ensayo microbiológico se utilizó 10 placas Petri estériles con medio enriquecido de agar nutritivo que fueron cultivadas por extensión en placas con Salmonella entérica ATCC 51741. 2.3. Variables de investigación Independiente: Látex de Synadenium grantii. Dependiente: Actividad antibacteriana in vitro. 2.3.1 Definición conceptual Independiente: El latex de Synadium grantii es una de las especies exóticas vegetales del género Euphorbia más importante, siendo una sustancia oleosa de aspecto lechoso constituida por principios activos como los alcaloides, flavonoides, terpenoides, etc. de color blanco proveniente de la corteza de un árbol 29. El látex es usado para el tratamiento de enfermedades oncológicas y patologías gástricas19 Dependiente: Es la aplicación terapéutica que tiene una determinada sustancia para causar lisis o detener el crecimiento de la bacteria (microorganismos que causa infecciones) 24. 2.3.2 Definición operacional Independiente: Se realizó la prueba de solubilidad con reactivos de variada polaridad (Éter de petróleo, diclorometano, agua destilada, butanol, etanol, metanol, cloroformo y dimetilsulfoxido) y el análisis fitoquímico. Dependiente: La cepa de Salmonella entérica ATCC 51741, se sembró en placas Petri, junto con discos de antibióticos y la muestra experimental a diversas concentraciones (25%,50%, 75% y 100%). 6 2.4. Técnica e instrumento de recolección de datos 2.4.1. Técnica La técnica de estudio metodológico consiste en la observación y la aplicación de procedimientos analíticos como el análisis fitoquímico y el método de difusión en agar denominado Kirby-Bauer. El análisis fitoquímico permite determinar cualitativamente los principales metabolitos primarios y secundario, presentes en una planta, según Mata. El método de difusión en agar denominado Kirby-Bauer se realiza para determinar la sensibilidad de cepas bacterianas frente a los antibióticos. Dicha resistencia se puede detectar exponiendo los aislamientos bacterianos a los discos de antibióticos sintéticos y naturales, según Alvares. El desarrollo de la técnica fue en el laboratorio “Santa Rosa”. 2.4.2. Instrumento El instrumento fue una ficha de registro, donde se incluyó información respecto a cada una de las muestras el cual incluye; el Grupo blanco (Agua destilada); Grupo control positivo (Ciprofloxacino 5 µg); y los controles experimentales a concentraciones de 25 %, 50%, 75% y 100% de látex de Synadenium grantii, el cual fue validado por 3 profesionales expertos en el área de investigación que se detalla a continuación: N° Expertos 1 Dr. Siancas Tao Norio 2 Mg. Hernandez Peves Maria Martha 3 Dr. Q.F. Rodriguez Lichtenheldt Jose Edwin 2.5. Proceso de recolección de datos 2.5.1. Autorización y coordinaciones previas para la recolección de datos Se realizó una solicitud hacia la Universidad María Auxiliadora, para que nos brinde una carta de presentación, con la finalidad de realizar 7 todos los ensayos que fueron planteados en el proyecto de esta investigación. 2.5.2. Aplicación de instrumento(s) de recolección de datos a) Recolección de la muestra vegetal: La recolección del látex de Synadenium grantii, se realizó en el departamento de Junín, provincia y distrito de Satipo, ubicada a una altitud de 631 m.s.n.m. Para la obtención de 200 mL del látex se realizaron incisiones oblicuas en el tallo con una navaja de acero inoxidable y se recolectó la muestra en un frasco ámbar, previamente lavado con agua destilada y esterilizado, luego el frasco ámbar se guardará en un desecador evitando que la muestra se humedezca 30. A su llegada a Lima, se realizó la identificación taxonómica de la especie vegetal. b) Prueba de solubilidad: En la prueba de solubilidad se agregó 0.5 mL del látex y 0.5 mL de diferentes solventes de naturaleza apolar y polar en una serie de tubos con los siguientes solventes: Éter de petróleo, diclorometano, cloroformo, butanol, etanol, metanol, agua destilada y dimetilsulfóxido. c) Análisis fitoquímico: Se ejecutaron reacciones de coloración y precipitación con el látex de Synadenium grantii, según el método descrito por Lock (2016)31. Para ello se preparó 10 mL de una solución del látex y se vertieron 0.25 ml en 16 tubos diferentes, las reacciones correspondientes para la determinación de los diferentes metabolitos secundarios y primarios que se muestran en la Tabla 1. 8 Tabla 1: Ensayo de análisis fitoquímico. Tubo Ensayos Metabolito 1 Borntrager Antraquinonas 2 Cloruro férrico Compuestos fenólicos 3 Liebermann-Burchard Terpenos y esteroides 4 Dragendorff Alcaloides 5 Mayer Alcaloides 6 Wagner Alcaloides 7 Baljet Lactonas α,β-insaturadas 8 Gelatina Taninos 9 Gelatina-sal Taninos 10 NaOH 10% Antocianinas 11 Benedict Azúcares reductores 12 Fehling A y B Azúcares reductores 13 Espuma Saponinas 14 Shinoda Flavonoides 15 Sudan Grasas 16 Ninhidrina Aminoácidos libres d) Ensayo antibacteriano - Preparación del inóculo: Se preparó 100 mL de caldo nutritivo, pesando una cantidad determinada de caldo liofilizado y se disolvió en 100 mL de agua destilada, luego esta solución se llevó a la autoclave a 121°C, a 15 atmosferas de presión durante 15 min. para luego verterlo en un tubo de prueba y dejar que se enfrié. La activación de la cepa de Salmonella entérica ATCC 51741 liofilizada se llevó a cabo disolviendo el pellet con el líquido que provee el fabricante. Luego con un hisopo se embebió la solución que contiene a la cepa, junto con el caldo esterilizado ya preparado. La cepa se incubó a 37 °C por 24 horas. 9 La turbidez del caldo resultante luego de 24 horas de incubación se ajustó a la turbidez del estándar de McFarland en solución salina (cloruro de sodio al 0.9 5) por comparación visual. - Inoculación de las Placas: Para el cultivo de la cepa, se utilizó 250 mL de agar nutritivo utilizando la cantidad necesaria de caldo liofilizado y se disolvió en 250 mL de agua destilada. La solución resultante se esterilizó en autoclave a 121°C, 15 atmosferas de presión durante 15 min. Luego de este tiempo la solución se vertió aproximadamente 20-25 mL en 10 placas Petri estériles hasta que se solidifique. Luego de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez, se sumergió un asa de siembra de 10 µl para inocular las placas con agar nutritivo, mediante el método de estrías múltiples. - Preparación de los discos: Los discos se prepararon a partir de papel filtro Whatman N°1. En cada placa Petri inoculada, se colocaron los siguientes discos de difusión: -Grupo experimental 1: Látex de Synadenium grantii 25% -Grupo experimental 2: Látex de Synadenium grantii 50% -Grupo experimental 3: Látex de Synadenium grantii 75% -Grupo experimental 4: Látex de Synadenium grantii 100% -Grupo control positivo: Ciprofloxacino 5 µg -Grupo control negativo: Agua destilada. Luego se procedió a incubar cada una de las placas, en la incubadora a 37°C por 24, 48 y 72 horas, para luego de cada uno de estos periodos de tiempos medir los halos de inhibición utilizando el vernier. 2.6. Métodos de análisis estadísticos Los datos recolectados se registraron en el software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) en su versión 27 para su procesamiento. Se utilizó estadística descriptiva para determinar elementos de tendencia central y dispersión. Así como estadística inferencial para la contratación de la hipótesis 10 propuesta en la presente investigación. Para evidenciar la diferencia entre las medias de los halos de inhibición de los diferentes grupos del ensayo antibacteriano se utilizó ANOVA y la prueba de T3 de Dunnett en donde se realizaron múltiples comparaciones y se evaluó si los grupos experimentales tienen mayor halo de inhibición estadísticamente significativo. 2.7 Aspectos éticos La investigación realizó un estudio en el campo de la fitofarmacologìa, por lo tanto, se llevaron a cabo las normas de seguridad en el laboratorio de muestras microbiológicas. Para la correcta conservación de las muestras bacterianas los investigadores siguieron las instrucciones correspondientes con el fin de mantener sus propiedades biológicas como una temperatura óptica y pH estable. Además, se utilizó la indumentaria correcta, así como los requisitos necesarios para el correcto tratamiento de la muestra bacteriana, como el uso de equipos para esterilizar muestras y campanas extractoras. Por otro lado, también se realizó un correcto proceso de desecho de muestras microbiológicas con la finalidad de no causar ningún tipo de contaminación al medio ambiente como lo recomienda el Manual de procedimientos de laboratorio del Instituto Nacional de Salud, del Ministerio de Salud del Perú 32. 11 III. RESULTADOS 3.1. Ensayo de Solubilidad. Tabla 2: Resultados del ensayo de solubilidad. Tubo Solvente Resultados 1 Éter de petróleo - 2 Diclorometano ++ 3 Cloroformo ++ 4 Butanol + 5 Etanol 96° + 6 Metanol + 7 Agua destilada +++ 8 Dimetilsulfóxido + -: Insoluble; +: Poco soluble; ++: Medianamente soluble; +++: Muy soluble Fuente: Elaborada por las autoras En la Tabla 2, de manera secuencial se ordenó y etiquetó los tubos de ensayo con los nombres de los solventes de diferente polaridad. Se introdujo a cada tubo de ensayo 0.5 mL del látex de Synadenium grantii y en cada tubo se añadió 1mL de solvente (Éter de petróleo, diclorometano, cloroformo, butanol, etanol 96°, metanol, agua destilada y dimetilsulfóxido). Se agitó cada tubo de ensayo y se procedió a observar los resultados de solubilidad por un tiempo máximo de 10 minutos, asimismo se muestra afinidad del látex de Synadenium grantii por el agua destilada, solvente de naturaleza polar, presentando una característica muy soluble, asimismo presentó una mediana solubilidad por solventes de naturaleza apolar como el cloroformo y diclorometano, por otro lado poca solubilidad por solventes alcohólicos como butanol, etanol 96° y metanol, siendo considerados compuestos orgánicos formados a partir de hidrocarburos; de la misma manera el solvente dimetilsulfoxido presentó poca solubilidad, finalmente el solvente éter de petróleo de característica no polar presentó insolubilidad. 11 3.2. Análisis fitoquímico. Tabla 3: Resultados del análisis fitoquímico. Tubo Ensayos Metabolito Resultado 1 Borntrager Antraquinonas - 2 Cloruro férrico Compuestos fenólicos + 3 Liebermann-Burchard Terpenos y esteroides - 4 Dragendorff Alcaloides +++ 5 Mayer Alcaloides +++ 6 Wagner Alcaloides +++ 7 Baljet Lactonas α,β-insaturadas + 8 Gelatina Taninos - 9 Gelatina-sal Taninos - 10 NaOH 10% Antocianinas + 11 Benedict Azúcares reductores - 12 Fehling A y B Azúcares reductores + 13 Espuma Saponinas +++ 14 Shinoda Flavonoides - 15 Sudan Grasas + 16 Ninhidrina Aminoácidos libres - (-): Ausencia; (+): Mínima; (++): Mediana (+++): Abundante presencia Fuente: Elaborada por las autoras En la Tabla 3, para la identificación de los metabolitos primarios y secundarios de Synadenium grantii, se realizó pruebas con diversos reactivos (Borntrager, Cloruro férrico, Liebermann-Burchard, Dragendorff, Mayer, Wagner, Baljet, Gelatina, NaOH 10%, Benedict, Fehling A y B, Espuma, Shinoda, Sudan y Ninhidrina), mediante el análisis cualitativo basado en la observación de reacciones de coloración y precipitación. Se observa que en las pruebas de Dragendorff, Mayer y Wagner se identificó abundante presencia de alcaloides, de la misma forma en la prueba de Espuma se halló abundante presencia de saponinas,lo que hace proveer posibles propiedades analgésica y citotóxica; asimismo en las pruebas de Cloruro férrico, Baljet, NaOH 10%, Fehling A y B y Sudan se evidenciaron mínima presencia de metabolitos como: Compuesto fenólicos, lactonas α,β-insaturadas, antocianinas, azúcares reductores y grasas; respectivamente. Finalmente no se halló ausencia de antraquinonas, terpenos y esteroides, taninos, azúcares reductores, flavonoides, aminoácidos libre. 12 3.3 Ensayo Microbiológico. Tabla 4: Resultados del ensayo antimicrobiano frente a Salmonella enterica ATCC 51741. Diámetros de inhibición en mm Ciprofloxacino 100% 75% 50% 25% H2O Microorganismo 5 microgragos (ug) Tiempo (h) Tiempo (h) Tiempo (h) Tiempo (h) Tiempo (h) Tiempo (h) 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 Salmonella 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.74 39.69 39.72 6 6 6 enterica 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.75 39.72 39.73 6 6 6 ATCC 51741 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.71 39.65 39.68 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.76 39.69 39.72 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.67 39.74 39.68 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.75 39.72 39.69 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.73 39.69 39.70 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.71 39.70 39.63 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.73 39.74 39.70 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.72 39.73 39.65 6 6 6 Promedio 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 39.73 39.71 39.69 6 6 6 Fuente: Elaborada por las autoras 13 En la Tabla 4 se observa los resultados de los grupos con látex de Synadenium grantii en diferentes tiempos de incubación: En 24 horas de incubación en las concentraciones de 25, 50, 75 y 100 % evidenciaron halos de inhibición iguales a 6 mm, esto se interpreta como ausencia de actividad antibacteriana del látex de Synadenium grantii frente a cepas de Salmonella enterica ATCC 51741, mediante el ensayo microbiológico in vitro por el método de difusión por agar. En 48 horas de incubación en las concentraciones de 25, 50, 75 y 100 % evidenciaron halos de inhibición iguales a 6 mm, esto se interpreta como ausencia de actividad antibacteriana del látex de Synadenium grantii frente a cepas de Salmonella entérica ATCC 51741, mediante el ensayo microbiológico in vitro por el método de difusión por agar. En 72 horas de incubación en las concentraciones de 25, 50, 75 y 100 % evidenciaron halos de inhibición iguales a 6 mm, esto se interpreta como ausencia de actividad antibacteriana del látex de Synadenium grantii frente a cepas de Salmonella enterica ATCC 51741, mediante el ensayo microbiológico in vitro por el método de difusión por agar. Asimismo, se determinó un resultado de halos de inhibición iguales a 6 mm después de 24, 48 y 72 horas de incubación para el control negativo usado (Agua destilada). Sin embargo, se evidencia halos de inhibición promedio de 39.73, 39.71 y 39.69 mm por parte del grupo de ciprofloxacino después de 24, 48 y 72 horas de incubación. 14 Para contrastar las hipótesis planteadas en la presente investigación se hizo uso de la estadística inferencial. Para ello, se evaluó la homogeneidad de varianzas y distribución normal de los halos de inhibición del ensayo microbiológico. Para, luego evaluar si se usará una prueba paramétrica o no paramétrica. La Tabla 5 muestra a detalle los resultados del test de Levene para determinar la homogeneidad de varianzas de los resultados del ensayo microbiológico realizado con el látex de Synadenium grantii. Tabla 5: Prueba de homogeneidad de varianzas. Prueba de homogeneidad de varianzas Estadístico df1 df2 Sig. de Levene Halo de inhibición 24h 14.598 5 54 0.000 Halo de inhibición 48h 24.797 5 54 0.000 Halo de inhibición 72h 16.000 5 54 0.000 Fuente: Elaborada por las autoras La Tabla 5 se aprecia que la significancia asintótica bilateral o también denominado como P-Valor es menor al 0.05 para el halo de inhibición transcurridos las 24h, 48 y 72 horas correspondientes. Por lo tanto, se evidencia que no existe homogeneidad en las varianzas de los resultados del ensayo microbiológico realizado con el látex de Synadenium grantii. La prueba de Levene es una prueba estadística inferencial utilizada para evaluar la igualdad de las varianzas para una variable calculada para dos o más grupos. Se pone a prueba la hipótesis nula de que las varianzas poblacionales son iguales (llamado homogeneidad de varianza u homocedasticidad). 15 Por otro lado, la Tabla 6 muestra a detalle los resultados de la prueba de Shapiro- Wilk para determinar la existencia de distribución normal de los resultados del ensayo microbiológico realizado con el látex de Synadenium grantii. Tabla 6: Test de Shapiro-Wik. Grupo Shapiro-Wilk Estadístico gl Sig. Halo de inhibición1 Ciprofloxacino 0.926 10 0.408 5ug Halo de inhibición2 Ciprofloxacino 0.913 10 0.304 5ug Halo de inhibición3 Ciprofloxacino 0.937 10 0.520 5ug Fuente: Elaborada por las autoras La Tabla 6 muestra que la significancia asintótica bilateral es mayor al 0.05. Por lo tanto, se evidencia que si existe una distribución normal de los resultados del ensayo microbiológico realizado con el látex de Synadenium grantii Por lo mostrado en el test de Levene y Shapiro-Wilk se evidenció que no existe homogeneidad de varianzas y si presenta una distribución normal de los resultados del ensayo microbiológico realizado con el látex de Synadenium grantii, Por lo tanto, se requiere del uso de una prueba estadística NO paramétrica para la contrastación de la hipótesis de la presente investigación. Para determinar el efecto antibacteriano del látex de Synadenium grantii se usó el estadístico T3 de Dunnett. Contrastación de hipótesis general H1: El látex de Synadenium grantii tiene actividad antibacteriana in vitro significativa frente a Salmonella entérica ATCC 51741 Ho: El látex de Synadenium grantii no tiene actividad antibacteriana in vitro significativa frente a Salmonella entérica ATCC 51741 16 La Tabla 7 muestra a detalle los resultados del T3 de Dunnett obtenido del análisis de los resultados del ensayo microbiológico realizado con el látex de Synadenium grantii a 24 horas de incubación. Tabla 7: Test de Dunnett luego de 24 horas de incubación. (I) Grupo (J) Grupo Diferencia Error Sig. de medias estándar (I-J) Ciprofloxacino Extracto 25% 33.72700* 0.00831 0.000 5ug Extracto 50% 33.72700* 0.00831 0.000 Extracto 75% 33.72700* 0.00831 0.000 Extracto 100% 33.72700* 0.00831 0.000 Control 33.72700* 0.00831 0.000 24h Control Extracto 25% 0.00000 0.00000 1.0 Extracto 50% 0.00000 0.00000 1.0 Extracto 75% 0.00000 0.00000 1.0 Extracto 100% 0.00000 0.00000 1.0 Ciprofloxacino -33.72700* 0.00831 0.000 5ug Fuente: Elaborada por las autoras La Tabla 7 evidencia que el grupo ciprofloxacino frente a los grupos experimentales y control presentan una diferencia a favor del grupo ciprofloxacino. Además, se muestran valores de significancia asintótica bilateral menor al 0.05. Por lo tanto, esa diferencia es estadísticamente significativa y esa diferencia favorece al grupo ciprofloxacino. Por otro lado, la Tabla 7 también muestra que no existe diferencia estadísticamente significativa entre el grupo control frente a los grupos experimentales después de 24 horas de incubación. Decisión: Se rechaza la hipótesis alterna y se acepta la hipótesis nula. 17 La Tabla 8 muestra a detalle los resultados del T3 de Dunnett obtenido del análisis de los resultados del ensayo microbiológico realizado con el látex de Synadenium grantii a 48 horas de incubación. Tabla 8: Test de Dunnett luego de 48 horas de incubación. (I) Grupo (J) Grupo Diferencia Error Sig. de medias estándar (I-J) Ciprofloxacino Extracto 25% 33.70700* 0.00895 0.000 5ug Extracto 50% 33.70700* 0.00895 0.000 Extracto 75% 33.70700* 0.00895 0.000 Extracto 100% 33.70700* 0.00895 0.000 Control 33.70700* 0.00895 0.000 48h Control Extracto 25% 0.00000 0.00000 . Extracto 50% 0.00000 0.00000 . Extracto 75% 0.00000 0.00000 . Extracto 100% 0.00000 0.00000 . Ciprofloxacino -33.70700* 0.00895 0.000 5ug Fuente: Elaborada por las autoras La Tabla 8 evidencia que el grupo ciprofloxacino frente a los grupos experimentales y control presentan una diferencia a favor del grupo ciprofloxacino. Además, se muestran valores de significancia asintótica bilateral menor al 0.05. Por lo tanto, esa diferencia es estadísticamente significativa y esa diferencia favorece al grupo ciprofloxacino después de 48 horas de incubación. Por otro lado, la Tabla 8 también muestra que no existe diferencia estadísticamente significativa entre el grupo control frente a los grupos experimentales después de 48 horas de incubación. Decisión: Se rechaza la hipótesis alterna y se acepta la hipótesis nula. 18 La Tabla 9 muestra a detalle los resultados del T3 de Dunnett obtenido del análisis de los resultados del ensayo microbiológico realizado con el látex de Synadenium grantii a 72 horas de incubación. Tabla 9: Test de Dunnet luego de 72 horas de incubación. (I) Grupo (J) Grupo Diferencia Error Sig. de medias estándar (I-J) Ciprofloxacino Extracto 25% 33.69000* 0.01000 0.000 5ug Extracto 50% 33.69000* 0.01000 0.000 Extracto 75% 33.69000* 0.01000 0.000 Extracto 100% 33.69000* 0.01000 0.000 Control 33.69000* 0.01000 0.000 72h Control Extracto 25% 0.00000 0.00000 . Extracto 50% 0.00000 0.00000 . Extracto 75% 0.00000 0.00000 . Extracto 100% 0.00000 0.00000 . Ciprofloxacino -33.69000* 0.01000 0.000 5ug Fuente: Elaborada por las autoras La Tabla 9 evidencia que el grupo Ciprofloxacino frente a los grupos experimentales y control presentan una diferencia a favor del grupo Ciprofloxacino. Además, se muestran valores de significancia asintótica bilateral menor al 0.05. Por lo tanto, esa diferencia es estadísticamente significativa y esa diferencia favorece al grupo Ciprofloxacino después de 72 horas de incubación. Por otro lado, la Tabla 9 también muestra que no existe diferencia estadísticamente significativa entre el grupo control frente a los grupos experimentales después de 72 horas de incubación. Decisión: Se rechaza la hipótesis alterna y se acepta la hipótesis nula. 19 IV. DISCUSIÓN 4.1. Discusión Salmonella entérica es considerada la bacteria gran-negativa de la familia Enterobacteriaceae de mayor prevalencia según la Organización Mundial de la Salud, siendo los principales motivos de enfermedades infecciosas digestivas por la ingesta de alimentos contaminados. En consecuencia gran parte de la población realizan tratamientos con antibióticos que no son sensibles a las bacterias que le está provocando la infección, causas que hacen posible a la resistencia bacteriana y desencadenando otras infecciones letales, por ello las soluciones terapéuticas que se está implementando, es el uso de la fitoterapia, especialmente de las plantas amazónicas peruanas que tienen actividad antibacteriana que ayuden en la solución de esta problemática mundial.2, 3,13 En nuestro estudio del látex de la especie Synadenium grantii, se realizaron una variedad de ensayos para determinar la actividad antibacteriana frente a cepas de Salmonella entérica ATCC 51741. La prueba de solubilidad que se realizó de la muestra, se evidencio que el agua destilada fue la sustancia en la que mejor se solubilizó, indicándonos que tiene naturaleza polar, pero fue poco soluble en butanol, metanol ,etanol de 96°,y en dimetilsulfóxido, mientras que fueron medianamente soluble en diclorometano y cloroformo, según se demuestra en la Tabla 2. En cuanto al estudio realizado por Obando (2020), se evidencio en la prueba de solubilidad del látex de Croton lecheri dando como resultado que es soluble en etanol y metanol, en cambio moderadamente soluble en agua destilada y propilenglicol33. En otro estudio realizado por Gallardo et al (2019), se realizó prueba de solubilidad del látex del tallo de Jatropa curcas, presenta como resultado que es soluble en agua destilada, etanol y metanol y es insoluble con solventes de cloroformo, butanol, acetona, etc 34. En cuanto a la Tabla 3,referente al análisis fitoquímico se obtuvo alcaloides y saponinas los principales metabolitos con mayor presencia, seguido de los compuestos fenólicos, lactonas α,β-insaturadas y antocianinas; y con respecto a los metabolitos primarios, de manera mínima se halló la presencia de azúcares reductores y lípidos; empleando el método según Olga Lock, siguiendo el mismo 20 método utilizado en esta investigación por Arellano (2017), se muestra los resultados obtenidos al realizar la Marcha Fitoquímica de metabolitos secundarios presentes en el extracto atomizado del látex de Croton lechleri existiendo presencia predominante de alcaloides, taninos, flavonoides, azúcares reductores y saponinas, el cual pertenece a la misma familia Euforbiaceae 35. De la misma manera Quispe (2017), realizo la detección de metabolitos secundarios presentes en el látex de Carica papaya, se muestran abundantes concentraciones de alcaloides y aminoácidos, seguido de moderada concentración de lactonas y/o cumarinas, leve presencia de saponinas, y ausencia de fenoles y/o taninos, flavonoides, azúcares reductores, catequinas, triterpenos-esteroides, quinonas y glicósidos cardiotónicos 36. De la misma forma los resultados coinciden con Gallardo (2019) quien en su investigación del látex de Jatropha curcas, referente al análisis fitoquímico se identificó la presencia de metabolitos primarios y secundarios como flavonoides, taninos, alcaloides, carbohidratos y compuestos fenólicos 34. A pesar de estas diferencias, esto puede sugerir que los metabolitos secundarios y primarios hallados en común de estas especies son característicos de la especie, pero químicamente diferentes. Los metabolitos secundarios que brindan el efecto antibacteriano son flavonoides y compuestos fenólicos. En nuestro estudio se halló metabolitos que no están relacionados con la actividad antibacteriana como los alcaloides, poseen estructuras químicas muy diversas, generalmente actúan sobre el sistema nervioso central, según Martínez. Las saponinas tienen un amplio rango de actividades biológicas tales como su acción antimicótica, antiviral, anti cancerígena, hipolesterolémica, hipoglicaémica, antitrombótica, diurética, antinflamatoria y molusquicida, tiene gran interés para la industria farmacéutica por ser precursores en la síntesis de hormonas y corticoides, según Mujica. Los resultados del ensayo microbiológico, presentaron halos de inhibición de 6 mm de diámetro en las 4 concentraciones utilizadas, al 25, 50, 75 y 100 % frente a las cepas de Salmonella entérica ATCC 51741, realizando la contrastación de hipótesis, se acepta la hipótesis nula y se rechaza la hipótesis alterna, estos resultados fueron similares con la investigación de Godoy (2020), en Venezuela, a partir del látex del Croton gossypiifolius (Euphorbiaceae) sobre bacterias tipo Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomona aeruginosa y el hongo Aspergillus niger, observó que el látex no mostró efecto 21 inhibitorio en las bacterias, E. coli, K. pneumoniae y P. aeruginosa, ni en el hongo A. niger 21. De manera semejante, este estudio coincide con Lozada (2016), quien en su investigación sobre Staphyloccocus aureus ATCC: 25923, Streptoccocus mutans ATCC 25175, Streptoccocus pneumoniae ATCC 49619, Streptoccocus pyogenes ATCC 19615 en extractos apolares (cloroformo –hexano) de Croton elegans, se evaluó por el método de difusión en agar (Kirby –Bauer), obteniendo como resultado de inhibición en ninguna de las concentraciones sobre los patógenos probados 37. Aún más, Guerrero (2019) en la investigación de Croton lechleri y Thymus vulgaris a diferentes concentraciones sobre cepas de Staphylococcus aureus, determinando que la mezcla de Croton lechleri al 75% y Thymus vulgaris al 25% en 24 horas se obtuvo una media de diámetro con sensibilidad nula 38. De los presentes estudios destacamos que los resultados mencionados coincide con el resultado obtenido quizás se deba a las diferentes concentraciones y las cepas de estudio pueden crear resistencia bacteriana, además que las plantas estudiadas son de diferentes especies. Según lo evidenciado en diversas investigaciones referente a la presencia de actividad antibacteriana de la familia Euphorbiaceae, se refiere en el estudio de Gallardo et al (2019) del látex de Jatropha curcas frente a Staphylococcus aureus, bajo el método de difusión en disco, de Kirby Bauer, a concentraciones del látex de: 10%, 20%, 30%, 40%, se observa que el halo de inhibición máximo obtenido en promedio fue de 8.888 mm a una concentración del 40%, por lo que presenta una actividad antibacteriana mínima ligera y ausencia de actividad para las concentraciones de 10%, 20%, 30% 34. Asimismo, en el estudio de Cavero (2018), utilizó en su investigación el látex de Synadenium grantii, frente a cepas de Escherichia coli ATCC 25922 a diferentes concentraciones como 25%,50%,75% y 100%, pero obteniendo resultados óptimos en cuanto a la actividad antibacteriana 25.De la misma forma Price (2019), en su investigación utilizó la resina Croton lechleri y utilizando el método de macrodilución ante Staphylococcus aureus ATCC 43300; en este caso existe muchas diferencias como el método empleado, la especie vegetal, la droga vegetal utilizada e incluso la cepa, la especie presento actividad antibacteriana 23. De la misma manera, en el estudio de Santa Cruz (2020) en su investigación del efecto sinérgico antibacteriano in vitro del látex de Croton lechleri en su estado puro combinado con Oxacilina 1g sobre Staphylococcus 22 aureus ATCC 25923.Demuestra que la combinación de Croton lechleri con Oxacilina no muestra efecto sinérgico antibacteriano39. Finalmente, el estudio presente tiene semejanzas con Hernández (2017) en su investigación sobre las actividades antimicrobianas y antiinflamatorias, efectividad en la cicatrización de heridas y caracterización química del látex de Jatropha neopauciflora. La actividad antibacteriana se determinó utilizando cepas Gram negativas y positivas, la actividad antifúngica se determinó utilizando levaduras y hongos filamentosos, concluyendo en ausencia de actividad del látex frente a estos microorganismos fúngicos y presentando actividad antibacteriana 40. Uno de los factores que pudo haber marcado una diferencia, en cuanto a la actividad antibacteriana, se relaciona con el lugar de procedencia de la muestra. Quizás esta diferencia de las áreas geográficas en donde cada una presenta distintos climas, niveles de humedad, composición química y física de la tierra pueden afectar a la composición fitoquímica de la planta, por lo tanto, también a sus respectivas actividades terapéuticas que las poblaciones locales le atribuyen. 23 4.2 . Conclusiones - El látex de Synadenium grantii no presenta actividad antibacteriana frente a cepas de Salmonella entérica ATCC 51741. - Los metabolitos secundarios que se identificaron en la prueba de análisis fitoquímico con el látex de Synadenium grantii fueron alcaloides, compuestos fenólicos, saponinas y antocianinas. - Se evaluó la actividad antibacteriana del látex de Synadenium grantii a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100 % frente a cepas de Salmonella entérica ATCC 51741.En la cual se obtiene resultados negativos. - Se ha demostrado que el látex de Synadenium grantii no presenta actividad antibacteriana en comparación con el Ciprofloxacino de 5 ug frente a cepas de Salmonella entérica ATCC 51741. 24 4.3. Recomendaciones - Realizar investigaciones con el látex de Synadenium grantii frente a otros microorganismos que ocasionan infecciones gastrointestinales. - Realizar estudios con el látex de Synadenium grantii de diferentes lugares de procedencia, para el reconocimiento científico de su uso tradicional. - Fomentar la investigación sobre los productos naturales en los profesores y alumnos de la Universidad María Auxiliadora para un aporte científico a la comunidad de San Juan de Lurigancho. - Incentivar a las instituciones de salud privada y estatal a que tomen en cuenta el uso y los beneficios de la medicina tradicional y/o ancestral peruana. 25 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. MINSA. Programa de entrenamiento en salud publica dirigido al personal del servicio militar voluntario. Lima; 2019. Disponible en: https://repositorio.ins.gob.pe/xmlui/handle/INS/1139 2. Firestone M, Hedberg C. Restaurant inspection letter grades and salmonella infections, New York, New York, USA. 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Operacionalización de la variable o variables Variable Definición Definición Dimensiones Naturaleza Escala de Indicadores Unidades de medida conceptual operacional medición Insoluble (-) Se realizará la Poco soluble (+) Fisicoquímica Cualitativo Nominal Es una sustancia prueba de Solubilidad Soluble (++) Látex de Muy soluble (+++) Synadenium oleosa de color solubilidad con grantii blanco proveniente reactivos de Reacciones de la corteza del variada polaridad y de coloración Ausencia (-) árbol. el análisis y precipitación Fitoquímica Cualitativo Nominal Leve (+) fitoquímico para Moderado (++) metabolitos Abundante (+++) secundarios Es la aplicación La cepa de terapéutica que Salmonella entérica tiene una ATCC 51741, se 0: nulo Inhibición del Efecto determinada sembrará en placas crecimiento o 8 – 14 mm: antibacteriano sustancia para Petri, junto con Microbiológico Cuantitativo Razón Sensibilidad límite eliminación de in vitro causar lisis o discos de la bacteria 14 – 20 mm: Medio detener el antibióticos y la <20 mm: Muy sensible crecimiento muestra bacteriano. experimental. 26 Anexo B. Instrumento de recolección de datos Ensayo microbiológico in vitro Investigador (ES): Bach. Laureano Hinostroza, Hestefany Sheyla / Bach. Martinez Pablo, Luz Vanesa Fecha: Muestra: Látex de Synadenium grantii Frente a Salmonella entérica ATCC 51741 Agua Ciprofloxacino 5 µg Látex 25 % Látex 50 % Látex 75 % Látex 100 % N° Tiempo (h)/mm Tiempo (h)/mm Tiempo (h)/mm Tiempo (h)/mm Tiempo (h)/mm Tiempo (h)/mm 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Fuente: Elaborada por las autoras Observaciones:………………………………………………………………………………………………………………………………… 27 Anexo C. Validación de instrumento 28 29 30 Anexo D. Informe de resultados del ensayo microbiológico 31 Anexo E. Certificado taxonómico de la muestra vegetal 32 Anexo F. Certificado de análisis de Salmonella entérica ATCC 51741 33 Anexo G. Evidencia fotográfica de campo Proceso de recolección 34 Ensayo de Solubilidad 35 Tamizaje fitoquímico 36 Activación de la cepa 37 Inoculación, incubación y lectura de los resultados 38 39 Anexo H. Diagramas Diagrama de cajas y bigotes de halos de inhibición con 24, 48 y 72 horas de incubación 40