FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
EFECTO ANTIFÚNGICO IN VITRO DEL ZUMO DE Allium sativum
L. (AJO) Y Allium cepa (CEBOLLA) SOBRE Candida albicans”
TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO
FARMACÉUTICO
AUTORES:
BACH. DIAZ CHAMAYA , MARIA URSULA
BACH. LARA ABAD , ERIKA YSABEL
ASESOR
Mg. HERNÁNDEZ GUERRA, REYNA EMPERATRIZ
LIMA – PERÚ
2021
Dedicatoria
Es tesis se la dedicamos a Dios, quién supo
guiarnos por el buen camino dándonos las
fuerzas para seguir adelante y no desmayar en
los problemas que se presentaban, enseñándonos
a enfrentar las adversidades sin perder nunca la
dignidad, ni desfallecer en el intento.
A nuestros padres, por darnos la vida, educación,
apoyo y consejos; quienes a lo largo de la vida han
velado por nuestro bienestar, siendo nuestro apoyo
en todo momento.
ii
Agradecimiento
Agradecemos a nuestro docente Q.F. Martín Silva
Romero, por haber compartido sus conocimientos a lo
largo de nuestra carrera, así mismo, de manera especial
a nuestra tutora Mg. Reina Hernández Guerra quien
nos ha guiado con paciencia, dedicación, amistad y
apoyo incondicional.
A la Universidad María Auxiliadora, por darnos
la oportunidad de llevar a cabo la culminación de
nuestra tesis y de este modo alcanzar un logró más en
nuestras vidas.
iii
Índice General
RESUMEN ........................................................................................................... viii
ABSTRACT ............................................................................................................ ix
I. INTRODUCCIÓN .................................................................................................1
II. MATERIALES Y MÉTODOS ...............................................................................7
2.1 Enfoque y diseño de investigación
2.2 Población, muestra y muestreo
2.3 Variables de investigación
2.4 Técnica e instrumento de recolección de datos
2.5 Plan de recolección de datos
2.6. Métodos de análisis estadísticos
2.7 Aspectos éticos
III. RESULTADOS .................................................................................................11
IV. DISCUSIÓN .....................................................................................................16
4.1. Discusión de resultados
4.2. Conclusiones
4.3. Recomendaciones
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................22
ANEXOS ...............................................................................................................25
iv
Índice de Tablas
Tabla 1. Estadística descriptiva para cada grupo de tratamientos con el Ajo y la
Cebolla frente a Candida albicans........................................................................ 11
Tabla 2. Estadística para cada grupo control frente Candida albicans................. 12
Tabla 3. Análisis de la varianza de los datos de estudio ...................................... 14
Tabla 4. Prueba Tukey para comparaciones múltiples por sub grupos................ 15
v
Índices de Figuras
Figura 1. Gráfico de Medias de los grupos experimentales y control ................... 13
Figura 2. Preparación de la muestra .................................................................... 34
Figura 3. Nefelómetro de Mc Farland ................................................................... 34
Figura 4. Análisis microbiológico ............................. ¡Error! Marcador no definido.
Figura 5. Efecto antimicótico ................................................................................ 36
vi
Índices de Anexos
Anexo A. Operacionalización de las variables...................................................... 26
Anexo A. Instrumento de recolección de datos .................................................... 27
Anexo A. Allium cepa (cebolla)............................................................................ 28
Anexo A. Allium sativum (ajo)............................................................................... 29
Anexo A. Clasificación taxonómica de Allium sativum L. “ajo” ............................. 30
Anexo A. Clasificación taxonómica de Allium cepa “cebolla” .............................. 31
Anexo A.  Recolección de datos........................................................................... 32
Anexo A.  Prueba de Normalidad de Kolmogorov-Smirnov..... ¡Error! Marcador no
definido.
Anexo A. Prueba de Homogeneidad de varianzas............................................... 33
Anexo A.  Evidencias fotográficas del trabajo de campo...................................... 34
vii
RESUMEN
Objetivo: Determinar el efecto antifúngico in vitro del zumo de Allium sativum L.
(ajo) y Allium cepa (cebolla) sobre Candida albicans
Métodos: La investigación tiene un enfoque cuantitativo, de diseño experimental y
corte transversal, se analizó el efecto antimicótico de zumo de Allium sativum L.
(ajo) y Allium cepa (cebolla) sobre Candida albicans las muestras fueron
recolectadas de la provincia de Ferreñafe, departamento de Lambayeque, se
emplearon los bulbos para extraer por presión mecánica el zumo, se prepararon
concentraciones a partir de estos al 75% y 50%, el método empleado para la
determinación del efecto antimicótico fue Kirby Bauer y la lectura de los halos de
inhibición se realizó con vernier digital, se utilizó suero fisiológico como control
negativo y nistatina como control positivo.
Resultado: El zumo del ajo presentó halos de inhibición de 32.9mm + 0.36 para el
50%, 39.8mm + 0.40 para el 75% y 42.1mm + 0.42 para el 100%; el zumo de cebolla
presentó halos de inhibición de 6.3mm + 0.39 para el 50%, 6.8mm + 0.47 para el
75% y 7.4mm + 0.33 para el 100%, del mismo modo, el control negativo y positivo
presentaron halos de inhibición promedio de 6.03mm + 0.07 y 25.10mm + 0.35
respectivamente.
Conclusiones: Se demostró el efecto antimicótico contra Candida albicans del
zumo de Allium sativum “ajo” a todas concentraciones incluso superior a la nistatina,
Allium cepa “cebolla” no demostró tener efecto antimicótico,
Palabras claves: Candida albicans, Allium sativum, Allium cepa, ajo, cebolla,
antimicótico.
viii
ABSTRACT
Objective: To determine the in vitro antifungal effect of Allium sativum L. (garlic)
and Allium cepa (onion) juice on Candida albicans
Methods: The research has a quantitative approach, of experimental design and
cross-section, the antifungal effect of Allium sativum L. (garlic) and Allium cepa
(onion) juice on Candida albicans was analyzed, the samples were collected from
the province of Ferreñafe, department of Lambayeque, the bulbs were used to
extract the juice by mechanical pressure, concentrations were prepared from these
at 75% and 50%, the method used to determine the antifungal effect was Kirby
Bauer and the reading of the inhibition halos It was performed with digital vernier,
physiological saline was used as a negative control and nystatin as a positive
control.
Result: The garlic juice presented inhibition halos of 32.9mm + 0.36 for 50%,
39.8mm + 0.40 for 75% and 42.1mm + 0.42 for 100%; the onion juice presented
inhibition halos of 6.3mm + 0.39 for 50%, 6.8mm + 0.47 for 75% and 7.4mm + 0.33
for 100%, in the same way, the negative and positive control presented average
inhibition halos 6.03mm + 0.07 and 25.10mm + 0.35 respectively.
Conclusions: The antifungal effect against Candida albicans of Allium sativum
“garlic” juice was demonstrated at all concentrations, even higher than nystatin,
Allium cepa “onion” did not demonstrate an antifungal effect,
Key words: Candida albicans, Allium sativum, Allium cepa, garlic, onion, antifungal.
ix
I. INTRODUCCIÓN
La candidiasis es un tipo de micosis causada con mayor frecuencia por un hongo
(levadura) Candida albicans, es considerada una infección cosmopolita,
prevalente y oportunista en los seres humanos. Su incidencia ha aumentado
notablemente en las últimas dos décadas afectando a personas de cualquier edad
sexo o grupo étnico.
La Candida albicans ha demostrado sensibilidad frente a fármacos imidazoles, no
obstante, aún no se consigue la erradicación completa de este patógeno ya que los
pacientes vuelven a recaer uno o dos meses después de finalizar el tratamiento con
dichos fármacos1.
La OMS, realizo un estudio en el año 2015, donde reveló que cerca del 50% de 35
35 millones de pacientes con VIH – positivos sufren infecciones bucales causadas
por hongos, usualmente al inicio de la enfermedad. Considera también, que la
candidiasis sigue siendo frecuente en países en vías de desarrollo especialmente
en zonas rurales, demandando gastos económicos y problemas sanitarios ya que
son causa habitual de incapacidad física y laboral, causando síntomas de prurito y
de dolor2.
La revista Europea de Microbiología Clínica y de Enfermedades Infecciosas, señala
que existen 832 millones de personas con infecciones micóticas serias en 14 países
de Asia, América, Europa y África del Norte (Pakistán, Bangladesh, Corea del Sur,
Filipinas, Tailandia, Uzbekistán, Ecuador, Canadá, Perú, Guatemala, Chile,
Portugal, Algeria y Egipto). Pudiendo causar enfermedad crónica y en casos
severos, hasta la muerte3.
En Europa la candidiasis representa la infección más frecuente de la zona vaginal,
mientras que en los Estados Unidos es la segunda infección en la zona vaginal más
frecuente. Los EEUU han estimado el gasto del evento por Candida albicans siendo
el costo muy significativo de 1.0 billón de dólares por año. En el periodo de 1979 a
2000 los casos de origen fúngico aumentaron en un 207% siendo el principal agente
etiológico la Cándida4.
1
En la Universidad Autónoma de México en sus estudios han demostrado que la
presencia de aparatos bucales de ortodoncia trae como consecuencia alteraciones
de la mucosa oral, por lo que puede aumentar la colonización por Candida albicans
trayendo como consecuencia candidiasis oral. Sumado a estos estudios, las
especies de Cándida en la cavidad bucal de adultos jóvenes presenta un porcentaje
de colonización de hasta 60% según estudios realizados en el 2018 y 20195.
En la ciudad de Puebla – México el 28 % de mujeres presenta infección por Candida
albicans. Siendo la vulvovaginitis aguda una de las causas más frecuentes en los
consultorios ginecológicos especialmente por mujeres en edad fértil. Las
estadísticas de la Unión Americana estiman que cerca del 75% de las mujeres han
sufrido al menos un episodio de candidiasis entre el tiempo de la menarquia y la
menopausia6.
La medicina tradicional herbolaria representa una alternativa terapéutica a los
medicamentos de síntesis para el tratamiento de muchas enfermedades. Algunas
plantas nativas del Perú constituyen opciones al tratamiento medicamentoso
debido a sus usos tradicionales y su composición ya que se les atribuyen
propiedades antifúngicas y antibacterianas contra Candida albicans, Pseudomona
aeruginosa, E. coli7.
En el Perú el Ministerio de Salud informa que dentro de las infecciones oportunistas
el agente etiológico más común es la Candida albicans; la cual causa candidemia
en un 40 a 60%. Además, es la más frecuente en recién nacidos con un peso menor
al de 1500g causando una candidiasis invasiva. La proliferación por Cándida oral
representa el 40% a 70% en niños y adultos sanos, con cifras más altas en niños
con dientes cariados y en adultos con dentadura postiza8.
La Universidad Cayetano Heredia en Lima – Perú, estima que la candidiasis
vaginal, oral-esofágica y candidemia es una de las enfermedades fúngicas más
comunes en nuestro país; con una estimación general que equivale a 581 174
casos por año9.
En Chiclayo se realizaron estudios concluyendo que existe relación entre la
presencia de Candida albicans y el grado de estomatitis en la cavidad bucal10.
Frente a esta problemática se presentan a continuación las bases teóricas que
fundamentan el presente estudio:
2
El ajo (Allium sativum) se ha utilizado con fines medicinales desde antes de la
civilización sumeria (2600–2100 a. C.), cuando ya se cultivaba ampliamente en
India y China. Utilizado tradicionalmente como agente antimicrobiano, se ha
informado que el ajo también modula las funciones cardiovasculares e inmunitarias,
además de tener propiedades antioxidantes y anticancerígenas.11,12
El ajo como antibacteriano ha sido objeto de investigaciones detalladas
recientemente sobre Helicobacter pylori, Escherichia coli y Lactobacillus casei, por
lo que se observó una sensibilidad 10 veces mayor en algunas bacterias estudiadas
comparadas con otras entre Gram-positivos y negativos.13
Los estudios antiprotozoarios incluyen los de Entamoeba histolytica y Giardia
intestinalis; los efectos anticandidales de ajo de manera similar incluyen una amplia
gama de lesiones ultraestructurales que afectan las membranas citoplasmáticas,
los orgánulos y la organización del citoesqueleto. La eficacia generalizada de este
extracto vegetal como antimicrobiano se ha relacionado con la facilidad con la que
estas moléculas pasan a través de las membranas celulares y reaccionan
biológicamente al bajo nivel de enlaces tiol en aminoácidos14.
Allium cepa crece en hasta 2350 m.s.n.m. En la mayoría de tipos de suelo, prefiere
áreas perturbadas como campos, pastos, jardines, bordes de caminos, áreas de
desechos, tierras de cultivo y campos recientemente quemados15.
Esta planta contiene flavonoides, saponinas, alcaloides, apigenina, kaempferol,
luteolina, oxidasas, terpenoides, linarina, cinarina, isocinarina, cosmosiína,
crepidiásido A, vitamina C, pirísidos B y C, taraxasterol. Además, contiene: 2-
penteno, 2-metilo; 1,2-dihidropirido (3,2,1-kl) fenotiazin-3-ona16,17.
Candida albicans es la más frecuente entre las especies de Candida asociadas con
los humanos como comensales humanos y patógenos oportunistas. Durante
muchos años, esta levadura pleomórfica ha atraído mucha atención de
investigación; Fue el primer patógeno fúngico humano para el que se determinó la
secuencia completa del genoma. C. albicans es una especie diploide sin morfología
sexual y con heterocigosidad sustancial18.
Espinola F. evaluó el efecto antibacteriano del extracto acuoso del Allium sativum
sobre cepas de Candida albicans comparado con nistatina in vitro, se empleó la
3
técnica de KIrby-Bauer, evidenciándose que a una concentración mayor de 50%
del extracto acuoso se observó un efecto inhibido tan potente como el patrón de
nistatina que se usó19.
Similar estudio realizado por Mestanza K. y Vásquez E. evaluar el efecto inhibitorio
in vitro del extracto acuoso de Allium sativum de ajo frente a cepas de Candida
albicans resistente empleando muestras de secreción vaginal de pacientes, los
extractos acuosos mostraron ser efectivos contra la candidiasis resistente a
nistatina, siendo estos sensible a las diluciones con una concentración igual o
superior a 25 uL/mL20.
Osorio J, evaluó la actividad antifúngica in vitro del extracto de Allium sativum sobre
cepas de Candida albicans y comparó con el fluconazol, en el estudio se observó
que efectivamente el extracto al 100% tuvo un halo de 32 mm a las 48 horas por lo
que el autor pudo concluir que el extracto de Allium sativum si tiene efecto fungicida
sobre Candida albicans in vitro21.
Mendoza A., et al. determinó la efectividad del aceite esencial del Allium sativum
como alternativa fungicida en las prótesis dentales, en el estudio se examinaron un
total de 48 aislamientos clínicos obtenidos de la superficie acrílica de dentaduras
postizas parciales, los resultados mostraron que en donde todos los aislamientos
de Candida planctónicos fueron susceptibles al aceite esencial de A. sativum,
mientras que el 4.2% fueron resistentes al fluconazol22
Ramos K. realizó un estudio sobre el extracto acuoso de Allium cepa “cebolla” y lo
expuso a cultivos de Klebsiella pneumoniae, Pseudomona aeruginosa y
Escherichia coli productoras de betalactamasas de espectro extendido, los
extractos fueron preparados al 25%, 50%, 75% y 100% estos produjeron halos de
inhibición contra Escherichia coli de 7.2mm a 16.6mm, mientras que para las otras
bacterias no se observó efecto antibacteriano17.
Diba A, Alizadeh F. determinar el efecto fungicida del Allium hirtifolium y Allium
sativum contra Candida tropicalis in vivo, para esta investigación se aisló Candida
tropicalis de pacientes infectados y recurrentes, luego en modelo animal se
evaluaron los extractos acuosos y etanólicos de Allium hirtifolium y Allium sativum
a través de estimación de supervivencia, en los resultados que se obtuvieron los
4
extractos acuosos y etanólicos de A. hirtifolium y A. sativum exhiben actividad
antifúngica significativa contra C . tropicalis (p <0.05) a una dosis 1 mg / kg / día
fueron ligeramente menos eficaces que los del fluconazol14.
Solorzano A. et al determinaron el efecto antimicótico contra Candida spp. del
tiosulfinato de propilpropano (PTS) y el tiosulfonato de propilpropano (PTSO)
compuestos volátiles derivados del Allium cepa, se determinó la concentración
mínimo inhibitoria a partir de 203 aislados de cultivos y evaluó la actividad
antimicótica mediante el método de difusión en disco y observó C. albicans y C.
Krusei presentaron la mayor suceptibilidad al PTS y PTSO23.
El presente proyecto pretende colaborar en la búsqueda de tratamientos no
farmacológicos que eviten la proliferación de cepas resistentes, utilizando como
alternativas al tratamiento antifúngico convencional.
La importancia de la medicina tradicional en nuestros tiempos se basa en la gran
cantidad de sustancias activas que estas presentan al momento de realizar los
análisis fitoquímicos. Además, el 70% de los medicamentos convencionales que
existen hoy en día han formado parte sus insumos de las especies vegetales24.
En los últimos años las infecciones por hongos han aumentado considerablemente,
esto debido a que cada vez hay más pacientes inmunocomprometidos con:
quimioterapia, cirugía de trasplante, uso de medicamentos de amplio espectro y
SIDA. Estas condiciones hacen más susceptibles para contraer infecciones
oportunistas que los puede llevar hasta la morbimortalidad a ese tipo de
pacientes25.
En la actualidad existen muchas investigaciones sobre medicina alternativa y una
de ellas es la medicina natural a fin de poner un granito de arena a las
Investigaciones realizadas es porque se realiza la presente investigación a fin de
demostrar que la medicina natural con la utilización de plantas o yerbas tienen
efectividad lo que permitirá ayudar tanto en la economía como en el cuidado de
nuestro organismo al no ingerir medicina tradicional o científica.
5
El presente estudio de investigación buscó obtener una alternativa al tratamiento a
través de una muestra vegetal, determinando su efectividad sobre cepas de
Candida albicans. Los extractos de Allium sativum L. (ajo) y Allium cepa (cebolla)
podrían ejercer una actividad antimicótica interesante y de gran ayuda al sector de
salud.
Así mismo buscó aportar una solución a la problemática social relacionado a tema
de salud, al buscar solucionar el problema de las infecciones nicóticas causadas
por Candida albicans de amplia resistencia observada, así mismo, busco ampliar el
conocimiento sobre dos plantas ampliamente conocidas en nuestra comunidad y
aplicar sus propiedades al beneficio de la población.
El objetivo planteado en la investigación fue determinar el efecto antifúngico in vitro
del zumo de Allium sativum L. (ajo) y Allium cepa (cebolla) sobre Candida albicans,
para lo cual se formuló los siguientes objetivos específicos:
 Determinar el efecto antifúngico in vitro del zumo de Allium sativum L. (ajo) a
diferentes concentraciones contra Candida albicans
 Determinar el efecto antifúngico in vitro del zumo de Allium cepa (cebolla) a
diferentes concentraciones contra Candida albicans
 Comparar el efecto antifúngico in vitro del zumo de Allium sativum L. (ajo),
Allium cepa (cebolla) y nistatina contra Candida albicans
La hipótesis se planteó en el presente estudio es: Los extractos de Allium sativum
L. (ajo) y Allium cepa (cebolla) presentan efecto antifúngico significativo in vitro
contra Candida albicans. Las hipótesis específicas que nos hemos formulamos
fueron:
 Existe efecto antifúngico in vitro del zumo de Allium sativum L. (ajo) a diferentes
concentraciones contra Candida albicans
 Existe efecto antifúngico in vitro del zumo de Allium cepa (cebolla) a diferentes
concentraciones contra Candida albicans
 El efecto antifúngico in vitro del zumo de Allium sativum L. (ajo) y Allium cepa
(cebolla) contra Candida albicans es mayor que  la nistatina.
6
II. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 Enfoque y diseño de investigación
La investigación presentó un enfoque cuantitativo, de diseño experimental y de
corte transversal. Es experimental debido a que se manipulan las variables en
condiciones controladas de laboratorio con plena intervención del investigador
Analítico: Porque el estudio establece relaciones entre las variables de
asociación o causalidad.
Transversal: Debido a que se obtendrán y recolectarán los datos en un
determinado momento de la investigación.
2.2 Población, muestra y muestreo
Población
La población estuvo conformada por Allium sativum L. (ajo) y Allium cepa (cebolla)
recolectada del distrito de inkahuasi, provincia de Ferreñafe, del departamento de
Lambayeque ubicado a 6°29´36.9” de latitud Sur y a 79°42´49.4” de longitud Oeste
a una altitud de 67 m.s.n.m.
Muestra
Se recolectó una muestra de 1000g de bulbos de ambas especies vegetales.
Muestreo:
El muestreo fue del tipo no probabilístico por conveniencia obtenido de la zona del
cultivo.
En cuanto a los criterios de inclusión y exclusión que se tomarán en cuenta:
Criterios de inclusión:
- Muestra vegetal en buenas condiciones, frescas, sin contaminación ni deterioro
- Muestra vegetal pertenecieron a la misma especie vegetal.
Criterios de exclusión:
- Muestra vegetal sin identificación taxonómica
- Cepa no ATCC
- Cultivos contaminados
- Otros que no cumplan los criterios de inclusión
7
2.3 Variables de investigación
El estudio presentará como variable dependiente el efecto antifúngico sobre
Candida albicans la cual es una variable cuantitativa, ordinal de corte transversal
Variable independiente: Zumo de Allium sativum L. (ajo) y Allium cepa (cebolla)
Definición conceptual: El efecto antifúngico es la inhibición el crecimiento o
desarrollo normal de los hongos.
Definición operacional: Zumo de bulbo extraído por prensión mecánica
Variable dependiente: Efecto antifúngico sobre Candida albicans
Definición conceptual: El efecto antifúngico es la inhibición en el crecimiento o
desarrollo normal de los hongos.
Definición operacional: Diámetro del halo de inhibición producido por el zumo de
las especies vegetales.
2.4 Técnica e instrumento de recolección de datos
La técnica empleada fue la de Kirby Bauer o difusión en disco mediante la medición
del halo de inhibición formado alrededor del disco se logró determinar el efecto
antimicótico26.
En cuanto al instrumento empleado para la recolección de datos de la variable
dependiente (efecto antifúngico) fue el vernier digital, los datos se recolectaron en
una tabla de registro de datos (anexo A).
2.5. Plan de recolección de datos
2.5.1. Autorización y coordinaciones previas para la recolección de datos
En la presente investigación se solicitó directamente el permiso a los agricultores
para acceder a las zonas de cultivo donde se recolecto las especies vegetales
ubicadas a 6.2381° Latitud Sur y 79.3245° longitud Oeste en el distrito de Inkahuasi,
provincia de Ferreñafe del departamento de Lambayeque, así mismo, se
recolectaron dos muestras vegetales. Las que se entregaron a un profesional
especialista biólogo - botánico quien realizó la identificación taxonómica respectiva
(anexo E y F).
8
2.5.2. Recolección de la muestra vegetal
Se recolectó una cantidad de muestra de 1000 g de bulbos de ambas especies
vegetales, las que fueron transportadas inmediatamente al laboratorio para su
análisis respectivo.
Las muestras recolectadas para el estudio taxonómico fueron limpiadas, y
extendidas posteriormente en una cartulina folcote y adherida con papel pegatina,
luego se colocó papel periódico sobre y debajo de las muestras y se llevaron a
prensado por un tiempo aproximado de 7 días.
2.5.3. Identificación taxonómica de la muestra vegetal
Las muestras frescas y representativas de ambas especies fueron llevadas al
especialista botánico para su identificación respectiva y se prensaron y secaron en
cartulina folcote para perennizarlas.
2.5.4. Preparación del zumo de Allium sativum L. (ajo) y Allium cepa (cebolla):
Se pesó una cantidad de 1000 gramos de bulbos frescos de ambas muestras, las
que fueron lavadas y rayadas, posteriormente se colocaron en una prensa y
ejercerá presión hasta obtener toda la cantidad posible de zumo de las muestras,
el zumo será recogido en frascos color ámbar e inmediatamente después se
procedió con su análisis.
2.5.5. Reactivación de la cepa de Cándida albicans40
Se extrajo el hisopo que se encontró en el contenedor de la cepa de Cándida
albicans luego se realizó la siembra en superficie en una placa de agar dextrosa
Saboraud y una placa de agar nutritivo y se incubó a 35 + 1 grados centígrados por
24 horas.
Los inóculos bacterianos se prepararon de acuerdo a las indicaciones establecidas
por el Instituto de estándares clínicos y de laboratorio (CLSI, 2019), tomando entre
3–4 colonias bien diferenciadas y morfológicamente similares de las bacterias
previamente sembradas en placas Petri con agar dextrosa Saboraud y luego se
suspendieron en solución salina fisiológica, realizando diluciones seriadas hasta
llegar a 0.5 de la Escala Mc Farland.
9
2.5.6. Sembrado en placa de cepa de Cándida albicans:36
 Se utilizó un hisopo estéril, luego lo sumergiremos en la solución diluida
anteriormente para tomar el inoculo, se realizó una pequeña presión en los
bordes del tubo para eliminar el exceso.
 En la superficie de la placa con en el medio de cultivo Agar Miuller Hinton,
se sembró el inoculo de manera uniformemente rotando la placa cada 90º.
 Se dejó las placas entre 5 a 10 minutos para que la superficie del medio se
seque si hubiera algún exceso.
 Después del sembrado de la bacteria en estudio, se realizó de manera
asépticamente la colocación de los discos previamente embebidos con los
extractos y diferentes concentraciones en estudio.
 Se incubaron las placas con el sembrado inmediatamente a una temperatura
35°C +1 por 24 horas
 Luego de transcurrido este tiempo se realizó la lectura de los halos de
inhibición mediante el vernier digital.
2.6. Métodos de análisis estadísticos
El análisis estadístico de la presente investigación se realizó mediante la obtención
de la estadística descriptiva de cada grupo de datos, además de las pruebas de
normalidad y homogeneidad de varianzas, además se realizó las pruebas
inferenciales de aceptación o rechazo de la hipótesis alterna, mediante la prueba
de Anova y Tukey con un nivel de significancia alfa de 0,05 empleando el software
estadístico SPSS versión 26.
2.7 Aspectos éticos
En consideración al tipo de investigación se tomó en cuenta el aspecto bioético de
no maleficencia.
Principio de no maleficencia
Mediante este principio se tiene la obligación de no producir daño o disminuirlo bajo
cualquier circunstancia, en tal sentido, todo material biocontaminado fue
previamente esterilizado como norma de bioseguridad para no contaminar el medio
ambiente.
10
III. RESULTADOS
Tabla 1. Estadística descriptiva para cada grupo de tratamientos con el Ajo y la
Cebolla frente a Candida albicans
Diámetro del halo de inhibición
95% Confidence Interval for
Mean
Std. Std. Lower Upper
N Mean Deviation Error Bound Bound Minimum Maximum
Zumo de Ajo (50%) 30 32,9 0,3624 0,0662 32,861 33,132 32,3 33,8
Zumo de Ajo (75%) 30 39,8 0,4078 0,0744 39,664 39,969 38,9 40,6
Zumo de Ajo (100%) 30 42,1 0,4209 0,0769 41,969 42,284 41,2 42,8
Zumo de Cebolla (50%) 30 6,3 0,3960 0,0641 6,206 6,427 6,0 6,9
Zumo de Cebolla (75%) 30 6,8 0,4702 0,0858 6,684 7,036 5,7 7,8
Zumo de Cebolla (100%) 30 7,4 0,3312 0,0605 7,293 7,540 6,7 8,0
Fuente: Programa estadístico SPSS versión 26
En la tabla 1 podemos observar el análisis de los datos de acuerdo a su estadística
hallada, se muestra la media, desviación estándar, error estándar, limite superior e
inferior y los valores máximo y mínimo hallados. Los tratamientos a base de zumo
de ajo presentaron halos de inhibición de 32.9mm + 0.06 para el 50%, 39.8mm +
0.07 para el 75% y 42.1mm + 0.07 para el 100%, los tratamientos a base de cebolla
produjeron halos de inhibición de 6.3mm + 0.06 para el 50%, 6.8mm + 0.08 para el
75% y 7.4mm + 0.06 para el 100%. Se observa comportamiento creciente de los
halos de inhibición con la concentración de los zumos, sin embargo, los halos de
inhibición del ajo son mucho más grandes que el de la cebolla.
11
Tabla 2. Estadística para cada grupo control frente Candida albicans
Diámetro del halo de inhibición
95% Confidence
Interval for Mean
Std. Std. Lower Upper
N Mean Deviation Error Bound Bound Minimum Maximum
Control Negativo 30 6,03 0,0758 0,0138 6,005 6,062 6,0 6,3
(SSF)
Control Positivo 30 25,10 0,3538 0,0646 24,971 25,235 24,5 26,0
(Nistatina)
Fuente: Programa estadístico SPSS versión 26
En la tabla 2 de igual manera se muestra la estadística descriptiva obtenida de los
datos de los grupos control negativo y positivo, el control negativo presentó un halo
de inhibición promedio de 6.03mm + 0.01 y el control positivo presentó un halo de
inhibición promedio de 25.10mm + 0.06. No existe mucha variación en el control
negativo ya que se muestra una desviación estándar de 0,07 comparada con la
desviación del control positivo.
12
Fuente: Programa estadístico SPSS versión 26
Figura 1. Gráfico de Medias de los grupos experimentales y control
En la figura 1, podemos observar el comportamiento de los tratamientos a base de
ajo y cebolla sobre Candida albicans, así como los de los grupos control. Se
observa diámetros de inhibición superior a los producidos por el zumo de la ajo e
inclusive superior al control positivo (nistatina), en el zumo de cebolla no se observa
diámetros grandes, pero si existe una tendencia creciente con la concentración.
13
Tabla 3. Análisis de la varianza de los datos de estudio
Hipótesis de contrastación:
H1: Existe diferencia significativa en al menos una media de los grupos de datos analizados.
Para un p-valor < 0.05
H0: No existe diferencia significativa en las medias de los grupos de datos analizados. Para
un p-valor > 0.05
ANOVA
Diámetro del halo de inhibición
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 36358,095 5 7271,619 46873,118 0,000
Within Groups 26,993 174 0,155
Total 36385,088 179
Fuente: Programa estadístico SPSS versión 26
La tabla 3 presenta el análisis de la varianza para los grupos de datos analizados,
no se consideró los grupos del zumo de cebolla al 50% ni el control negativo por no
presentar normalidad. Se observa un valor p inferior al nivel de significancia α =
0.05, por lo tanto, se rechaza la H0 y acepta H1: Existe diferencia significativa en al
menos una media de los grupos de datos analizados.
14
Tabla 4. Prueba Tukey para comparaciones múltiples por sub grupos
Diámetro del halo de inhibición
Tukey HSDa
Subset for alpha = 0.05
Tratamientos N 1 2 3 4 5 6
Zumo de Cebolla (75%) 30 6,860
Zumo de Cebolla (100%) 30 7,417
Control Positivo 30 25,103
(Nistatina)
Zumo de Ajo (50%) 30 32,997
Zumo de Ajo (75%) 30 39,817
Zumo de Ajo (100%) 30 42,127
Sig. 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 30,000.
En la tabla 5 podemos observar el análisis mediante la prueba de Tukey para
comparaciones múltiples, esta prueba realiza una comparación por pareja entre
todos los grupos de los datos y confirma si existe diferencia significativa entre estos,
de igual forma se descartaron los datos del tratamiento a base de cebolla al 50%.La
prueba encontró diferencia significativa al analizar las medias de todos los grupos
de datos analizados.
15
IV. DISCUSIÓN
4.1. Discusión
Las plantas de la familia Aliáceas han sido reconocidas a nivel mundial por su
empleo como alimento, pero también poseen numerosas propiedades terapéuticas
reconocidas tradicionalmente y a través de estudios los que han encontrado una
potencial fuente de usos en beneficios de la salud de las personas. Se han
reconocido beneficios contra el cáncer, dislipidemias, enfermedades
cardiovasculares, hipertensión entre otras.27,28
De manera general las plantas del género Allium, son ricas en vitaminas,
compuestos fenólicos, flavonoides, fibra, aceites esenciales, aminoácidos, etc. Los
bulbos del ajo y la cebolla contienen precursores de S-alqu(en)il-cisteína sulfóxidos
en cantidades variables que al ser cortados o chancados entran en contacto con la
ezima allinasa produciendo compuestos de tiosulfinatos en cantidades variables.
En el caso del ajo se presentan en cantidad mayoritarias la alicina (tiosulfinato de
dialilo) ampliamente estudiada la cual es muy inestable y rápidamente se
transforma a compuestos mono, di tri-sulfuros de dialilo ditiina, ajoeno entre otros,
sin embargo, en la cebolla existen otros precursores como metiína, propiína, e
isoalliína los que se degradan también a sulfinatos29
La cebolla contiene los compuestos de azufre más comunes como la isoalina (S-
propenil-L-cisteína sulfóxido), metiína (S-metil-L-cisteína sulfóxido) y propiína (S-
propil-L-cisteína sulfóxido). La propiína se transforma en tiosulfinato de
propilpropano (PTS) debido a la acción de la Aliinasa. Aunque es más estable que
la alicina, el PTS también es un compuesto lábil que, a través de reacciones se
transforma en dipropil disulfuro y tiosulfonato de propilpropano (PTSO)15,29.
En la tabla estadística 1 se realizó el tratamiento a los datos de cada grupo
experimental del ajo y cebolla frente a Candida albicans, se muestran las medias
obtenidas para el zumo del ajo, 32.9mm + 0.36 para el 50%, 39.8mm + 0.40 para
el 75% y 42.1mm + 0.42 para el 100%, así mismo para el zumo de cebolla con
halos de 6.3mm + 0.39 para el 50%, 6.8mm + 0.47 para el 75% y 7.4mm + 0.33
para el 100%, además se muestran los estadísticos descriptivos de desviación y
16
error estándar, los límites de confianza al 95% y los valores máximo y mínimo
encontrados en la recolección de los datos.
En la tabla 2 se muestran de la misma manera los estadísticos descriptivos en
relación al control negativo (solución salina fisiológica) y el control positivo
(nistatina) los que presentaron halos de inhibición promedio de 6.03mm + 0.07 y
25.10mm + 0.35 respectivamente.
Los efectos antibacterianos del Allium sativum sobre cepas de Candida albicans
también han sido estudiados por Espinola F. (2019) empleando el extracto acuoso
de la planta mediante la técnica de Kirby Bauer, el investigador evidenció que a
partir de la concentración del 50% el efecto inhibitorio del extracto acuoso de ajo
era tan potente como el patrón de nistatina empleado, obtuvo halos de inhibición
de 12.1mm + 1.19 para el 25%, 21.2mm + 2.34 para el 50%, 24.6mm + 0.96 para
el 75% y 34.2 + 2.6 para el 100%, la nistatina obtuvo halo de inhibición de 16.6mm
+ 1.07, los resultados mostrados en este estudio confirman la actividad antimicótica
potente del ajo, sin embargo, a pesar de emplear el mismo método se muestran
diferencias en los tamaños de los halos de inhibición en ambos estudios a la misma
concentración, lo que se supone que la diferencia en los resultados puede deberse
a factores medioambientales involucrados en la planta como la zona de cultivo,
estación del año, fertilidad del suelo, empleo de abono, etc.
De manera similar Mestanza K. y Vásquez E. (2020) realizaron un estudio del
extracto de ajo contra cepas de Candida albicans resistente a nistatina, en el
estudio se determinó el efecto antimicótico del ajo con un CMI de 25 ul/mL, se
prepararon diluciones a 25µl/mL, 50µl/mL, 75µl/mL, 100µl/mL y 150µl/mL las que
mostraron halos de inhibición que variaron entre los 22mm y 44.6mm dependiendo
del tipo de cepa y la concentración del extracto.
Mendoza A., et al. (2017) emplearon cultivos de C. albicans, Candida
glabrata, Candida tropicalis y Candida krusei obtenidos de prótesis dentales y los
expusieron al aceite de Allium sativum “ajo” y fluconazol, todos los cultivos fueron
sensibles al aceite de ajo mientras que el 4.2% resultaron ser resistentes al
fluconazol.
17
Con respecto al efecto antimicrobiano de Allium cepa (cebolla morada), estos
fueron estudiados por Ramos K. (2018), donde expuso los extractos acuosos de
los bulbos de esta planta contra cepas de Klebsiella pneumoniae, Pseudomona
aeruginosa y Escherichia coli productoras de betalactamasas de espectro
extendido (BLEE), las diluciones a las que se preparó el extracto fueron al 25%,
50%, 75% y 100%, pero solo se observó efecto inhibitorio de los extractos contra
las cepas de Escherichia coli, el resto de bacterias estudiadas no mostraron ser
sensibles a los extractos de Allium cepa, estos resultados muestran ser similares al
nuestro contra Candida albicans aunque en el estudio se realizó contra otros
microorganismos, ya que de igual manera no se obtuvo resultados que demuestren
la efectividad del Allium cepa.
Por el contrario, el estudio realizado Solorzano A. (2020) con tiosulfinato de
propilpropano (PTS) y el tiosulfonato de propilpropano (PTSO) obtenidos del Allium
cepa mostraron tener efectividad contra E. coli ATCC 25922, K. pneumoniae ATCC
700603, E. faecalis ATCC 29212, S. aureus ATCC 29213, C. albicans ATCC
200955 y C. krusei ATCC 6258 pero no contra P. aeruginosa ATCC 27853, los
resultados encontrados en el estudio se muestran contrarios a los nuestros, pero
que se trabajó con dos derivados volátiles de Allium cepa y no con el extracto mismo
como en nuestro estudio, esta diferencia explicaría la razón por la cual se obtuvo
efecto antimicótico muy leve contra Candida albicans en nuestro estudio y
demostraría que PTS y PTSO son los principales derivados con poder
antimicrobiano.
En nuestro estudio los resultados de los halos promedio obtenidos por los grupos
experimentales y los controles se pueden observar en la figura 1, se observa
efectos antimicóticos elevados por parte del zumo del ajo a todas las
concentraciones estudiadas, incluso superiores al control positivo de nistatina, sin
embargo, el zumo de la cebolla muestra efectos inferiores al control positivo y efecto
levemente superior al control negativo.
Se determinó la distribución normal de cada grupo de datos mediante la prueba de
Kolmogorov-Smirnov (anexo H) encontrando normalidad en todos los grupos
excepto en el control negativo y en el grupo del zumo de la cebolla al 50%, los que
presentaron datos muy similares, además se realizo la prueba de homogeneidad
18
de varianzas mediante la prueba de Levene, donde se determinó la existencia de
homogeneidad en todos los grupos analizados.
Se realizó la contrastación de la hipótesis mediante la prueba de ANOVA (tabla 3)
donde se determinó la existencia de grupos diferentes, la prueba de Tukey nos
permitió determinar diferencias significativas en los grupos mostrados en la tabla 4,
no se realizó la comparación con los grupos control y zumo de cebolla al 50% por
mostrar datos con diferente distribución y corresponderse entre sí.
Comparando nuestros resultados con la escala de Duraffourd (Anexo K), se puede
considerar que Candida albicans es sumamente sensible a las concentraciones del
50%, 75% y 100% del zumo de Allium sativum, sin embargo, tiene sensibilidad nula
a al zumo de Allium cepa a todas las concentraciones trabajadas.
19
4.2. Conclusiones
 Se determinó el efecto antifúngico in vitro del zumo de Allium sativum L. (ajo) a
diferentes concentraciones contra Candida albicans mediante la formación de
halos de inhibición los que fueron de 32.9mm + 0.36 para el 50%, 39.8mm +
0.40 para el 75% y 42.1mm + 0.42 para el 100%.
 Se determinó el efecto antifúngico in vitro leve del zumo de Allium cepa
(cebolla) a diferentes concentraciones contra Candida albicans mediante la
formación de halos de inhibición los que fueron de 6.3mm + 0.39 para el 50%,
6.8mm + 0.47 para el 75% y 7.4mm + 0.33 para el 100%.
 Al comparar el efecto antifúngico in vitro del zumo de Allium sativum L. (ajo),
Allium cepa (cebolla) y nistatina contra Candida albicans el ajo presento mayor
efecto antifúngico que la nistatina, por el contrario, la cebolla fue mucho menor.
20
4.3. Recomendaciones
 Se recomienda a futuras investigaciones ampliar los estudios sobre estas
plantas de gran potencial antimicrobiano, ya que presentan una gama de
compuestos de rápida transformación pero que pueden ser aprovechados.
 Así mismo, se recomienda a las instituciones de salud promover la
investigación de plantas medicinales y el tratamiento alternativo de las
enfermedades mediante estas.
 De mismo modo, se recomienda a la población en fomentar el consumo
tradicional de plantas medicinales como primera línea para combatir sus
enfermedades y evitar de esta manera el uso indiscriminado de medicamentos
y el incremento de la resistencia bacteriana.
21
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24
ANEXOS
25
Anexo A. Operacionalización de las variables
UNIDAD DE
VARIABLE
DIMENSIONES TIPO ESCALA INDICADORES MEDIDA/PUNTO
INDEPENDIENTE
DE CORTE
100%
Zumo de Allium Concentración
Cuantitativo Ordinal 75% Porcentajesativum (ajo)
50%
100%
Zumo de y Allium Concentración
cepa (cebolla) Cuantitativo
Ordinal 75% Porcentaje
50%
UNIDAD DE
VARIABLE
DIMENSIONES TIPO ESCALA INDICADORES MEDIDA/PUNTO
DEPENDIENTE
DE CORTE
≤ 8mm
Nula
Halo de 8mm a 14mm
Efecto antifúngico Cuantitativo Ordinal Sensible
inhibición 15mm a 20mm
Medio
˃ a 20mm
Muy sensible
26
Anexo B. Instrumento de recolección de datos
REGISTRO DE DATOS DE TAMAÑOS DE HALO DE INHIBICIÓN
Zumo de Allium sativum (ajo) Zumo de y Allium cepa (cebolla)
Control Control
50% 75% 100% 50% 75% 100%
Placa Negativo Placa Positivo
(mm) (mm) (mm) (mm) (mm) (mm)
(mm) (mm)
1 1
2 2
3 3
4 4
5 5
6 6
7 7
8 8
9 9
10 10
11 11
12 12
13 13
14 14
15 15
27
Anexo C. Allium cepa (cebolla)
28
Anexo D. Allium sativum (ajo)
29
Anexo E. Clasificación taxonómica de Allium sativum L. “ajo”
30
Anexo F. Clasificación taxonómica de Allium cepa “cebolla”
31
Anexo G. Recolección de datos
Zumo de Allium sativum (ajo) Zumo de y Allium cepa (cebolla)
Placa Control 50% 75% 100% Placa Control 50% 75% 100%
Negativo (mm) (mm) (mm) Positivo (mm) (mm) (mm)
(mm) NISTATINA
1 6 32,9 40,4 41,6 1 25,1 6,6 6,4 8,0
2 6 32,3 39,5 42,7 2 24,9 6,0 6,5 6,9
3 6 33,2 39,9 42,5 3 25,0 6,5 7,1 7,4
4 6 33,0 40,0 42,0 4 24,8 6,0 7,2 7,3
5 6 32,6 39,4 41,8 5 25,1 6,4 7,0 7,6
6 6 33,2 39,8 41,7 6 25,3 6,2 6,8 7,4
7 6 32,9 40,3 42,4 7 26,0 6,7 6,9 7,0
8 6,1 32,9 39,9 42,5 8 25,4 6,8 7,2 7,8
9 6 32,8 39,8 41,8 9 25,2 6,6 7,4 7,1
10 6,2 33,1 39,7 42,5 10 25,1 6,3 6,8 8,0
11 6 33,6 40,0 42,0 11 25,1 6,4 7,0 7,5
12 6,1 33,0 40,3 42,7 12 24,8 6,5 7,5 7,6
13 6 33,6 39,6 42,1 13 24,7 6,1 6,7 7,3
14 6 33,1 40,2 42,5 14 25,4 6,8 6,1 7,8
15 6 32,4 39,8 41,2 15 24,5 6,3 6,6 7,3
16 6,3 32,8 39,7 41,7 16 24,7 6,0 7,8 7,3
17 6 32,8 39,4 41,9 17 25,3 6,0 5,7 7,2
18 6 33,0 39,8 42,3 18 24,6 6,9 6,3 7,3
19 6 32,7 40,6 42,8 19 25,6 6,5 6,8 7,1
20 6,2 32,9 40,3 42,0 20 25,2 6,4 7,2 7,5
21 6 32,5 39,3 41,3 21 24,5 6,0 7,6 6,7
22 6 33,2 39,2 41,7 22 24,9 6,0 6,7 7,3
23 6 33,1 40,0 42,3 23 25,0 6,2 6,6 7,9
24 6,1 32,7 40,2 42,5 24 25,5 6,7 6,3 7,4
25 6 33,4 39,4 42,7 25 25,6 6,0 7,2 7,3
26 6 32,5 39,2 42,2 26 24,7 6,1 7,5 7,0
27 6 33,8 40,0 42,4 27 25,2 6,5 6,6 8,0
28 6 33,3 40,2 41,8 28 25,3 6,0 6,5 7,6
29 6 33,2 38,9 42,1 29 25,2 6,0 7,0 7,3
30 6 33,4 39,7 42,1 30 25,4 6,0 6,8 7,6
32
Anexo H.  Prueba de Normalidad de Kolmogorov-Smirnov
Kolmogorov-Smirnova
Statis
Tratamientos tic df Sig. Statistic df
Diámetro del halo de Zumo de Ajo (50%) 0,087 30 0,200* 0,985 30
inhibición Zumo de Ajo (75%) 0,093 30 0,200* 0,980 30
Zumo de Ajo (100%) 0,112 30 0,200* 0,961 30
Zumo de Cebolla (50%) 0,191 30 0,007 0,882 30
Zumo de Cebolla (75%) 0,084 30 0,200* 0,988 30
Zumo de Cebolla (100%) 0,138 30 0,152 0,960 30
Control Negativo (SSF) 0,470 30 0,000 0,512 30
Control Positivo 0,096 30 0,200* 0,975 30
(Nistatina)
Anexo I. Prueba de Homogeneidad de varianzas
Test of Homogeneity of Variances
Levene Statistic df1 df2 Sig.
Diámetro del halo de Based on Mean 1,081 5 174 0,373
inhibición Based on Median 1,000 5 174 0,420
Based on Median and with 1,000 5 164,092 0,420
adjusted df
Based on trimmed mean 1,088 5 174 0,369
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Anexo J. Evidencias fotográficas del trabajo de campo
Figura 2. Preparación de la muestra
Figura 3. Nefelómetro de Mc Farland
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Figura 4. Análisis microbiológico
35
Figura 5. Efecto antimicótico
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Anexo K. Escala de Duraffourd
Sensibilidad antimicrobiana Diámetro del halo e inhibición
- + ++ +++
Nula < 8 mm
Sensible 9–14 mm
Muy sensible 15-19 mm
Sumamente sensible > 20 mm
Elaborada por el investigador
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