FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA EFECTO HIPOGLUCEMIANTE DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE LAS HOJAS DE Passiflora tripartita “Tumbo” EN RATAS DIABÉTICAS INDUCIDAS POR ALOXANO TESIS PARA OPTAR AL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO FARMACÉUTICO AUTORES Bach. HERRERA TAPIA, GEISER Bach. ROJAS AGUEDO, LIZETH MILAGROS ASESOR: Mg. ACARO CHUQUICAÑA, FIDEL ERNESTO LIMA –PERÚ 2020 DEDICATORIA Se lo dedicamos especialmente a nuestro padre celestial que nos acompañó durante nuestra etapa profesional, nos guio por el sendero correcto y nunca nos dejó caer ante ninguna adversidad A nuestros padres y hermanos, por su apoyo incondicional, por darnos las fuerzas, consejos, paciencia y compresión. Por enseñarnos a que en la vida a pesar de la adversidad uno tiene que aprender de sus errores y seguir en la lucha día a día hasta alcanzar su objetivo más preciado. A la vida por este nuevo triunfo, a mis amigos con quienes siempre estaremos agradecidos gracias a sus recomendaciones, consejos y siempre estar a nuestro lado, y creyeron en la realización de esta tesis. Herrera Tapia, Geiser Rojas Aguedo, Lizeth Milagros ii AGRADECIMIENTO − A la Universidad María Auxiliadora nuestra alma mater, por habernos aceptado ser parte de ella y abierto las puertas de su seno científico para poder estudiar nuestra carrera profesional, así como también a los diferentes docentes que brindaron con mucho esmero su sabiduría, conocimiento y apoyo para seguir adelante día a día. − A nuestro asesor Mg. QF. FIDEL ERNESTO ACARO CHUQUICAÑA, docente investigador, Químico Farmacéutica Mg. en Farmacología, Asesor en tesis de pre grado y postgrado: estudio fitoquímico, farmacológico y toxicológico. Asesor de la presente tesis. Por su constante apoyo, orientación y consejo. − A Mg. VICTOR HUMBERTO CHERO PACHECO, por su apoyo en la parte de estadística e interpretación de resultados. − A CARLOS ALCEDO MORA, quien consideramos un buen amigo y un ejemplo a seguir, por mostrarnos el interés en la investigación y por compartir sus conocimientos, ya que de que sirve aprender si uno no comparte lo aprendido. − A JACKELINE PILAR CASTILLO LAZO por ser una gran compañera y amiga que desde el cielo nos bendice y guía nuestro camino profesional y que todo este esfuerzo se lo dedicamos a ella. − A LUIS ESCUDERO, tecnólogo de laboratorio de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UMA, por su colaboración y paciencia durante la ejecución de tesis. − Al Presidente y a los Miembros del Jurado Examinador y Calificador, nombrado por la Facultad de Farmacia y Bioquímica. iii RESUMEN Objetivo: Determinar el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en ratas diabéticas inducidas por aloxano. Materiales y Métodos: la especia vegetal fue recolectada en el distrito de independencia, Huaraz, departamento de Áncash, Perú a 5100 m.s.n.m. Posteriormente se realizó el proceso de la maceración de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en agua y alcohol por 7 días, para así obtener finalmente el extracto seco. Se realizó un análisis fitoquímico preliminar mediante reacciones de coloración y precipitación. Se realizó el ensayo de toxicidad CL50 en larvas de Artemia salina. Se realizó un estudio tipo experimental aplicativo, de nivel explicativo, con 42 ratas machos en 7 grupos de 6 ratas. A cada animal se midió la glucemia basal con un glucómetro digital para luego aplicar el método de inducción a hiperglicemia con aloxano 130mg/kg, pasado las 24 horas recibieron los siguientes tratamientos: grupo I: agua destilada, grupo II: aloxano, grupo III: aloxano + glibenclamida 5mg/kg, grupo IV: aloxano + insulina 4UI/kg, grupo V: aloxano + extracto 100mg/kg, grupo VI: aloxano + extracto 200mg/kg, grupo VII: aloxano + extracto 300mg/kg, luego administrado los tratamientos se les midió la glucosa en el día 1 a las 0, 2, 4, 6 y 8 horas, los 9 días restantes se les midió a las 0, 2 y 4 horas. Resultados: en el análisis fitoquímico preliminar se encontró los siguientes metabolitos: flavonoides, alcaloides, compuestos fenólicos, taninos, saponinas. En el ensayo de toxicidad CL50 en Artemias salinas se encontró una CL50 de 519.612 µg/mL, que según la escala CYTED se encuentra en el rango de moderadamente toxico. En el ensayo de hiperglicemia se observó que 24 horas después de administrar aloxano 130mg/kg, la glucosa se presentó mayor a 200mg/dL. Al administrar los tratamientos se observó que la insulina tiene el valor más bajo con 143mg/dL, seguido de la glibenclamida 196mg/dL, luego extracto de 300mg/kg con 270mg/dL, que se mantuvo constante por los 10 días de tratamiento. Conclusiones: el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” presento un mayor efecto hipoglicemiante a una dosis de 300mg/kg y menor efecto a una dosis de 100 y 200mg/kg en ratas inducidas a hiperglicemia con aloxano 130mg/kg. Palabras claves: extracto hidroalcohólico, Passiflora tripartita “Tumbo”, hiperglicemia, glucosa, aloxano. iv ABSTRACT Objective: To determine the hypoglycemic effect of the hydroalcoholic extract of the leaves of Passiflora tripartite “Tumbo” in diabetic rats induced by aloxane. Materials and Methods: the vegetable spice was collected in the district of independence, Huaraz, department of Ancash, Peru at 5100 m.s.n.m. Subsequently, the process of maceration of the leaves of Passiflora tripartita “Tumbo” in water and alcohol was carried out for 7 days, in order to finally obtain the dry extract. A preliminary phytochemical analysis was performed by coloring and precipitation reactions. It was carried out in an LC50 toxicity test in larvae of Artemia salina. An explanatory experimental type study was conducted, with an explanatory level, with 42 male rats in 7 groups of 6 rats. Basal blood glucose was measured on each animal with a digital glucometer and then applied the method of induction to hyperglycemia with aloxane 130mg / kg, after 24 hours they received the following treatments: group I: distilled water, group II: aloxane, group III: aloxane + glibenclamide 5mg/kg, group IV: aloxane + insulin 4UI/kg, group V: aloxane + extract 100mg/kg, group VI: aloxane + extract 200mg/kg, group VII: aloxane + extract 300mg/kg, then administered treatments were measured glucose on day 1 at 0, 2, 4, 6 and 8 hours, the remaining 9 days were measured at 0, 2 and 4 hours. Results: the following metabolites were found in the preliminary phytochemical analysis: flavonoids, alkaloids, phenolic compounds, tannins, saponins. In the LC50 toxicity test in saline Artemias, an LC50 of 519,612µg/Ml, was found, which according to the CYTED scale is in the moderately toxic range. In the hyperglycemia trial it was observed that 24 hours after administering aloxane 130mg/kg, glucose was greater than 200mg/dL. When administering the treatments it was observed that insulin has the lowest value with 143mg/dL, followed by glibenclamide 196mg/dL, then extract of 300mg/kg with 270mg/dL, which remained constant for the 10 days of treatment. Conclusions: the hydroalcoholic extract of the leaves of Passiflora tripartita “Tumbo” presented a greater effect hypoglycemic at a dose of 300mg/kg and less effect at a dose of 100 and 200mg/kg in rats induced to hyperglycemia with aloxane 130mg/kg. Keywords: hydroalcoholic extract, “Tumbo” tripartite passiflora, hyperglycemia, glucose, aloxane. ÍNDICE v PORTADA I DEDICATORIA Ii AGRADECIMIENTO Iii RESUMEN Iv ABSTRACT v INDICE vi LISTA DE FIGURAS viii LISTA DE TABLAS x LISTA DE GRÁFICOS xi INTRODUCCIÓN 1 1. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 2 1.1 Planteamiento del problema 2 1.2 Formulación del problema 4 1.2.1 Problema General 4 1.2.2 Problemas Específicos 4 1.3 Objetivos 5 1.3.1 Objetivo General 5 1.3.2 Objetivo Específico 5 1.4 Justificación 6 2. MARCO TEÓRICO 7 2.1 Antecedentes 7 2.2 Base teórica 13 2.3 Definición de términos básicos 28 2.4 Hipótesis 30 vi 2.4.1 Hipótesis General 30 2.4.2 Hipótesis Específicas 30 3. METODOLOGÍA 31 3.1 Tipo de investigación 31 3.2 Nivel de investigación 32 3.3 Diseño de la investigación 32 3.4 Área de estudio 33 3.5 Población y muestra: Criterios de inclusión y exclusión 34 3.6 Variables y Operacionalización de variables 35 3.7 Instrumentos de recolección de dato 35 3.8 Validación de los instrumentos de recolección de datos 36 3.9 Procedimientos de recolección de datos 36 3.10 Componente ético de la investigación 46 3.11 Procesamiento y análisis de datos 46 4. RESULTADOS 47 5. DISCUSIÓN 65 6. CONCLUSIONES 67 7. RECOMENDACIONES 68 8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 69 9. ANEXOS 74 9.1 Matriz de consistencia 74 9.2 Instrumento de recolección de datos 77 vii LISTA DE FIGURAS Figura N°1 Diabetes tipo 2………………………………………………… 14 Figura N°2 Ingreso de glucosa a la célula…………………………………. 19 Figura N°3 Estructura química de la glibenclamida………………………. 23 Figura N°4 Ficha de validación N°1 – instrumento de recolección de datos…………………………………………………………… 80 Figura N°5 Ficha de validación N°2 – instrumento de recolección de datos…………………………………………………………… 81 Figura N°6 Ficha de validación N°3 – instrumento de recolección de datos…………………………………………………………… 82 Figura N°7 Constancia de identificación botánica de Passiflora tripartita 83 “tumbo”. Figura N°8 Recolección de datos del ensayo de toxicidad en Artemia salina…………………………………………………………. 84 Figura N°9 Inducción a hiperglicemia con aloxano………………………. 85 Figura N°10 Recolección de datos: test hipoglicemiante…………………... 86 Figura N°11 Recolección de la muestra vegetal de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo”…………………………………………….. 108 Figura N°12 Obtención del polvo fino de las hojas de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo”…………………………………. 109 Figura N°13 Pesado del polvo obtenido…………………………………….. 109 Figura N°14 Preparación del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo”…………………………………. 110 Figura N°15 Filtrado del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo”…………………………………. 110 Figura N°16 Secado del extracto hidroalcohólico en estufa………………... 111 Figura N°17 Obtención del extracto seco…………………………………... 111 Figura N°18 Prueba de solubilidad…………………………………………. 112 Figura N°19 Análisis fitoquímico………………………………………… 112 Figura N°20 Obtención de larvas de Artemia salina……………………….. 113 Figura N°21 Preparación de los tratamientos del ensayo de toxicidad……... 113 viii Figura N°22 Exposición de los nauplios de Artemia salina a los tratamientos en 24 horas………………………………………. 114 Figura N°23 Observación y conteo de los nauplios vivos y muertos………. 115 Figura N°24 Aclimatación de los animales de experimentación…………… 116 Figura N°25 Pesado de los animales de experimentación y toma de glucosa en ayunas……………………………………………………… 116 Figura N°26 Preparación del aloxano………………………………………. 116 Figura N°27 Inducción a hiperglicemia con aloxano………………………. 117 Figura N°28 Animales de experimentación con hiperglicemia…………….. 117 Figura N°29 Preparación de los tratamientos a administrar……………….... 117 Figura N°30 Administración de los tratamientos…………………………… 118 Figura N°31 Medición de la glucosa después de la administración de los tratamientos…………………………………………………… 118 ix LISTA DE TABLAS Tabla N°1 Diferencias entre la diabetes tipo 1 y tipo 2…………………. 17 Tabla N°2 Niveles de glucosa…………………………………………... 18 Tabla N°3 Diseño de investigación……………………………………... 33 Tabla N°4 Instrumento de recolección de datos………………………… 34 Tabla N°5 Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”…………………….. 47 Tabla N°6 Análisis fitoquímico………………………………………… 48 Tabla N°7 Estudio de letalidad…………………………………………. 49 Tabla N°8 Análisis probit del ensayo de letalidad……………………… 49 Tabla N°9 Escala CYTED………………………………………………. 49 Tabla N°10 Análisis descriptivos………………………………………… 50 Tabla N°11 Análisis de varianza…………………………………………. 51 Tabla N°12 Prueba de Post-Hoc (Tukey)……………………………….... 52 Tabla N°13 Subconjuntos homogéneos día 1…………………………….. 55 Tabla N°14 Subconjuntos homogéneos día 2…………………………….. 56 Tabla N°15 Subconjuntos homogéneos día 3…………………………….. 57 Tabla N°16 Subconjuntos homogéneos día 4…………………………….. 58 Tabla N°17 Subconjuntos homogéneos día 5…………………………….. 59 Tabla N°18 Subconjuntos homogéneos día 6…………………………….. 60 Tabla N°19 Subconjuntos homogéneos día 7…………………………….. 61 Tabla N°20 Subconjuntos homogéneos día 8…………………………….. 62 Tabla N°21 Subconjuntos homogéneos día 9…………………………….. 63 Tabla N°22 Subconjuntos homogéneos día 10…………………………… 64 x LISTA DE GRÁFICOS Gráfico N°1 Flujograma del estudio de la obtención del extracto hidroalcohólico de la hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”………………………………………………………… 37 Gráfico N°2 Flujograma para obtener el porcentaje de rendimiento del extracto hidroalcohólico de la hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”…………………………………………………………. 38 Gráfico N°3 Esquema para la determinación de la CL50 en Artemia salina… 43 Gráfico N°4 Esquema de la prueba de solubilidad, análisis fitoquímico, estudio de CL50 y estudio farmacológico de extracto hidroalcohólico de la hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”….. 45 xi INTRODUCCIÓN De acuerdo a datos estadísticos de la Diabetes Mellitus en el mundo según la OMS para el año 2014 hubo 422 millones de personas con esta enfermedad, más del 80% de las muertes por diabetes se registran en países de ingresos bajos y medios; además las muertes por diabetes podrían multiplicarse por dos entre los años 2005 y 2030.(1) La federación internacional de la diabetes (FID) refiere que las estimaciones han mostrado incrementos alarmantes, en el 2019 aproximadamente 463 millones de adultos entre las edades de 20 a 79 años vivían con diabetes; para 2045 esto aumentará a 700 millones. La proporción de personas con diabetes tipo 2 está aumentando en la mayoría de los países.(2) Ante esta seria amenaza en la salud pública daremos un enfoque teórico y perspicaz a dar una solución en las poblaciones de mayor riesgo y con poca capacidad adquisitiva, ya que en nuestro país los tratamientos medicamentosos son de un valor en muchos casos inalcanzables, por ello a través de esta posibilidad las terapias alternativas y complementarias estarían dando una mejoría a los pacientes con esta enfermedad endocrina. El Perú es un país donde existen mucha variedad de plantas medicinales de las cuales todavía no han sido bien estudiadas; sin embargo, los pobladores que son oriundos del campo son muy conocedores de los usos y beneficios para tratar diversas enfermedades. En esta investigación que tiene por título “Efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita (Tumbo) en ratas diabéticas inducidas por aloxano”, fue motivado por el desborde de enfermedades de tipo metabólica que caracterizan en las últimas décadas a la diabetes mellitus, la cual es importante destacar una verdadera alternativa de tipo fitofarmacológico, evidenciándolo con estudio de índole experimental. Teniendo como objetivo principal a determinar el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en ratas diabéticas inducidas por aloxano. 1 1. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 1.1 Planteamiento del problema La diabetes es una enfermedad crónica que aparece cuando el páncreas no produce insulina suficiente o cuando el organismo no utiliza eficazmente la insulina que produce, todo ello conduce a niveles elevados de glucosa en la sangre conocida como hiperglucemia que a largo plazo, están asociados con daños en el cuerpo y fallas en varios órganos y tejidos.(3) La federación internacional de la diabetes (FID) estima que en el año 2019 aproximadamente 463 millones de adultos entre las edades de 20 a 79 años viven actualmente con diabetes. Esto representa el 9,3% de la población mundial en este rango de edad. También pronostican que el número total aumentará considerablemente a 578 millones que representa el 10.2% para el año 2030 y a 700 millones representando un 10.9% para 2045. (4) El 79% de los adultos con diabetes viven en países de bajos y medianos ingresos, 1 de cada 5 personas mayores de 65 años tiene diabetes y 1 de cada 2 personas con diabetes no fueron diagnosticadas que representa aproximadamente 232 millones de personas.(4) En su informe estiman el número de adultos entre las edades de 20 a 79 años con intolerancia a la glucosa es de 374 millones (7,5% de la población mundial en este rango de edad). Además en su estudio pronostican que esto aumentará a 454 millones (8.0%) para el año 2030 y 548 millones (8.6%) para 2045.(4) Estiman también que más de 1.1 millones de niños y adolescentes menores de 20 años tienen diabetes tipo 1. Más de 20 millones de nacimientos vivos (1 de cada 6 nacidos vivos) se ven afectados por la diabetes durante el embarazo. Actualmente no es posible estimar el número de niños y adolescentes con diabetes tipo 2. Estiman que 374 millones de personas tienen un mayor riesgo de desarrollar diabetes tipo 2 2 El número de muertes resultantes de la diabetes y asociado a otras complicaciones en el año 2019 se estima en 4,2 millones. (4) El gasto anual mundial en salud a causa de la diabetes se estima en USD 760 mil millones. Se proyecta que el gasto alcanzará aproximadamente los USD 825 mil millones para el año 2030 y los USD 845 mil millones para 2045.(4) En Perú, El Ministerio de Salud (Minsa) recomienda reducir el consumo de bebidas y refrescos, productos envasados con altas concentraciones de azúcar, por tratarse de los principales factores que influyen en la aparición de la diabetes, enfermedad que se presenta en el 3.6% de los peruanos a partir de los 15 años de edad. (5) En la Encuesta Demográfica y de Salud Familiar – ENDES del Instituto Nacional de Estadística e Informática (INEI) correspondiente al año 2018. Según este reporte registra que la población peruana femenina fue la más afectada (3,9%) respecto a la masculina (3,3%). Por región natural, el mayor porcentaje de personas con diabetes se encuentra en Lima Metropolitana (4,4%) y el resto de la costa (4%), y en menor porcentaje en la Sierra (2,1%) y Selva (3,3%). (5) La diabetes es la séptima causa de muerte, la sexta causa de ceguera y la causa líder de la enfermedad renal terminal y de las amputaciones bajas de las piernas, las emergencias diabéticas y desordenes cardiovasculares. En el Perú la diabetes es responsable del 31.5% de los infartos de miocardio y del 25% de los accidentes vasculares cerebrales, infecciones, emergencias diabéticas y desordenes cardiovasculares sin la causa principal de admisiones con mortalidad menor del 10% principalmente como resultado de la infección, enfermedad renal crónica y accidente cerebrovascular. (6) Por lo tanto, la presente investigación busca determinar el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en ratas diabéticas inducidas por aloxano. 3 1.2 Formulación del problema 1.2.1 Problema General: − ¿Cuál es el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en ratas diabéticas inducidas por aloxano? 1.2.2 Problemas Específicos: − ¿Cuáles son los metabolitos secundarios presentes en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” − ¿Cuál es la toxicidad aguda CL50 del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en larvas de Artemia salinas? − ¿Cuál es el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 100mg/Kg en ratas diabéticas inducidas por aloxano? − ¿Cuál es el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 200mg/Kg en ratas diabéticas inducidas por aloxano? − ¿Cuál es el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” 300mg/Kg en ratas diabéticas inducidas por aloxano? 4 1.3 Objetivos: 1.3.1 Objetivo General − Determinar el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en ratas diabéticas inducidas por aloxano. 1.3.2 Objetivos Específicos: − Identificar los metabolitos secundarios presentes en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. − Evaluar la toxicidad aguda CL50 del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en larvas de Artemia salina. − Evaluar el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 100mg/Kg en ratas diabéticas inducidas por aloxano. − Evaluar el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 200mg/Kg en ratas diabéticas inducidas por aloxano. − Evaluar el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 300mg/Kg en ratas diabéticas inducidas por aloxano. 5 1.4 Justificación 1.4.1 Justificación Teórica La diabetes es una enfermedad crónica, compleja y multifactorial que se encuentra a nivel mundial que afecta tanto a niños, adultos y ancianos, es por ello que en estos tiempos están enfatizando en utilizar tratamientos alternativos que contribuyan en los tratamientos científicamente aprobados. Esta enfermedad es un problema de salud que pone en riesgo la vida de los individuos ya que está asociada a complicaciones muy severas a largo plazo, afectando a varios órganos (corazón, riñón, nervio, vaso sanguíneo, etc.). Es por ello los profesionales de la salud deben orientar a la población, en la toma de conciencia sobre la prevención de esta enfermedad, la automedicación y el consumo desinformado de plantas medicinales. Passiflora tripartita “Tumbo” con evidencia científica serían una opción terapéutica siempre y cuando reúnan las condiciones y concentraciones óptimas para su uso humano. 1.4.2 Justificación Práctica El uso de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” con efecto hipoglucemiante se estaría ayudando al tratamiento coadyuvante a los pacientes que padecen de esta enfermedad (Diabetes Mellitus) e ir dando importancia a los beneficios de los recursos naturales de origen vegetal que no atentan contra la salud, que sean cien por ciento naturales y que presenten menos efectos adversos en comparación con la medicina convencional. Esta investigación permitirá que el costo sea accesible en personas de bajos recursos económicos, en comparación con los productos farmacéuticos. Asimismo, sería una alternativa para la elaboración de un producto farmacéutico. 6 2. MARCO TEÓRICO 2.1 Antecedentes 2.1.1 Antecedentes Internacionales − Ortiz y Anzola en 2017, realizaron el estudio titulado “Estudio del efecto fisiológico del consumo de arepas enriquecidas con pectina extraída de la cáscara de Passiflora tripartita var. Mollissima (Curuba)”, en la ciudad de Bogotá – Colombia. El objetivo de la investigación fue evaluar el efecto fisiológico del consumo de arepas de maíz enriquecidas con 10% (p/p) de pectina extraída de cáscara de curuba sobre los niveles séricos de glucosa y lípidos en adultos voluntarios. La pectina fue extraída con HCL y precipitada con etanol al 96% (v/v). Primero, los voluntarios consumieron arepa sin pectina por 7 días; luego, arepa con 10% (p/p) de pectina cítrica comercial por 20 días y, finalmente, arepa con 10% de pectina de curuba por 20 días. Los resultados mostraron que, al consumir arepa con pectina de curuba, los niveles séricos de glucosa disminuyeron significativamente (5,88% (p = 0,023)), mientras que no se afectó el perfil lipídico. Concluyeron que la pectina de curuba ofrece a los consumidores un alimento benéfico para reducir los niveles de glucosa en la sangre.(7) − Estevam et al. En 2017 realizaron el estudio titulado “Regulación glucémica y características citotóxicas de la Fracción de acetato de etilo de hojas Passiflora cincinnata Mast”, en la ciudad de San Cristóbal - Brasil. Siendo el objetivo evaluar las propiedades anti-lipoperoxidativas y anti-α-amilasa, y la citotoxicidad de un extracto y fracción de hojas de maracuyá (P. cincinnata Mast), así como la actividad antihiperglucemiante de la fracción rica en flavonoides glicosilados y que muestran una baja citotoxicidad en ratas con una condición de hiperglucemia posprandial. El extracto hidroalcohólico de P. cincinnata presentó un alto contenido de taninos totales, flavonoides y flavonoles. Sin embargo, F.ACT tuvo la mayor concentración de flavonoides entre las fracciones estudiadas. El análisis por HPLC de esta fracción reveló la presencia de los flavonoides isovitexina, orientina e isoorientina. F.ACT 7 mostró una citotoxicidad baja a ninguna inferior a 150 μg.mL. Con respecto a la actividad antihiperglucémica postprandial de F.ACT, se observó a 50 y 100 mg.kg-1. (8) − Rocha et al. En 2015 realizaron el estudio titulado “Efecto hipoglicémico de nueva pectina aislada de Passiflora Glandulosa Cav en ratones diabéticos inducidos por aloxano”, en la ciudad de Caerá - Brasil. Tuvieron como objetivo caracterizar y evaluar químicamente en ratones diabéticos los efectos hipoglucemiantes de la pectina aislada de P. glandulosa. El aislamiento y la caracterización química de la pectina lo realizaron mediante espectroscopia de resonancia magnética nuclear de protones (1H RMN), espectroscopia infrarroja de transformada de Fourier (FTIR), peso molecular, grado de metoxilación y pruebas fisicoquímicas. La diabetes se indujo en los animales con aloxano y los ratones se trataron con pectina durante un período de 30 días. Los resultados indican que la pectina estudiada tiene una acción hipoglucemiante a dosis de 200, 400 y 600 mg / kg de peso corporal en animales con diabetes inducida por aloxano. La dosis de 200 mg / kg de peso corporal redujo la concentración de glucosa en la sangre y no mostró toxicidad renal ni hepatotoxicidad para los animales.(9) − Lima et al. En 2012 realizaron el estudio titulado “Efecto hipoglicémico de la harina del fruto de maracuyá de matorral (Passiflora nítida Kunth) en ratas normales y diabéticos”, en la ciudad de Manaus-Brasil. Objetivo analizar las características nutricionales del mesocarpio del fruto de la P. nitida y evaluar el potencial hipoglucemiante en ratas normales y diabéticas. La harina del mesocarpio del fruto fue elaborada y analizada cuanto la composición centesimal. La actividad hipoglicémica fue evaluada por medio de dos modelos experimentales en ratones Wistar. En el experimento agudo, después de 15 minutos de la administración los niveles glucémicos fueron de 146 ± 12 mg dL-1 en el grupo control y 112 ± 2,5 mg dL-1, grupo que recibió 1g kg-1 de peso de la harina. En el experimento crónico, después de 21 días, hubo la reducción de 493 mg dL-1 a 302 mg dL-1 (38,7%) y 195 mg dL-1 (60,4%) en la glucemia en los grupos que fueron tratados con 20 y 40% de ración enriquecida con la harina, respectivamente, en relación al grupo 8 diabético no tratado. En ambos modelos experimentales, la harina del mesocarpio se mostró eficaz en la reducción de la glucemia. El fruto de P. nitida se mostró un producto natural potencial para el control de la glucemia en la diabetes.(10) − Rakesh et al. En 2012 realizaron el estudio “Actividad antidiabética de Passiflora incarnata Linn. en diabetes inducida por estreptozotocina en ratones” en la India. Los extractos metanólicos de las hojas de Passiflora incarnata se administraron por vía oral (100 y 200 mg/kg, durante 15 días) a ratones diabéticos inducidos por estreptozotocina. Se evaluaron los efectos de la hipoglucemia, la prueba de tolerancia oral a la glucosa, el cambio en el peso corporal y el perfil lipídico de los ratones diabéticos, se llevó a cabo examen histológico. El extracto metanólico (200 mg / kg) produjo una reducción significativa en el nivel de glucosa en sangre en ayunas en ratones diabéticos inducidos por estreptozotocina. También se observaron diferencias significativas en el nivel de glucosa en la orina, la prueba de tolerancia oral a la glucosa, el perfil de lípidos en suero y el peso corporal de los ratones diabéticos tratados con extracto metanólico, en comparación con los ratones diabéticos, normales y tratados con drogas estándar. Los estudios histopatológicos del páncreas mostraron una regeneración comparable de las células por extracto que anteriormente se necrosó por estreptozotocina. Concluyeron que el extracto metanólico de Passiflora incarnata exhibe importantes actividades anti-hiperglucémicas e hipolipidémicas en la diabetes inducida por estreptozotocina en ratones.(11) 9 2.1.2 Antecedentes Nacionales − Plasencia et al. En el 2019 realizaron el estudio “Efecto del zumo de Passiflora tripartita var. mollissima “pur pur” sobre la acción hiperglucemiante de la adrenalina en Rattus rattus var. albinus" en la ciudad de Trujillo. Con el objetivo de determinar el efecto del zumo de Passiflora tripartita var. mollissima “pur pur” sobre la acción hiperglucemiante de la adrenalina en Rattus rattus var. Albinus, colectaron frutos y fueron transportadas al laboratorio para la obtención de datos de su composición fitoquímica, luego se preparó el zumo y se llevó a cabo un estudio experimental. Se realizó el procesamiento estadístico de los datos mediante el análisis de varianza. Después de la aplicación del zumo al grupo experimental por 7 días, se aplicó adrenalina, obteniéndose los promedios de glucosa de 107.7143 mg/mL y 116.1429 mg/mL a los 15 y 30 minutos respectivamente, en cambio en el grupo control donde no se aplicó zumo, los valores de glucemia fueron mayores. Estos resultados fueron estadísticamente significativos (p≤0.000). Concluye que el zumo de P. tripartita var. mollissima en R. rattus var. albinus inducidas con adrenalina tiene efecto antihiperglicemiante.(12) − Villena et al. En el 2018 realizaron el estudio titulado “Efecto hipoglucemiante del extracto etanólico del fruto de Passiflora edulis Sim (maracuyá) en ratas aloxanizadas” en la ciudad de Chimbote. Tuvieron como objetivo evaluar la eficacia del extracto etanólico del fruto de P. edulis Sims (maracuyá) sobre el nivel de glicemia en ratas aloxanizadas. Recolectaron el fruto en el valle de Chanchamayo, La Merced Junín-Perú; Evaluaron el efecto hipoglicemiante según el modelo de Kameswara Rao et al, 1999; trabajaron con 36 ratas albinas dividiendolas aleatoriamente en grupos de 6 ratas cada uno, donde el 1° grupo recibió Aloxano 130 mg/Kg (A) el 2° (A) + Insulina 4 UI/Kg, el 3° (A) + Glibenclamida 5 mg/Kg, y grupos 4°, 5° y 6° recibieron extracto a 50, 100 y 200 mg/kg respectivamente; midieron la glicemia (mg/dL) a tiempo 0, 48, 50, 52, 96 y 98 horas después de las administraciones. Evaluaron sus datos mediante técnicas multivariadas (p<0,05). El extracto 10 demostró efectos beneficiosos al evidenciarse un porcentaje de variación favorable con extracto 50 mg/kg (58.8%; p<0.014; 100 horas), 100 mg/kg (36.5%; p<0.086; 96 horas), y extracto a dosis de 200 mg/kg (41%; p<0.014; 100 horas). Concluyeron que el extracto del fruto de P. edulis Sims (maracuyá) disminuye los niveles de glicemia en ratas aloxanizadas. (13) − Villena et al. En 2018 realizaron el estudio “Efecto del extracto etanólico del fruto de Passiflora edulis Sims (maracuyá) en el nivel de glicemia de ratas normales” en la ciudad de Chimbote. Tuvieron como objetivo evaluar la eficacia del extracto etanólico del fruto de Passiflora edulis Sims “maracuyá” sobre el nivel de glicemia en ratas normales. Utilizaron 48 ratas, la experimentación tuvo dos fases: a) evaluaron el efecto del extracto en ratas normales, formándose dos grupos de 6 ratas, el 1° grupo recibió solución fisiológica 4 mL/kg y el 2° extracto a 250 mg/kg; b) evaluaron el efecto del extracto en ratas normales por el método del test de Tolerancia a la glucosa, según Du Vigneaud y Karr, 1925; Arroyo y Cisneros, 2012. Los seis grupos de ratas, donde recibieron: 1° glucosa 500 mg/kg vía oral (G), el 2° (G) + insulina 4 UI/kg, el 3° clorpropamida 25 mg/Kg, y el 4°, 5° y 6° grupo recibieron extracto vegetal en dosis de 50, 250 y 500 mg/kg respectivamente; extrajeron sangre para medir la glicemia (mg/dL) a tiempos de 0, 0.5, 1.0 y 2.0 horas después de las administraciones. Evaluaron sus datos mediante técnicas multivariadas (p<0,05). El extracto de P. edulis S. mantiene la glicemia en ratas normales; al aplicar el test de tolerancia oral a la glucosa, el extracto disminuyó la glicemia en mayor porcentaje (19,2%; p<0.0001) a dosis de 50 mg/kg. Concluyeron que el extracto del fruto de P. edulis Sims disminuye los niveles de glicemia en ratas normales.(14) − Dolores en 2018 realizó el estudio titulado “Efecto del consumo de una bebida formulada a base de pulpa de Physalis peruviana, Passiflora edulis y Ananas comosus, fibra de Avena sativa y Linum usitatissimum, endulzada con Stevia rebaudiana sobre el perfil lipídico y glicemia, de mujeres adultas con sobrepeso y obesidad” en la ciudad de Lima-Perú. El objetivo de esta investigación fue elaborar una bebida con la pulpa de Physalis peruviana (12 %), Passiflora edulis (9 %) y Ananas comosus (9 %), con fibra de Avena 11 sativa (12 %) y Linum usitatissimum (33 %), endulzada con Stevia rebaudiana (1%). El estudio del efecto de la bebida fue cuasi experimental en 10 mujeres voluntarias entre los 21 y 39 años de edad, ellas de acuerdo a su índice masa corporal presentaban obesidad, quienes bebieron con una frecuencia de cuatro veces por semana durante tres meses. Mostraron resultados estadísticamente significativos respecto a triglicéridos (p = 0,034) y glucosa (p = 0,002). Concluyo que la bebida tiene propiedad hipolipemiante en cuanto a triglicéridos y un efecto hipoglucemiante.(15) − García en el 2017 realizo en estudio titulado “Actividad antioxidante in vitro de Passiflora tripartita var. mollisima “puro puro” procedente de los distritos de Usquil, Charat y Huaranchal” en la ciudad de Trujillo-Perú. Utilizo una muestra de 9 puro puros; 3 de cada distrito. Evaluó la actividad antioxidante mediante el método DPPH, midiendo las absorbancias tanto el inicial, 10’, 20’, 30’; expresando los resultados en porcentajes. El mayor porcentaje de actividad antioxidante (60.94%) lo obtuvo la muestra del distrito de Usquil, seguida de Charat (59.12 %), finalmente de Huaranchal (65.42%). Al evaluar los datos de la actividad antioxidante de las distintas muestras, mediante la prueba paramétrica, ANOVA de un factor, se obtuvo un valor p de 0.001, por lo que concluyo que existe diferencia significativa entre los datos de actividad antioxidante que presenta Passiflora tripartita var. mollisima “puro puro” procedente de los distritos de Usquil, Charat y Huaranchal.(16) 12 2.2 Bases Teóricas 2.2.1 Diabetes Mellitus La diabetes es una enfermedad crónica que se presenta cuando el páncreas no produce suficiente o no puede usar la insulina eficazmente. La insulina es una hormona que permite a la glucosa de los alimentos que consumimos entre en las células del cuerpo, para convertirla en energía. Una persona con diabetes no absorbe adecuadamente la glucosa, lo cual con el paso del tiempo daña los tejidos del cuerpo, conduce a una discapacidad y a complicaciones de salud que pueden llegar a ser mortales.(17) a) Clasificación de la Diabetes Mellitus Se ha propuesto un modelo de clasificación centrada en las células β, donde se reconoce la alteración de la célula β como el defecto primario de la Diabetes Mellitus y se reconoce interacción de la genética, resistencia a la insulina, factores ambientales y la inflamación/sistema inmunológico sobre la función y la masa de las células β:(18) − Diabetes Mellitus Tipo 1 Conocida como diabetes juvenil o dependiente de insulina, resulta de la destrucción autoinmunitaria de las células β del páncreas que lleva a la disminución de insulina endógena y por tanto a la dependencia absoluta de la insulina exógena para regular los valores de glucosa en la sangre.(19) Se desconocen los mecanismos moleculares precisos que inducen el inicio de la enfermedad, aunque se considera que es el efecto de complejas interacciones entre la predisposición genética, el sistema inmunológico y los factores ambientales.(19) 13 Es caracterizada por una destrucción de las células beta pancreáticas, deficiencia absoluta de insulina, tendencia a la cetoacidosis y necesidad de tratamiento con insulina para vivir (insulinodependientes).(19) − Diabetes Mellitus Tipo 2 La forma no dependiente de insulina es un trastorno metabólico crónico causado por la combinación del deterioro progresivo de la secreción de insulina por las células β con la resistencia de los tejidos periféricos a la insulina, en particular hígado, músculo y tejido adiposo. Los órganos no tienen la capacidad para incorporar la glucosa de la sangre y precipitan un aumento de la glucogénesis y reabsorción incrementada de la glucosa por el riñón. La hiperglucemia resultante (≥ 126 mg/dl en ayuno), en conjunto con la dislipidemia, hipertensión e inflamación, causa retinopatía, nefropatía, neuropatía, infarto al miocardio, enfermedad cerebral vascular. La DM2 es una enfermedad poligénica y con una etiología multifactorial.(19) N Figura Nº1: Diabetes tipo 2.(20) 14 − Diabetes Gestacional Se manifiesta tarde en el embarazo, alrededor de la semana 24. producida debido a que la acción de la insulina es bloqueada, probablemente por las hormonas producidas por la placenta, provocando resistencia a la insulina.(20) Dado que la diabetes gestacional normalmente se desarrolla tarde en el embarazo, el feto ya está bien formado, pero sigue creciendo. Por tanto, el riesgo inmediato para el bebé no es tan grave como en el caso de que la madre tenga diabetes tipo 1 o diabetes tipo 2 antes del embarazo. Sin embargo, la diabetes gestacional no controlada puede tener graves consecuencias, tanto para la madre como para el bebé. Las mujeres con diabetes gestacional tienen que vigilar y controlar sus niveles de glucosa en sangre para reducir al mínimo los riesgos para el bebé.(20) b) Causas de la Diabetes Mellitus La causa de la diabetes es una alteración en la producción o el funcionamiento de la insulina, hormona fabricada por el páncreas, que funciona como una llave facilitando el pasaje de la glucosa desde la sangre a los órganos y tejidos.(20) Existe tres tipos de diabetes que son los más conocidos; las causas y los factores de riesgo son diferentes dependiendo de cada tipo: − Diabetes tipo 1: es diagnosticada con mayor frecuencia en niños y adolescentes; va ser necesario inyecciones diarias de insulina. Se desconoce con exactitud la causa de aparición de esta enfermedad .(20) 15 − Diabetes tipo 2: es la más común, principalmente se presenta enm la edad adulta; pero debido a las altas tasas de obesidad también se está diagnosticando en adolescentes y jóvenes. muchas que padecen de esta enfermedad no son diagnosticadas a tiempo, sino después de aparecer con grabes complicaciones en su salud.(20) − Diabetes gestacional: durante el embarazo se presenta altas concentraciones de azúcar en la sangre en la mujer que no tiene diabetes.(20) c) Síntomas de Diabetes Mellitus Existen síntomas principales en la diabetes como cansancio o somnolencia, polidipsia, poliuria, reducción de la agudeza visual y pérdida de peso.(21) En la diabetes tipo 1 pueden desarrollarse síntomas rápidamente, en cuestión de días o semanas. Puede provocar debilidad cuando se elevan los niveles de glucosa en la sangre (hiperglicemia), puede suceder si no se ha administrado la insulina; pero también se pueden exceder en la produciéndose un ataque de hipoglucemia y puede notar temblor, desfallecimiento y sudoración.(21) Los síntomas de la diabetes tipo 2 se desarrollan a lo largo de varias semanas, meses e incluso años; deben de diagnosticarse a tiempo y llevar un tratamiento para controlar sus niveles de glucosa en sangre y evitar complicaciones a futuro.(21) 16 - Diferencias entre la Diabetes tipo 1 y tipo 2. Aunque tanto la diabetes tipo 1 y tipo 2 se caracterizan por hiperglucemia presentan diferentes signos y síntomas.(22) Tabla 1: Diferencias entre la Diabetes tipo 1 y tipo 2.(22) Diabetes Tipo 1 Diabetes Tipo 2 Inicio de los síntomas Rápido Gradual Edad de aparición Antes de los 30 Después de los 30 Duración de los Puede diagnosticarse en síntomas desde su Menos de 2 días años aparición Obesa, aumento del Forma corporal Delgada perímetro de la cintura Normalmente aumento, Cambio de peso Adelgazamiento igual o leve perdida Cetonuria Positiva intensa Negativa normalmente Energía Debilidad y cansancio Debilidad y cansancio Alteraciones cutáneas No Piel seca y pruriginosa Normalmente mala Heridas No en el diagnóstico cicatrización > 300 con cetonuria > 600, cetonuria intensa, gasometría con negativa y osmolaridad Valores analíticos índices de acidosis y elevada por encima de osmolaridad < de 320 320. No acidosis 17 2.2.2 Niveles de Glucosa Todos tenemos algo de glucosa en la sangre. En las personas que no tienen diabetes, el nivel normal es de 70 a 120. La glucosa en la sangre se eleva después de comer, pero vuelve a un nivel normal después de 1 ó 2 horas.(23) Tabla 2: Niveles de glucosa.(23) Niveles recomendados de glucosa en la sangre para la mayoría de las personas con diabetes Cuando Niveles recomendados Antes de las comidas de 70 a 130 1 a 2 horas después del comienzo de una comida Menor de 180 − Intolerancia a la Glucosa Es una forma de prediabetes en la que el individuo tiene valores elevados de glucosa en sangre, se caracteriza por una respuesta anormal a una sobrecarga de glucosa suministrada por vía oral.(24) − Glucemia de ayuno alterada Es caracteriza por el hallazgo de una glucemia de ayuno entre 100 y 125mg/dL, se sugiere realizar una prueba de sobrecarga de glucosa oral, para la clasificación definitiva.(24) − Entrada de la glucosa a las células Para que la glucosa ingresa a la célula necesita de cuatro pasos: primero, unión al transportador en la cara externa de la membrana; segundo, el 18 transportador cambia de conformación, la glucosa y su sitio de unión quedan localizados en la cara interna de la membrana; tercero, el transportador libera la glucosa al citoplasma; cuarto, el transportador libre cambia nuevamente de conformación, expone el sitio de unión a la glucosa en la cara externa y retorna a su estado inicial.(25) Figura N°2: Ingreso de glucosa a la célula.(25) La glucosa al ingresar a la célula se fosforila para formar glucosa 6-fosfato, las enzimas que catalizan las fosforilaciones reciben el nombre de cinasas. La fosforilación retiene glucosa en las células de forma que pueda salir. Los hepatocitos, las células de los túbulos renales y las células epiteliales intestinales tienen la enzima necesaria (fosfatasa) para separar el grupo fosfato, lo cual permite a la glucosa salir de la célula hacia la circulación sanguínea.(25) − Catabolismo de la glucosa. La glucólisis, formación de acetil coenzima A, ciclo de Krebs, transporte electrónico; comprenden la oxidación de la glucosa que recibe el nombre de respiración celular. En la glucolisis se libera dos moléculas de ATP por cada glucosa utilizada y no requiere oxígeno, es una forma de sintetizar ATP de forma anaeróbica (sin oxígeno).(26) 19 Sin embargo, el ciclo de Krebs y a la cadena de transporte electrónico, requieren oxígeno y que proporcionan hasta 34 o 36 molécula de ATP por molécula de glucosa. Estas reacciones constituyen la respiración celular aeróbica.(26) − Glucolisis Se trata de la ruta metabólica mejor conocida, que desempeña un papel clave en el metabolismo energético; consiste en una secuencia de 10 reacciones enzimáticas que catalizan la transformación de una molécula de glucosa a dos de piruvato, con la producción de dos moles de ATP y dos de NADH por mol de glucosa. Sirve en su función principal para preparar la glucosa y otros carbohidratos para su posterior degradación oxidativa.(27) 2.2.3 Páncreas El páncreas es un órgano que desempeña un papel importante en la digestión de la comida; también produce insulina, la principal hormona del cuerpo encargada de regular la cantidad de glucosa existente en la sangre. Mide unos 15 centímetros y está localizado detrás del estómago en la parte izquierda del cuerpo. (28) − Funciones del páncreas El páncreas es el encargado de producir enzimas que son esenciales para el proceso de digestión de los alimentos; como la amilasa que se encarga de la digestión de los carbohidratos, la tripsina de las proteínas y la lipasa de las grasas. (28) Gracias a la producción de insulina, mantiene en control los niveles de glucosa en la sangre y que en su ausencia aparece la diabetes.(28) 20 − Complicaciones La pancreatitis puede provocar que el páncreas sea más vulnerable a bacterias, seudoquiste, insuficiencia renal, destrucción de las células que producen insulina; también desnutrición al no producir enzimas necesarias para descomponer y procesar los nutrientes, una inflamación a largo tiempo conlleva a desarrollar un cáncer .(29) 2.2.4 Tratamiento farmacológico para la diabetes La medicación en un adulto mayor plantea numerosos problemas, y muchas veces los fármacos interactúan de manera compleja. La morbilidad múltiple de los ancianos obliga a consumir más medicamentos que a las personas jóvenes, provocando mayor riesgo de sufrir reacciones nocivas. Como consecuencia de la confusión originada por el uso de varios fármacos, frecuentemente el adulto mayor no cumple los regímenes farmacológicos y su administración, a lo cual se agregan las fallas de memoria, la menor aguda visual y la disminución de las destrezas manuales.(30) − Plan de tratamiento. Las hiperglucemias sintomáticas graves se tienen que tratar adecuadamente con el objeto de controlar una serie de alteraciones en diferentes vías metabólicas:(30) ➢ Una movilización y oxidación de ácidos grasos. ➢ Catabolismo exagerado de proteínas que producen causar atrofia muscular. ➢ Una producción excesiva de glucosa endógena. ➢ El planteamiento de un programa terapéutico a largo plazo para un paciente con diabetes debe tener en cuenta los siguientes aspectos: ➢ Valoración de la expectativa de vida; ➢ La existencia de complicaciones propias de la diabetes. 21 ➢ El padecimiento de trastornos neuropsiquiátricos. ➢ La cooperación del paciente para comprender el programa terapéutico.(30) − Antidiabéticos orales Los antidiabéticos orales son fármacos indicados en el tratamiento de la diabetes mellitus, dirigidos básicamente a disminuir la absorción de los hidratos de carbono (inhibidores de la alfaglucosidasas) , vencer la resistencia a la insulina (biguanidas y tiazolidindionas), disminuir la producción hepática de glucosa (biguanidas y tiazolidindionas) o incrementar la secreción de insulina (sulfonilureas y meglitinidas).(31) − Clasificación ➢ Biguanidas (metformina). Actúa como normoglucemiante Aumentando la sensibilidad de los tejidos periféricos a la insulina.(31) ➢ Sulfonilureas (clorpropamida, glibenclamida). Reducen la glucemia aumentando la secreción de insulina.(31) ➢ Meglitinidas (repaglinida, nateglinida). Estimulan la secreción de insulina.(31) ➢ Inhibidores de Α-Glucosidasa (acarbosa). Disminuye los niveles de glucosa posprandial, reduciendo el índice de digestión de los polisacáridos en el intestino delgado proximal,.(31) ➢ Tiazolidinediona (pioglitazona). Hace que el músculo, la grasa y el hígado sea más sensible a la insulina.(31) 22 ➢ Agonistas de amilina (pramlintida). Retarda el vaciamiento gástrico, inhibe la producción de glucagón de una manera dependiente de la glucosa.(31) A. Glibenclamida Figura N°3: Estructura Química de la Glibenclamida.(32) − Mecanismo de acción Presenta efecto hipoglucemiante al estimular la liberación de insulina en las células beta; tanto en ayunas o tras la ingesta de glucosa.(32) en las células beta del páncreas cierra los canales de potasio dependiente de ATP, produciendo una despolarización de la membrana activando la entrada de calcio la cual estimula la secreción de insulina .(32) − Farmacocinética ➢ Absorción: Por vía oral es rápida y casi completa (> 95%). Estudios muestran absorción significativa dentro de la primera hora de su administración.(32) 23 ➢ Distribución: Se une a la albúmina plasmática (99%).(32) ➢ Metabolismo: Lo realiza en el hígado a 2 metabolitos, el principal es el derivado 4- trans-hidroxi y el segundo es el derivado 3-cis-hidroxi. No contribuyen a la acción hipoglucemiante ya que son débilmente activos. La insuficiencia hepática disminuye el metabolismo y excreción de glibenclamida.(32) ➢ Excreción: Lo hace en forma de metabolitos por la vía biliar (50%) y por la orina (50%). La eliminación se completa en 45 a 72 horas.(32) B. Insulina Es una hormona polipeptídica que es secretada por las células β de los islotes pancreáticos. Se sintetiza como la preproinsulina. Se encarga de regular los niveles de glucosa en la sangre (33) − Tipos de insulina ➢ Acción rápida (insulinas análogas lispro y aspar). Deben de ser tomadas dentro de 15 minutos después de las comidas, el máximo es alcanzado entre 30 a 90 minutos, y tiene una duración de acción de 3 a 4 horas. ➢ Corta acción (insulina regular). Tiene un comienzo de acción de 30 a 60 minutos, un máximo de 2 a 3 horas y una duración de acción de 3 a 6 horas. 24 ➢ Acción intermedia (MPH y Lente). Comienza a trabajar en 90 minutos a 6 horas, máximo en 4 a 14 horas, y tiene una acción de duración hasta 24 horas. ➢ Larga duración (insulina Ultralente y garglina). Comienza a trabajar en 6 a 14 horas y usualmente es efectiva para 24 a 36 horas.(34) 2.2.5 Aspectos botánicos de Passiflora tripartita “Tumbo” A. Clasificación taxonómica Identificado por Mag. Asuncion A. Cano Echevarria, según el sistema de clasificación de Arthur Cronquist (1988). La constancia N°225- USM-2019, se adjunta en los anexos (fig. N° 7) Reino: Plantae. División: Magnoliophyta. Clase: Magnoliopsida. Orden: Malpighiales. Familia: Passifloraceae. Género: Passiflora. Sección: Tacsonia. Especie: Passiflora tripartita. Nombre común: Tumbo. B. Descripción botánica − Tallos. Presenta tallos semi-leñosos, de forma cilíndrica, hábito trepador con zarcillos para apoyarse sobre estructuras de soporte. 25 Presenta un crecimiento indeterminado. El tallo contribuye con los fotosintetizados a las partes distales que son las de mejor crecimiento.(35) − Hojas. Sus hojas presentan limbo elíptico del tipo palminervada, son simples con un limbo para un peciolo. Pueden ser polimórficas, pubescentes o lisas, con textura desde membranosas hasta coriácea, variando su tamaño desde pequeñas hasta grandes.(35) − Raíces. Se caracteriza por poseer una raíz primaria muy ramificada, mientras que las secundarias pueden extenderse sobre la hilera del cultivo, localizándose la mayoría entre los primero 40-60 cm de profundidad de suelo.(35) − Flores. Son de tamaño grande, sin fragancias, pero de colores vistosos, llamativos para la polinización. El cáliz tiene 5 sépalos. La simetría de la flor es radial con dos anteras conformadas por sacos polínicos. Los estambres se insertan cercanos a la corola. Presenta ovario ínfero de inflorescencia axilar. Los sépalos y pétalos se abren en forma de copa abierta.(35) − Fruto. El fruto es oblongo a redondo. La epidermis es lisa de coloración verde a amarilla. Luego de la fecundación, la semilla es rodeada de una sustancia llamada arilo de color anaranjado.(35) C. Distribución geográfica Si bien el tumbo serrano se distribuye a lo largo de los Andes desde el norte de Chile hasta Colombia, en zonas con temperaturas promedio entre los 12º C y 16º C, se sabe que su centro de origen está en los Andes peruanos, a alturas entre los 2500 y 3000 m.s.n.m. de preferencia en la sierra. Ancash, Junín, Moquegua, Huancavelica.(36) 26 D. Uso tradicional − Una sola flor para una taza de agua hirviendo es utilizada en la noche para combatir el insomnio.(37) − El fruto del tumbo es comestible, es utilizado mucho en refrescos, medicinal contra los cálculos renales, elimina los parásitos, disminuye los malestares urinarios y estomacales.(37) 2.2.6 Método del test Hipoglucemiante Actividad hipoglucemiante según Villena et al (2017).(38) Método: inducción a hiperglucemia con aloxano Fundamento: consiste en que a los animales de experimentación se les inducirá a hiperglucemia con aloxano para luego darles un tratamiento con el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo” por diez días, haciendo un control diario de su glucosa en sangre por medio de un glucómetro digital y tiras reactivas, así se verá durante los días del tratamiento la disminución de los niveles de glucosa en sangre. 27 2.3 Definición de términos básicos − Hipoglucemiantes: Son un tipo de medicamentos empleados para disminuir los niveles de azúcar en la sangre, principalmente en los casos de resistencia a la insulina y la diabetes.(39) − Extracto hidroalcohólico: Se obtienen por maceración o percolación utilizando como solvente alcohol y agua, seguida de la eliminación de dichos solventes por un procedimiento físico. Presentan sedimento, color y aroma característicos de la planta de la cual se obtienen.(40) − Passiflora tripartita “Tumbo”: Es una planta trepadora tipo enredadera, produce frutos de forma elipsoidal. Se propagan por semillas y suelen crecer en los jardines y cultivos. Se sabe que su centro de origen está en los Andes peruanos.(41) − Aloxano: Sustancia del producto de la oxidación del ácido úrico por el ácido nítrico; su fórmula química es CNHO-COCOCNHO, desdoblándose, a su vez, por hidrólisis, en úrea y ácido mesoxálico.(42) − Glucemia: Es el azúcar (glucosa) contenido en la sangre.(43) − Hipoglucemia: Conocida como bajo nivel de glucosa o de azúcar en la sangre, ocurre cuando el nivel de glucosa en la sangre cae por debajo de lo normal.(44) 28 − Hiperglicemia: Es cuando la concentración de glucosa en la sangre es superior a la normal, siendo >140mg/dl.(45) − Glucosa: Carbohidrato clasificado dentro del monosacárido, fuente principal de energía para los seres vivos.(46) − Insulina: Hormona sintetizada por el páncreas que controlar los niveles de glucosa en sangre.(47) 29 2.4 Hipótesis 2.4.1 Hipótesis General − El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” presenta efecto hipoglucemiante en ratas diabéticas inducidas por aloxano. 2.4.2 Hipótesis Específicos − Los metabolitos secundarios presentes en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” tienen efecto hipoglucemiante. − La toxicidad aguda CL50 del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en larvas de Artemias salinas L presenta efectos letales. − El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 100mg/kg tiene efecto hipoglucemiantes en ratas diabéticas inducidas por aloxano. − El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 200mg/kg tiene efecto hipoglucemiantes en ratas diabéticas inducidas por aloxano. − El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 300mg/kg tiene efecto hipoglucemiantes en ratas diabéticas inducidas por aloxano. 30 3. METODOLOGÍA 3.1 Tipo de investigación − Por el control de los factores de estudio: Experimental: Porque los estudios en los que el equipo investigador asigna el factor de estudio y lo controla de forma deliberada para la realización de la investigación, según un plan preestablecido. De este modo se manipulara los animales de experimentación, primero induciendo a diabetes con aloxano y luego dándoles un tratamiento con el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”.(48) (49) − Según la finalidad: Analítico: Estudios que establecen relación causal entre las variables, por ello se evaluara el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo” en ratas diabéticas inducidas por aloxano. (48)(49) − Por la secuencia de estudio: Longitudinal: Estudios en los que se recoge los datos en un periodo de tiempo, se examinara el efecto hipoglucemiante en 10 días de tratamiento con el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo” en ratas diabéticas inducidas por aloxano .(48)(49) − Inicio del estudio en relación a los hechos: Prospectivo: Estudios cuyo inicio es anterior a los hechos estudiados, de tal forma que los datos se recogen a medida que van sucediendo. En este caso los datos serán recogidos mediante un test hipoglucemiante. (48)(49) 31 3.2 Nivel de investigación El presente trabajo de investigación será de nivel explicativo, Conforme lo referido por Hernández, Fernández y Baptista (2010), puesto que se busca hallar una relación de explicación o casualidad entre las variables de estudio del efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en ratas diabéticas inducidas por aloxano.(48) 3.3 Diseño de la Investigación Se formó siete grupos conformados por 6 ratas machos rattus novergicus var. Holtzman, los que fueron sometidos a los siguientes tratamientos: Grupo I (Grupo blanco): Solo se les administro por vía oral suero fisiológico 2mL/kg. Grupo II (Grupo control negativo): A las ratas machos rattus novergicus var. Holtzman se les indujo a diabetes con Aloxano 130mg/kg vía intraperitoneal y de las cuales no recibirán tratamiento. Grupo III (control positivo): A las ratas machos rattus novergicus var. Holtzman se les indujo a diabetes con Aloxano 130mg/kg vía intraperitoneal, para luego administrar durante 10 días de tratamiento Glibenclamida 5mg/kg vía oral. Grupo IV (control positivo): A las ratas machos rattus novergicus var. Holtzman se les indujo a diabetes con Aloxano 130mg/kg vía intraperitoneal, para luego administrar durante 10 días tratamiento Insulina 4UI/kg vía intraperitoneal. Grupo V (grupo problema): A las ratas machos rattus novergicus var. Holtzman se les indujo a diabetes con Aloxano 130mg/kg vía intraperitoneal, para luego administrar durante 10 días de tratamiento extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo” a 100mg/kg vía oral. Grupo VI (grupo problema): A las ratas machos rattus novergicus var. Holtzman se les indujo a diabetes con Aloxano 130mg/kg vía intraperitoneal, para luego 32 administrar durante 10 días de tratamiento extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo” a 200mg/kg vía oral. Grupo VII (grupo problema): A las ratas machos rattus novergicus var. Holtzman se les indujo a diabetes con Aloxano 130mg/kg vía intraperitoneal, para luego administrar durante 10 días de tratamiento extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo” a 300mg/kg vía oral. Tabla N° 3. Diseño de investigación modificado según: según Villena et al.(13) UNIDAD DIAS DE VIA DE DOSIS GRUPOS BIOLO PESO (g) TRATAMIEN ADMINISTRA (mg/kg) GICA TO CION Grupo Blanco: 6 200 - 400g 2mL/kg 10 V.O Suero Fisiológico Grupo Control Negativo: 6 200 - 400g 130mg/kg 10 I.P Aloxano Grupo Control Positivo: 6 200 - 400g 5mg/kg 10 V.O Glibenclamida Control Positivo: 6 200 - 400g 4UI/kg 10 I.P Insulina Grupo Problema: 6 200 - 400g 100mg/kg 10 V.O Extracto Hidroalcohólico Grupo Problema: 6 200 - 400g 200mg/kg 10 V.O Extracto Hidroalcohólico Grupo Problema: 6 200 - 400g 300mg/kg 10 V.O Extracto Hidroalcohólico 3.4. Área de Estudio − Laboratorio de la Facultad de la Ciencias de la Salud en la Universidad María Auxiliadora: Se realizó el análisis cualitativo de solubilidad y marcha fitoquímica, evaluación de la toxicidad aguda y la investigación del efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” 33 3.5. Población y Muestra: Criterios de Inclusión y Exclusión 3.5.1. Población: - Especie animal: ratas machos rattus novergicus var. Holtzman provenientes del instituto nacional de salud. - Especie vegetal: las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, oriundas del distrito de independencia, Huaraz, departamento de Ancash, Perú. 3.5.2. Muestra: - Especia animal: 42 ratas machos rattus novergicus var. Holtzman, 6 animales por cada grupo, un total de 7 grupos. - Especia vegetal: se utilizará 5kg de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo. 3.5.3. Criterios de Inclusión - Rattus novergicus var. Holtzman sin ninguna patología. - Ratas machos con un peso promedio entre 200-400g. - Laboratorio a una temperatura menor de 25 °C y con una humedad relativa ambiental entre 40 y 70%. 3.5.4. Criterios de Exclusión - Animales de experimentación (ratas) que hayan sido utilizadas en otras pruebas. - Ratas hembras que se encuentran preñadas. - Presentar algún tipo de laceración y/o herida en la piel. - Que se encuentren enfermas. 34 3.6. Variables y Operacionalización de las Variables - Variable independiente: Extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. ESCALA DE VARIABLE DIMENSIONES INDICADORES MEDICION Extracto concentración del extracto Administración oral del hidroalcohólico hidroalcohólico de las extracto hidroalcohólico de las hojas de hojas de Passiflora las hojas de Passiflora Cuantitativas Passiflora tripartita “Tumbo” a tripartita “Tumbo” a continuas tripartita 100mg/kg, 200mg/kg y 100mg/kg, 200mg/kg y “Tumbo” 300mg/kg 300mg/kg - Variable dependiente: Efecto hipoglucemiante. ESCALA DE VARIABLE DIMENSIONES INDICADORES MEDICION Normal: 70 - 110 mg/dL Cuantitativas Efecto Nivel de glucosa en Prediabetes: 110 – 125 continuas hipoglucemiante sangre (mg/dL) mg/dL (Intervalo) Diabéticas: ≥126mg/dL 3.7 Instrumento de recolección de datos Tabla 4. Instrumento de recolección de datos. TÉCNICA INSTRUMENTO Observación Fichas de observación Escala de mediciones Test Hipoglucemiante Experimental Glucómetro digital Los formatos de los instrumentos de recolección de datos están adjuntados en los anexos. 35 3.8 Validación del instrumento de recolección de datos La validación del instrumento de recolección de datos se validó por docentes de la especialidad temático, estadístico y metodólogo (Los instrumentos serán registrados en el ANEXO). 3.9 Procedimiento para la recolección de datos I. Recolección de la muestra. Se recolecto 5kg de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. En el distrito de independencia, Huaraz, departamento de Ancash, Perú a 5100 m.s.n.m. (La recolección de la muestra será registrado en el ANEXOS). II. Preparación del extracto hidroalcohólico de Passiflora tripartita “Tumbo”. Las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, se procedió a lavarlas con agua a chorro y enjuagadas con agua destilada para eliminar impurezas; fueron separadas unas de otras, durante el secado se mantuvo a temperatura ambiente por 1 semana, en un lugar aireado, cubierto y seco. Completando el secado las hojas fueron pulverizadas en un molino hasta obtener una muestra homogénea. Se colocó en un frasco ámbar 575g de polvo seco y se adiciono agua y alcohol al 70% en una relación 1:3. Se dejó reposar por 10 días con agitación contante, se filtró y se midió el volumen obtenido, para después llevarlo a la estufa a 38°C por 72 horas hasta obtener el extracto seco y poder trabajar los análisis correspondientes. 36 RECOLECCIÓN Y Hojas de Passiflora LAVADO tripartita “Tumbo” PESADO SECADO DE L A MUESTRA VEGETAL Temperatura ambiente MOLIENDA Molino PREPARACIÓN DEL x 10 días (maceración) EXTRACTO MACERADO FILTRAR SECADO En estufa a 38° EXTRACTO SECO Gráfico N° 1. Flujograma del estudio de la obtención del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. 37 MATERIAL SECADO Temperatura Ambiente VEGETAL PESADO Total de hojas secas MOLIDO Total de hojas PESADO Pulverizadas Volumen MACERADO Equivalente FILTRADO SECADO OBTENCIÓN EXTRACTO SECO Gráfico N° 2. Flujograma del estudio para obtener el porcentaje del rendimiento del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. % Rendimiento del extracto total de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. Gramos de extracto (extracto seco) = x 100 Material vegetal seco (hojas secas pulverizadas 172g = x100 575g =29% del tratamiento del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. 38 III. Preparación de las concentraciones del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. (Fig. N°27). Obtenido el extracto seco de Passiflora tripartita “Tumbo”, este se pesó y disolvió en el solvente soluble. Fórmula del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita Cantidad “Tumbo” a 100 mg/kg Extracto seco 220 mg Agua Destilada c.s.p 50 ml Fórmula del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita Cantidad “Tumbo” a 200 mg/kg Extracto seco 400 mg Agua Destilada c.s.p 50 ml Fórmula del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita Cantidad “Tumbo” a 300 mg/kg Extracto seco 800 mg Agua Destilada c.s.p 50 ml IV. Prueba de solubilidad En 6 tubos de ensayo se colocó (20mg) del extracto hidroalcohólico y se agregó cada uno de los tubos de ensayo 1 mL del solvente, se agito y se observó los resultados. Solventes: agua (H2O), etanol (EtOH), metanol (MeOH), acetona (Me2CO), n - Hexano (Hex) y éter etílico (Et2O) .(50) 39 V. Análisis fitoquímico Se usó el método de Lassny Ochoa Y Andrea Sarmiento (2018).(51) a. Identificación de Flavonoides: mediante reacciones de coloración y precipitación. (51) − Reacción de Shinoda. A una solución del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” se adiciono 3 virutas de magnesio metálico y IV gotas de HCl Q.P.(51) − Reacción con H2SO4. A 10mg del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” se adiciono 2mL de H2SO4. (51) b. Identificación de alcaloides: mediante reacciones de coloración y precipitación. − Reacción con Dragendorff. A una solución del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” se adiciono V gotas de Rvo. Dragendorf. (51) − Reacción con Wagner. A una solución del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” se adiciono V gotas de Rvo. Wagner.(51) − Reacción con Mayer. A una solución del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” se adiciono V gotas de Rvo. Mayer.(51) 40 c. Identificación de compuestos fenólicos − Reacción de FeCl3. A una solución de del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” se adiciono V gotas FeCl3.(51) d. Identificación de taninos: mediante reacciones de coloración y precipitación. − Reactivo gelatina. Colocar 1mL extracto hidroalcohólico de Passiflora tripartita “Tumbo” + II gotas de Rvo. Gelatina.(51) − Reacción de FeCl3. A una solución de del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” se adiciono gotas de solución FeCl3.(51) e. Identificación de saponinas: Se utilizó el método de espuma. Se diluyo el extracto 9:1. Posteriormente se tomó 1mL del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, más 9 mL de H2O destilada, se colocó en un tubo de ensayo con tapa (13 x 100 mm). Se agito vigorosamente durante 30 segundos. Luego se dejó reposar por 15 min.(51) 41 VI. Procedimiento para determinar la concentración efectiva media CL50 en Artemia Salina L. (52) a) Obtención de las larvas. − Se obtuvo 8g de huevos de Artemia salina en un acuario. − Se pesó 40g de sal marina y se disolvió en 1L de agua destilada para adicionar la solución a un artemiero. − Se pesó 50mg de huevos de Artemia salina y de procedió a verter al artemiero que contenía agua y sal marina. − Fueron incubados, con calor generado por una lámpara y oxigeno por motor para lograr la eclosión. b) Ensayo de letalidad. − Se preparó una solución 20mg de extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, se disolvió en 50mL de agua destilada. − El ensayo consistió en exponer durante 24 horas a temperatura ambiente y bajo régimen continuo de luz a grupos de Artemia salina a concentraciones de extracto hidroalcohòlico (1000, 500, 100, 50, 10, 5, 1 y 0µg/mL) en placas petri. Como control positivo se utilizó K2Cr₂O. − El ensayo se realizó por cuadruplicado, añadiendo a cada uno 5 mL de agua de mar, seguidamente se seleccionó 10 nauplios a cada placa petri, adicionando las diluciones correspondientes. − Al finalizar las 24 horas de exposición, se contó el número de larvas muertos y se calculó el porcentaje de mortalidad. Las larvas se consideraron muertas si no presentaron movimiento durante varios segundos. − El grado de toxicidad del extracto se definió en función del rango en que se encontraron los valores de CL50 de acuerdo con las categorías del método CYTED: extremadamente tóxico (1- 42 10µg/mL), altamente tóxico (10-100 µg/mL), moderadamente tóxico (100-500 µg/mL), ligeramente toxico (500 - 100µg/mL), prácticamente no toxico (1000 - 1500µg/mL). Seleccionar con una pipeta pasteur 10 nauplios Artemia Salina Eclosión 48 horas 1000 500 100 50 10 5 1 0 K2Cr₂O (µg/mL) Exposición 24 Contabilizar los nauplios muertos Determinar CL50 Gráfico N°3. Esquema para la determinación de la CL50 en Artemia salina. 43 VII. Procedimiento experimental de ensayo de hiperglicemia inducida con aloxano en ratas. − Se utilizaron ratas machos rattus novergicus var. Holtzman con un peso de 200- 400 g. − Se aclimatizó por una semana en jaulas metálicas con viruta de madera; en condiciones estándares de iluminación y temperatura para eliminar el efecto del estrés, con alimento y agua. − Las ratas fueron sometidas a ayuno 24 horas antes del tratamiento, se pesaron a las 50 ratas, asimismo los niveles de glucosa fueron medidos usando un glucómetro digital marca (TRU METRIX). − A todos los animales de experimentación se les midió la glicemia basal en sangre del ápice de la cola del animal desechando la primera gota y recibiendo la siguiente sobre la tira reactiva, para luego administrarles Aloxano 130mg/kg vía intraperitoneal. − Pasadas las 24 horas se midió la glicemia (los animales de experimentación que tengan glicemia ≥ 200 md/dL fueron tomadas en cuenta para nuestro estudio), y luego fueron codificados con marcadores en la cola del animal y se formó en 7grupos (conformados por 6 unidades cada grupo), de los cuales 6 grupos estaban inducidos con aloxano para administrar los tratamientos farmacológicos y 1 grupo sin inducción. − Se les volvió a medir la glucosa en ayunas para luego administrar Glibenclamida 5mg/kg, Insulina 4UI y extractos hidroalcohólicos (100mg/kg, 200 mg/kg y 300mg/kg) de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” por 10 días de tratamiento. − Los niveles de glucosa en sangre fueron medidos: El primer día a las 0, 2, 4, 6 y 8 horas de haber recibido el tratamiento, los 9 días restantes se midió a las 0, 2 y 4 horas. 44 Extracto hidroalcohólico de Passiflora tripartita “Tumbo” Prueba de Estudio Estudio CL50 Estudio solubilidad fitoquímico farmacológico - Agua destilada - Se utilizará Determinar el - Etanol - Flavonoides el método efecto - Metanol • Shinoda de hipoglucemiante (MeOH) • H2SO4 letalidad del extracto - Acetona hidroalcohólico (Me2CO) - Alcaloides en Artemia salina de Passiflora - n - Hexano • Mayer tripartita (Hex) • Wagner “Tumbo” en - Éter etílico • Dragendorff ratas diabéticas (Et2O)) - Compuestos inducidas por fenólicos aloxano • FeCl3 - Taninos • Gelatina • FeCl3 sol 1 % - Saponinas • Método de espuma Gráfico N° 4. Esquema de la prueba de solubilidad, marcha fitoquímica, estudio de CL50 y farmacológico del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. 45 3.10. Componente ético de la investigación El trabajo se ajustó al código de bioética y bioseguridad. Esto con el compromiso para así reducir el estrés y el dolor de nuestros animales de experimentación. Esto se consiguió mediante procedimientos menos invasivos, con la menor duración posible o mejorando el acondicionamiento general de nuestros animales, las disposiciones que velan por el cuidado, manejo y utilización de animales han sido importantes para el desarrollo de la medicina moderna con fines de investigación científicos. En este estudio del efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en ratas diabéticas inducidas por aloxano, cumplió con el protocolo de bioética y seguridad en experimentación animal de la facultad de la Universidad María auxiliadora. Cumpliendo, colaborando, verificando y aportando un conocimiento a la sociedad. Al terminar el estudio experimental se utilizó el método del sacrificio con una persona capacitada que limito el dolor, el sufrimiento y la angustia de los animales de experimentación según el protocolo de Aguilar A, Coyo N y Giménez A.(53) 3.11. Procesamiento y análisis de datos Para la generación de la base de datos se implementó la hoja de cálculo Excel en la que se obtendrá la distribución de frecuencias y porcentajes del test hipoglucemiante en 7 grupos de ratas experimentales. Así mismo se analizará los resultados con el software para análisis estadístico SPSS 25. Procedimiento que se seguirá: (a) presentar los descriptivos del experimento, (b) realizar el análisis de la varianza (ANOVA) con un factor inter-sujetos, para muestras independientes, (c) comparaciones múltiples, (d) análisis de subconjuntos (Tukey). 46 4. RESULTADOS 4.1 Prueba de Solubilidad Prueba de solubilidad de la muestra del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, mostro los siguientes resultados. Tabla N° 5. Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. Reactivo Reacción Resultado Agua 1ml de Agua + 30 mg extracto hidroalcohólico de + (H2O) Passiflora tripartita “Tumbo”. Etanol 1ml de Etanol + 30mg extracto hidroalcohólico de + (EtOH) Passiflora tripartita “Tumbo”. Metanol 1ml de Metanol + 30mg extracto hidroalcohólico de + (MeOH) Passiflora tripartita “Tumbo”. Acetona 1ml de Acetona + 30mg extracto hidroalcohólico de - (Me2CO) Passiflora tripartita “Tumbo”. Hexano 1ml de Hexano +30 mg extracto hidroalcohólico de - (Hex) Passiflora tripartita “Tumbo”. Éter etílico 1ml de Éter etílico + 30mg extracto hidroalcohólico de - (Et2O) Passiflora tripartita “Tumbo”. Leyenda: (+) Soluble, (-) Insoluble Fuente: Realizado por el investigador. 47 4.2 Análisis fitoquímico de metabolitos secundarios Tabla N°6: Análisis fitoquímico del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. Metabolitos Reactivo Reacción Observación Resultados secundarios 1 mL de extracto coloración Shinoda hidroalcohòlico + (virutas anaranjado + de Mg metálico +V gotas presencia de de HCl flavonas Flavonoides H2SO 10mg de extracto color 4 + hidroalcohòlico + 2mL de anaranjado a H2SO4 concentrado guinda 1mL de extracto precipitado Draguendorff hidroalcohòlico + V gotas + naranja de Rvo de Draguendorff 1mL de extracto precipitado Alcaloides Mayer hidroalcohòlico + V gotas amarillo + de Rvo de Mayer limón claro 1mL de extracto precipitado Wagner hidroalcohòlico + V gotas + marrón de Rvo Wagner 1mL extracto precipitado o Compuestos FeCl3 hidroalcohólico + V gotas coloración + fenólicos FeCl3 azuladas- verdosas 1mL extracto Precipitado Gelatina hidroalcohólico + II gotas + blanco Rvo. Gelatina Taninos 1mL de extracto coloración FeCl3 hidroalcohólico + gotas de + verdosa solución de FeCl3 al 1% Precipitado Solvente 1 mL extracto en el borde Saponinas agua + hidroalcohólico superior destilada +9ml agua destilada espuma Leyenda: (+) Presencia, (-) Ausencia. Fuente: Realizado por el investigador. 48 4.3 Estudio de Letalidad CL50 Tabla 7. Estudio de letalidad CL50. REPETICIONES DEL EXPERIMENTO CONCENTRACIONES 1 2 3 4 T V M T V M T V M T V M Control (-) H2O mar 10 10 0 10 10 0 10 10 0 10 10 0 Control (+) K2Cr2O7 10 0 10 10 0 10 10 0 10 10 0 10 Extracto - 1000µg/mL 10 0 10 10 0 10 10 0 10 10 0 10 Extracto - 500 µg/mL 10 4 6 10 2 8 10 3 7 10 1 9 Extracto - 100µg/mL 10 9 1 10 10 0 10 9 1 10 10 0 Extracto - 50 µg/mL 10 10 0 10 9 1 10 9 1 10 9 1 Extracto - 10 µg/mL 10 10 0 10 9 1 10 9 1 10 10 0 Extracto - 5 µg/mL 10 10 0 10 10 0 10 9 1 10 9 1 Extracto - 1 µg/mL 10 10 0 10 10 0 10 10 0 10 10 0 Leyenda. T: Total V: Vivas M: Muertas Tabla 8. Análisis Probit del estudio de letalidad CL5O. Dosis (ug/mL) IC 95% CL50 519.612 209.922 - 1286.176 Mediante el análisis Probit nos muestra que se necesita una concentración de 519.612ug/mL para matar al 50% de nuestra población, con un intervalo de confianza del 95%. Según la escala de CYTED se encuentra en el rango de ligeramente toxico. Tabla N° 9. Escala de CYTED.(52) CL50 (µg/mL) GRADO DE TOXICIDAD 1-10 Extremadamente tóxico 10-100 Altamente tóxico 100-500 Moderadamente tóxico 500-1000 Ligeramente tóxico 1000-1500 Prácticamente no tóxico >1500 Relativamente inocuo 49 4.4 Estudio farmacológico por días. Tabla N°10. Análisis descriptivos. DÍA 1 DÍA 2 DÍA 3 DÍA 4 DÍA 5 DIA 6 DÍA 7 DÍA 8 DÍA 9 DÍA 10 GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Media DS Media DS Media DS Media DS Media DS Media DS Media DS Blanco 6 70,000 9,048 71,000 9,000 75,000 80,000 80,000 77,000 79,000 12,000 78,000 13,000 15,060 10,000 9,092 11,000 74,000 8,000 72,000 10,000 Aloxano 6 468,000 80,000 497,000 70,000 501,000 344,000 365,000 273,000 277,000 305,000 283,000 311,000 302,000 286,000 271,000 70,000 537,000 61,000 525,000 60,000 Glibenclamida 6 196,000 73,066 178,000 42,000 187,000 122,000 142,000 135,000 150,000 17000 139,000 16,071 19,000 12,000 14,000 44,000 139,000 36,000 162,000 39,000 Insulina 6 143,000 35,000 103,000 12,000 127,000 105,000 101,000 118,000 112,000 13,000 127,000 15,000 17,000 10,000 10,000 18,000 119,000 19,000 115,000 13,000 Extracto 100 mg/kg 6 361,000 137,000 450,000 102,000 454,000 455,000 447,000 364,000 346,000 174,017 321,000 178,000 185,000 76,000 65,000 93,000 439,000 84,000 462,000 80,000 Extracto 200 mg/kg 6 364,000 114,000 378.000 117,007 327,000 384,000 343,000 376,000 321,000 78,000 317,000 69,000 75,000 114,000 121,000 91,000 333,000 135,000 376,000 115,000 Extracto 300 mg/kg 6 270,000 89,000 167,000 37,091 161,000 130,000 134,000 143,000 133,000 18,000 137,000 20,000 16,000 19,000 14,000 33,000 128,000 18,000 146,000 17,000 Total 42 267,000 153,000 263,000 175,015 262,000 231,000 230,000 212,000 202,000 162,000 200,000 160,000 172,000 178,000 181,000 166,000 253,095 182,000 265,000 181,000 La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. Según la tabla N° 10: los valores de las medias en los 7 grupos durante 10 días de tratamiento, se evidencia desde el día 1 que la insulina tiene el valor más bajo con 143mg/dL, seguido de la glibenclamida 196mg/dL, luego extracto de 300mg/kg con 270mg/dL. Todo se mantiene constante hasta el día 8, donde en día 9 se evidencia para la insulina con el valor más bajo de 127mg/dL, luego el extracto de 300mg/kg con 133mg/dL seguido de la glibenclamida con 150mg/dL, que se mantiene así hasta el día 10. 50 Tabla N° 11. Análisis de varianza. ANOVA de un factor DÍA 1 DÍA 2 DÍA 3 DÍA 4 DÍA 5 DÍA 6 DÍA 7 DÍA 8 DÍA 9 DÍA 10 ANOVA de un factor p- p- p- p- p- p- p- p- p- p- Gl gl gl gl Gl gl gl gl gl gl valor valor valor valor valor valor valor valor valor valor Inter-grupos 6 0,000 6 0,000 6 0,000 6 0,000 6 0,000 6 0,000 6 0,000 6 0,001 6 0,005 6 0,012 Intra-grupos 35 35 35 35 35 35 35 35 35 35 Total 41 41 41 41 41 41 41 41 41 41 H0: No existe diferencia de los valores por lo menos en uno de los grupos. Hi: Existe diferencia de los valores por lo menos en uno de los grupos. En el cuadro de resultados del ANOVA de acuerdo aL valor de la significancia considerada desde el día 1 al día 10 se evidencia en todos los casos su valor es menor a 0,05 por lo tanto se acepta la hipótesis alterna que existe diferencia de los valores en al menos uno de los grupos. 51 Tabla N° 12. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey). comparaciones múltiples HSD de Tukey DÍA 1 DÍA 2 DÍA 3 DÍA 4 DÍA 5 DÍA 6 DÍA 7 DÍA 8 DÍA 9 DÍA 10 G G p- p- p- p- p- p- p- p- p-DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS p-valor valor valor valor valor valor valor valor valor valor a1 125,000 0,000 106,000 0,000 112,000 0,041 65,000 0,000 89,000 0,000 41,000 0,000 62,000 0,000 58,000 0,000 71,000 0,000 61,000 0,000 a2 -271,000 0,000 -319,000 0,000 -314,000 0,000 -397,000 0,000 -363,000 0,000 -222,000 0,030 -223,000 0,041 -138,000 0,000 -126,000 0,000 -143,000 0,000 a3 53,000 0,000 75,000 0,000 60,000 0,000 20.000 0,000 46,000 0,000 17,000 0,000 41,000 0,000 16,000 0,000 38,000 0,000 12,000 0,000 A a4 -164,000 0,035 -272,000 0,000 -266,000 0,000 -300,000 0,000 -299,000 0,000 -333,000 0,000 -304,000 0,002 -229,000 0,087 -195,000 0,000 -182,000 0,000 a5 -167,000 0,030 -200,000 0,000 -140,000 0,005 -193,000 0,000 -213,000 0,000 -262,000 0,006 -200,000 0,088 -241,000 0,063 -171,000 0,000 -177,000 0,000 a6 -74,000 0,000 10,000 0,000 26,000 0,000 10,000 0,000 16,000 0,000 -8,000 0,000 8,000 0,000 -7,000 0,000 17,000 0,000 2,000 0,000 b1 72,000 0,000 31,000 0,000 52,000 0,000 45,000 0,000 43,000 0,000 24,000 0,000 21,000 0,000 41,000 0,000 32,000 0,000 48,000 0,000 b2 -325,000 0,000 -394,000 0,000 -374,000 0,000 -417,000 0,000 -410,000 0,000 -239,000 0,016 -264,000 0,009 -154,000 0,000 -164,000 0,000 -156,000 0,000 b3 -53,000 0,000 -75,000 0,000 -60,000 0,000 -20,000 0,000 -46,000 0,000 -17,000 0,000 -41,0.00 0,000 -16,000 0,000 -38,000 0,000 -12,000 0,000 B b4 -218,000 0,002 -347,000 0,000 -327,000 0,000 -320,000 0,000 -346,000 0,000 -350,000 0,000 -345,000 0,000 -246,000 0,054 -233,000 0,073 -194,000 0,000 b5 -221,000 0,002 -275,000 0,000 -200,000 0,000 -213,000 0,000 -260,000 0,000 -279,000 0,003 -241,000 0,022 -257,000 0,038 -209,000 0,000 -190,000 0,000 b6 -127.000 0,000 -64,000 0,000 -33,000 0,000 -9,000 0,000 -30,000 0,000 -25,000 0,000 -32,000 0,000 -24,000 0,000 -21,000 0,000 -10,000 0,000 La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. Leyenda: G= Grupos. DS= Desviación Estándar. A= Glibenclamida (a1 = Blanco, a2 = Aloxano, a3 = Isulina, a4 = Extracto 100 mg/kg, a5= Extracto 200 mg/kg, a6, Extracto 300 mg/kg). B= Insulina (b1 = Blanco, b2 = Aloxano, b3 = Glibenclamida, b4 = Extracto 100 mg/kg, b5= Extracto 200 mg/kg, b6, Extracto 300 mg/kg). En la tabla N°12. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 52 CONTRASTACIÓN DE HIPOTESIS RESPECTO A LA DOSIS H0 El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 100mg/kg no tiene efecto hipoglucemiantes en ratas diabéticas inducidas por aloxano. Hi extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 100mg/kg tiene efecto hipoglucemiantes en ratas diabéticas inducidas por aloxano. Según la tabla N°12, rechazamos la hipótesis nula porque de acuerdo al valor de la significancia en el transcurso de los días se evidencia que existe diferencia entre el extracto de 100mg/kg, sin embargo, esa diferencia se asocia a un efecto hipoglicemiante menor en comparación con la glibenclamida así mismo sucede con la insulina. H0 El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 200mg/kg no tiene efecto hipoglucemiantes en ratas diabéticas inducidas por aloxano. Hi extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 200mg/kg tiene efecto hipoglucemiantes en ratas diabéticas inducidas por aloxano. Según la tabla N°12, rechazamos la hipótesis nula porque de acuerdo al valor de la significancia en el transcurso de los días se evidencia que existe diferencia entre el extracto de 200mg/kg, sin embargo, esa diferencia se asocia a un efecto hipoglicemiante menor en comparación con la glibenclamida así mismo sucede con la insulina. 53 H0 El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 300mg/kg no tiene efecto hipoglucemiantes en ratas diabéticas inducidas por aloxano. Hi extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a 300mg/kg tiene efecto hipoglucemiantes en ratas diabéticas inducidas por aloxano. Según la tabla N°12, rechazamos la hipótesis nula porque de acuerdo al valor de la significancia en el transcurso de los días se evidencia que existe diferencia entre el extracto de 300mg/kg, sin embargo, esa diferencia se asocia a un efecto hipoglicemiante mayor en comparación con la glibenclamida pero un efecto hipoglicemiante menor al de la insulina 54 Subconjuntos homogéneos Tabla N°13. Subconjuntos homogéneos día 1. DÍA 1 HSD de Tukeya Subconjunto para alfa = 0.05 GRUPOS N 1 2 3 4 BLANCO 6 70,0 INSULINA 6 143,0 143,0 GLIBENCLAMIDA 6 196 ,0 196,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 270,0 270,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 361,0 361,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 364 ,0 364,0 ALOXANO 6 468,0 Sig. 0,000 0,000 0,000 0,000 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°13. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 1 muestra primero a la insulina con 143,000mg/dL, seguido de la glibenclamida con 196,00mg/dL. 55 Tabla N°14. Subconjuntos homogéneos. DÍA 2 HSD de Tukeya GRUPOS N Subconjunto para alfa = 0,05 1 2 BLANCO 6 71,0 INSULINA 6 103,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 167,0 GLIBENCLAMIDA 6 178 ,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 378,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 450,0 ALOXANO 6 497,0 Sig. 0,000 0,063 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°14. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 2 muestra primero a la insulina con 103,0mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 167,0mg/dL luego la glibenclamida con 178,0mg/dL. 56 Tabla N°15. Subconjuntos homogéneos día 3. DÍA 3 HSD de Tukeya GRUPOS Subconjunto para alfa = 0,05 N 1 2 3 4 BLANCO 6 75,0 INSULINA 6 127,0 127,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 161 ,0 161,0 GLIBENCLAMIDA 6 187 ,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 327 ,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 454,0 ALOXANO 6 501,0 p-valor 0,000 0,000 1,000 0,000 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°15. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 3 muestra primero a la insulina con 127,0mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 161,0mg/dL donde ya desplazo a la glibenclamida con 187,0mg/dL a la segunda columna. 57 Tabla N°16. Subconjuntos homogéneos día 4. DÍA 4 HSD de Tukeya GRUPOS Subconjunto para alfa = 0,05 N 1 2 3 BLANCO 6 74,0 INSULINA 6 119,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 128,0 GLIBENCLAMIDA 6 139 ,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 333,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 439 ,0 439,0 ALOXANO 6 537,0 p-valor 0,000 0,000 0,000 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°16. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 4 muestra primero a la insulina con 119,0mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 128,0mg/dL luego a la glibenclamida con 139,0mg/dL. 58 Tabla N°17. Subconjuntos homogéneos día 5. DÍA 5 HSD de Tukeya GRUPOS Subconjunto para alfa = 0,05 N 1 2 3 BLANCO 6 72,0 INSULINA 6 115,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 146,0 GLIBENCLAMIDA 6 162 ,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 376,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 462 ,0 46,0 ALOXANO 6 525,0 p-valor 0,000 0,000 0,000 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°17. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 5 muestra primero a la insulina con 115 mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 146,0mg/dL luego a la glibenclamida con 162,0mg/dL. 59 Tabla N°18. Subconjuntos homogéneos día 6. DÍA 6 HSD de Tukeya GRUPOS Subconjunto para alfa = 0.05 N 1 2 BLANCO 6 80,0 INSULINA 6 105,0 GLIBENCLAMIDA 6 122,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 130 ,0 ALOXANO 6 344,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 384,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 455,0 p-valor 0,000 0,000 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°18. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 6 muestra primero a la insulina con 105,0mg/dL, seguido la glibenclamida con 122,0mg/dL luego del extracto de 300mg/kg con 130,0mg/dL. 60 Tabla N°19. Subconjuntos homogéneos día 7. DÍA 7 HSD de Tukeya Subconjunto para alfa = 0.05 N GRUPOS 1 2 3 BLANCO 6 80,0 INSULINA 6 101,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 134,0 134,0 GLIBENCLAMIDA 6 142 ,0 142,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 343 ,0 343,0 ALOXANO 6 365,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 447,0 p-valor 0,000 0,067 0,000 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°19. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 7 muestra primero a la insulina con 101,0mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 134,0mg/dL, luego de la glibenclamida con 14,0mg/dL, también se va evidenciado que extracto de 200mg/kg con 343,0mg/dL. 61 Tabla N°20. Subconjuntos homogéneos día 8. DÍA 8 HSD de Tukey a Subconjunto para alfa = 0.05 N GRUPOS 1 2 3 BLANCO 6 77,0 INSULINA 6 118,0 118,0 GLIBENCLAMIDA 6 135,0 135,0 135,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 143,0 143,0 143,0 ALOXANO 6 273 ,0 273,0 273,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 364 ,0 364,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 376,0 p-valor 0,000 0,054 0,063 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°20. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 8 muestra primero a la insulina con 118,0mg/dL, seguido de la glibenclamida con 135,0mg/dL, luego del extracto de 300mg/kg con 144,0mg/dL. 62 Tabla N°21. Subconjuntos homogéneos día 9. DÍA 9 HSD de Tukeya Subconjunto para alfa = 0,05 N GRUPOS 1 2 BLANCO 6 79,0 INSULINA 6 112,0 112,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 133,0 133,0 GLIBENCLAMIDA 6 150,0 150,0 ALOXANO 6 277,0 277,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 321 ,0 321,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 346,0 p-valor 0,057 0,073 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°21. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 9 muestra primero a la insulina con 112,0mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 133,0mg/dL, luego de la glibenclamida con 150,0mg/dL, también se evidencia al extracto de 200mg/kg con 321,0mg/dL. 63 Tabla N°22. Subconjuntos homogéneos día 10. DÍA 10 HSD de Tukeya GRUPOS N Subconjunto para alfa = 0,05 1 BLANCO 6 78,0 INSULINA 6 127,0 EXTRACTO 300 mg/kg 6 137,0 GLIBENCLAMIDA 6 139,0 ALOXANO 6 283,0 EXTRACTO 200 mg/kg 6 317,0 EXTRACTO 100 mg/kg 6 321,0 p-valor 0,061 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6,000. La unidad de medida correspondiente a los valores en la presente tabla está referida a mg/dL. En la tabla N°22. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Para el día 10 muestra primero a la insulina con 127,0mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 137,0mg/dL, luego de la glibenclamida con 139,0mg/dL, también se evidencia al extracto de 200mg/kg con 317,0mg/dL. 64 5. DISCUSIÓN Según la tabla N°6 del análisis fitoquímico el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, se identificó cualitativamente los principales metabolitos secundarios: flavonoides, alcaloides, compuestos fenólicos, taninos, saponinas, cuyos resultados concuerdan con la investigación de Pari y Ramos (2019) de la actividad antioxidante y antiinflamatoria del extracto etanólico de las hojas de passiflora tripartita var. mollissima (kunth) “tumbo serrano”, identificaron los siguientes metabolitos: flavonoides, compuestos fenólicos, taninos, alcaloides, esteroides y grupo amino libre.(54) También en el estudio de Charco (2017) de la “evaluación del extracto hidroalcohólico de Passiflora tripartita y pre formulación de jarabe, identifico la presencia de los siguientes metabolitos: alcaloides, lactonas, cumarinas, triterpenos, catequinas, azucares reductores, taninos y flavonoides.(55) Según la tabla N°7 del ensayo de toxicidad en artemia salina del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, mostro una CL50 de 519.612µg/mL estando en la clasificación de ligeramente toxico. Nuestros resultados no concuerdan con Idrobo (2016) en su estudio “evaluación ansiolítica comparativa por solventes de los extractos de hojas flores de pasiflora manicata y pasiflora tripartita mediante administración vía oral en ratones mus musculus.” Mostro que el extracto de flores de P. tripartita en metanol es el más seguro para su uso al tener una DL50 de 675 ppm, mientras que los extracto de hojas de P. manicata en acetato de etilo seguido por hojas de P. tripartita en agua son los más tóxicos al tener los DL50 de 75 y 90 ppm. (56) Aranda et al realizo el estudio toxicidad, actividad antioxidante in vitro e hipoglicemiante in vitro e in vivo del extracto acuoso de juglans neotropica diels (nogal peruano), también utilizaron el ensayo de toxicidad en artemia salina obteniendo en sus resultados una CL50 de 3108 µg/mL que está en los rangos de no toxicidad, que al igual que nuestro estudio sirvió como referencia para aplicarlo en el método hipoglicemiante.(57) No se encontró en la literatura estudios que hayan utilizado las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” para el efecto hipoglicemiante, sin embargo la parte utilizada fue el fruto como lo referencia Plasencia (2019) en su estudio “efecto del zumo de Passiflora tripartita var. Mollissima (pur pur) sobre la acción hiperglucemiante de adrenalina en Rattus rattus var.albinus”, demostró en sus resultados que el del zumo de Passiflora 65 tripartita var. Mollissima (pur pur) tiene efecto antihiperglucemiante con la acción de adrenalina a los 15 y 30 minutos.(12) Villena et al. en su estudio “Efecto hipoglucemiante del extracto etanólico del fruto de Passiflora edulis Sim (maracuyá) en ratas aloxanizadas” demostraron los efectos beneficiosos al evidenciarse un porcentaje de variación favorable con extracto 50 mg/kg (58.8%; p<0.014; 100 horas), 100 mg/kg (36.5%; p<0.086; 96 horas), y extracto a dosis de 200 mg/kg (41%; p<0.014; 100 horas). Concluyeron que el extracto del fruto de Passiflora edulis Sims (maracuyá) disminuye los niveles de glicemia en ratas aloxanizadas.(13) En la tabla N°10. Se evidencia que el extracto de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” mostro un efecto hipoglicemiante a una dosis de 300mg/kg que se mantuvo constante durante los 10 días de tratamiento. El efecto hipoglicemiante se explicaría por la presencia de compuestos fenólicos y flavonoides en sinergia con otros grupos de constituyentes químicos de actividad hipoglicemiante. El estudio realizado por Camones et al, demostraron la acción hipoglicemiante con los compuestos fenólicos y flavonoides así como de taninos, saponinas y esteroides del extracto acuoso extraído de las hojas de Psidium guajava L. (guayaba), y el estudio realizado por Nakamura et al demostraron la acción hipoglucemiante de los flavonoides del fruto de Morinda citrifolia (noni) en ratas con diabetes inducidas por aloxano.(58) En su estudio de Gonzales et al (2011), titulado “Citroflavonoides como posible alternativa en el tratamiento de la diabetes y sus complicaciones”. Demostraron que los citroflavonoides han sido ampliamente estudiados desde diferentes puntos de vista, entre ellos destacan los que se encuentran de manera más abundante en los cítricos como hesperidina, naringina, rutina y diosmina. Estos citroflavonoides presentan evidencias de efectos hipoglucemiantes, antihiperglicémicos y/antidiabéticos tanto en ensayos in vivo como in vitro. Lo cual de una manera general expresamos en nuestro estudio del efecto hipoglicemiante de las hojas de Passiflora tripartita, se encontró la presencia de flavonoides.(59) 66 6. CONCLUSIONES − El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, contiene flavonoides, alcaloides, compuestos fenólicos, taninos y saponinas. Por lo tanto, se asume que estos metabolitos presentes en nuestra planta serían los que le dan el efecto hipoglucemiante. − El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, presento una CL50 de 519.612µg/mL mediante el ensayo de toxicidad en Artemia salina, clasificándolo como ligeramente toxico. − El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, presento efecto hipoglucemiante a una dosis de 100mg/kg pero menor en comparación a la glibenclamida. − El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, presento efecto hipoglucemiante a una dosis de 200mg/kg pero menor en comparación en la glibenclamida. − El extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, presento efecto hipoglucemiante a una dosis de 300mg/kg pero mayor efecto en comparación a la glibenclamida. 67 7. RECOMENDACIONES − Se recomienda identificar y cuantificar los metabolitos secundarios presentes en el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, mediante cromatografía liquida de alta resolución (HPLC). − Realizar un estudio de efecto hipoglucemiante a dosis mayores de 300mg/kg del extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”, para ver si se sigue manteniendo el efecto o presente alguna toxicidad. − Realizar un estudio histopatológico del páncreas de las ratas para ver el cual es la protección que genera el extracto hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. 68 8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Organización Mundial de la Salud. Diabetes [Internet]. 2018 [cited 2020 Mar 9]. Available from: https://www.who.int/es/news-room/fact-sheets/detail/diabetes 2. Federación Internacional de Diabetes - Datos y cifras [Internet]. [cited 2020 Mar 4]. 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Tipo de Investigación − ¿Cuál es el efecto − Determinar el efecto − El extracto - Por el control de los factores de estudio: hipoglucemiante del hipoglucemiante del hidroalcohólico de las extracto extracto hojas de Passiflora Experimental: Porque los estudios en los que el equipo hidroalcohólico de las hidroalcohólico de las tripartita “Tumbo” investigador asigna el factor de estudio y lo controla de forma hojas de Passiflora hojas de Passiflora presenta efecto deliberada para la realización de la investigación, según un plan tripartita “Tumbo” en tripartita “Tumbo” en hipoglucemiante en ratas preestablecido. De este modo se manipulará los animales de ratas diabéticas ratas diabéticas diabéticas inducidas por experimentación, primero induciendo a diabetes con aloxano y inducidas por inducidas por aloxano. aloxano. luego dándoles un tratamiento con el extracto hidroalcohólico de aloxano? las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” 2.2. Problemas 3.2. OBJETIVOS 4.2. HIPOTESIS - Según la finalidad: Específicos ESPECÍFICOS ESPECÍFICAS Analítico: Estudios de evaluación de presunta relación causal − ¿Cuáles son los − Identificar los − Los metabolitos entre un factor y un efecto, por ello se evaluará el efecto metabolitos metabolitos secundarios secundarios presentes en hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de secundarios presentes presentes en el extracto el extracto Passiflora tripartita “tumbo” en ratas diabéticas inducidas por en el extracto hidroalcohólico de las hidroalcohólico de las hojas de Passiflora hidroalcohólico de las aloxano hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”. hojas de Passiflora tripartita “Tumbo”? tripartita “Tumbo” tienen efecto hipoglucemiante 74 − ¿Cuál es la toxicidad − Evaluar la toxicidad − La toxicidad aguda CL50 - Por la secuencia de estudio: aguda CL50 del aguda CL50 del extracto del extracto extracto hidroalcohólico de las hidroalcohólico de las Longitudinal: Estudios en los que existe un lapso de tiempo hidroalcohólico de las hojas de Passiflora hojas de Passiflora entre las distintas variables que se evalúan, de tal forma que puede hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” en tripartita “Tumbo” en establecerse una secuencia temporal entre ellas, se examinara el tripartita “Tumbo” en larvas de Artemia efecto hipoglucemiante en 10 días de tratamiento con el extracto larvas de Artemia Salina larvas de Artemia salina. hidroalcohólico de las hojas de Passiflora tripartita “tumbo” en presenta efectos letales. salina? ratas diabéticas inducidas por aloxano − ¿Cuál es el efecto − Determinar el efecto − El extracto - Inicio del estudio en relación a los hechos: hipoglucemiante del hipoglucemiante del hidroalcohólico de las extracto extracto hojas de Passiflora Prospectivo: Estudios cuyo inicio es anterior a los hechos hidroalcohólico de las hidroalcohólico de las tripartita “Tumbo” a estudiados, de tal forma que los datos se recogen a medida que hojas de Passiflora hojas de Passiflora 100mg/Kg tiene efecto van sucediendo. En este caso los datos serán recogidos mediante tripartita “Tumbo” a tripartita “Tumbo” a hipoglucemiante en ratas un test hipoglucemiante. 100mg/Kg en ratas 100mg/Kg en ratas diabéticas inducidas por diabéticas inducidas diabéticas inducidas por aloxano. 5.2. Nivel de investigación por aloxano? aloxano. El presente trabajo de investigación será de nivel explicativo, Conforme lo referido por Hernández, Fernández y Baptista − ¿Cuál es el efecto − Determinar el efecto − El extracto (2010), puesto que tiene por propósito hallar una relación de hipoglucemiante del hipoglucemiante del explicación o casualidad entre las variables de estudio del efecto hidroalcohólico de las extracto extracto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de hojas de Passiflora hidroalcohólico de las hidroalcohólico de las Passiflora tripartita “Tumbo” en ratas diabéticas inducidas por tripartita “Tumbo” a hojas de Passiflora hojas de Passiflora aloxano. tripartita “Tumbo” a tripartita “Tumbo” a 200mg/Kg tiene efecto 200mg/Kg en ratas 200mg/Kg en ratas hipoglucemiante en ratas Población: diabéticas inducidas diabéticas inducidas por diabéticas inducidas por por aloxano? aloxano. aloxano. Especie animal: ratas machos rattus novergicus var. Holtzman Especie vegetal: las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” 75 − ¿Cuál es el efecto − Determinar el efecto − El extracto Muestra: hipoglucemiante del hipoglucemiante del hidroalcohólico de las extracto extracto hojas de Passiflora Especia animal: 42 ratas machos rattus novergicus var. hidroalcohólico de las hidroalcohólico de las tripartita “Tumbo” a Holtzman, 6 animales por cada grupo, un total de 7 grupos hojas de Passiflora hojas de Passiflora 300mg/Kg tiene efecto Especia vegetal: se utilizará 5kg de las hojas de Passiflora tripartita “Tumbo” a tripartita “Tumbo” a tripartita “Tumbo” hipoglucemiante en ratas 300mg/Kg en ratas 300mg/Kg en ratas diabéticas inducidas por diabéticas inducidas diabéticas inducidas por aloxano. por aloxano? aloxano. 5.3. DISEÑO DE INVESTIGACIÓN 76 9.2 Instrumento de recolección de datos Anexo 02. Recolección de datos del ensayo de toxicidad en Artemia salina. REPETICIONES DEL EXPERIMENTO CONCENTRACIONES 1 2 3 4 T V M T V M T V M T V M Control Negativo Agua de mar Control Positivo K2Cr2O7 Extracto - 1000µg/mL Extracto - 500 µg/mL Extracto - 100µg/mL Extracto - 50 µg/mL Extracto - 10 µg/mL Extracto - 5 µg/mL Extracto - 1 µg/mL Leyenda. T: Total. V: Vivas. M: Muertas. 77 Anexo 03. Inducción a la Hiperglucemia. MEDICIÓN DE GLUCOSA N° RATAS PESO (g) 0 HORAS 24 HORAS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 78 Anexo 04. Recolección de datos: test hipoglicemiante. DÍA 1 DIA 2 DIA 3 DIA 4 DIA 5 DIA 6 DIA 7 DIA 8 DIA 9 DIA10 T N H H H H H H H H H H 0 2 4 6 8 0 2 4 0 2 4 0 2 4 0 2 4 0 2 4 0 2 4 0 2 4 0 2 4 0 2 4 1 1 1 A 1 1 1 2 2 2 B 2 2 2 3 3 3 C 3 3 3 4 4 4 D 4 4 4 5 5 5 E 5 5 5 6 6 6 F 6 6 6 7 7 7 G 7 7 7 Leyenda: T: Tratamientos, N: número de ratas, H: horas de medición, A: blanco, B: aloxano, C: glibenclamida, D: insulina, E: extracto 100mg/kg, F: extracto 200mg/kg, G: extracto 300mg/kg. 79 9.3 Validación del instrumento de recolección de datos Figura N°4. Ficha de validación N°1 - instrumento de recolección de datos. 80 Figura N°5. Ficha de validación N°2 - instrumento de recolección de datos. 81 Figura N°6. Ficha de validación N°3 - instrumento de recolección de datos. 82 Figura N°7. Constancia de Identificación Botánica de Passiflora tripartita “Tumbo”. 83 Figura N°8. Recolección de datos del ensayo de toxicidad en Artemia salina. 84 Figura N°9. Inducción a hiperglicemia con aloxano. 85 Figura N°10. Recolección de datos: test hipoglicemiante. 86 9.4 Estudio farmacológico por horas Anexo 05. Análisis descriptivos día 1 por horas. DÍA 1 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS 6 HORAS 8 HORAS GRUPOS N Media DS Media Media DS Media DS Media DS DS Blanco 6 73,333 10,093 73,000 10,237 70,500 10,368 69,167 8,542 69,667 8,847 Aloxano 6 453,000 83,335 456,667 83,491 460,333 82,955 473,167 79,452 481,833 75,909 Glibenclamida 6 411,500 162,154 216,333 69,687 204,500 72,600 186,667 71,550 176,500 79,130 Insulina 6 419,833 119,050 212,000 62,238 157,000 57,668 107,167 17,498 95,500 24,131 Extracto 100mg/kg 6 366,000 137,701 366,500 131,957 359,333 134,515 358,000 141,150 361,333 142,242 Extracto 200mg/kg 6 374,667 112,053 366,000 111,780 365,167 117,299 365,333 117,377 359,500 113,880 Extracto 300mg/kg 6 377,167 135,821 329,333 128,318 305,333 117,871 232,333 74,995 213,500 50,580 Total 42 353,643 161,647 288,548 148,826 274,595 154,130 255,976 159,828 251,119 163,028 Según el anexo 05. Los valores de las medias en el día 1 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 212mg/dL, seguido de la glibenclamida 216mg/dL, luego extracto de 300mg/kg con 239mg/dL. Todo se mantiene constante hasta las 8 horas de tratamiento. 87 Anexo 06. Análisis descriptivos día 2 por horas. DÍA 2 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Blanco 6 73,667 10,930 71,667 10,912 70,667 9,288 Aloxano 6 487,500 70,111 493,167 71,714 502,000 70,046 Glibenclamida 6 368,667 81,168 198,667 47,647 157,167 38,953 Insulina 6 266,333 49,786 117,667 16,633 87,667 12,044 Extracto 100mg/kg 6 446,500 102,446 447,500 103,286 452,333 102,311 Extracto 200mg/kg 6 385,500 117,947 379,000 117,986 377,167 115,875 Extracto 300mg/kg 6 376,833 108,160 201,667 55,630 133,500 21,686 Total 42 343,571 150,831 272,762 168,934 254,357 182,276 Según el anexo 06. Los valores de las medias en el día 2 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 117mg/dL, seguido de la glibenclamida 198mg/dL, luego extracto de 300mg/kg con 201mg/dL. A las 4 horas se puede evidenciar que la insulina sigue primero, pero se observa un cambio con respecto a que el extracto de 300mg/kg esta superior a la glibenclamida. 88 Anexo 07. Análisis descriptivos día 3 por horas. DÍA 3 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Blanco 6 76,500 11,589 76,000 11,189 74,500 12,802 Aloxano 6 499,833 70,788 499,667 70,667 503,667 70,367 Glibenclamida 6 336,333 52,229 215,333 66,325 159,500 29,838 Insulina 6 266,667 32,641 148,333 19,044 106,500 19,326 Extracto 100mg/kg 6 423,500 95,402 453,167 94,300 455,333 93,046 Extracto 200mg/kg 6 350,333 104,320 343,333 97,350 311,333 103,537 Extracto 300mg/kg 6 332,167 88,115 188,333 43,084 133,333 26,432 Total 42 326,476 141,492 274,881 161,710 249,167 173,418 Según el anexo 07. Los valores de las medias en el día 3 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 148mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 188mg/dL, luego de la glibenclamida 215mg/dL. Se mantiene igual a las 4 horas de tratamiento. 89 Anexo 08. Análisis descriptivos día 4 por horas. DÍA 4 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Blanco 6 76,167 7,960 75,167 9,042 72,500 8,689 Aloxano 6 515,833 62,939 534,000 60,428 539,500 63,251 Glibenclamida 6 285,667 81,257 156,333 48,467 122,333 25,665 Insulina 6 273,333 30,936 141,833 23,129 96,000 18,836 Extracto 100mg/kg 6 459,333 94,072 456,167 94,726 423,000 90,404 Extracto 200mg/kg 6 373,500 133,202 350,333 138,295 314,833 137,328 Extracto 300mg/kg 6 313,833 44,183 153,500 24,639 103,833 15,549 Total 42 328,238 151,307 266,762 179,857 238,857 186,205 Según el anexo 08. Los valores de las medias en el día 4 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 141mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 153mg/dL, luego de la glibenclamida 156mg/dL. Se mantiene igual a las 4 horas de tratamiento. 90 Anexo 09. Análisis descriptivos día 5 por horas. DÍA 5 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Blanco 6 71,667 11,255 10,980 4,483 72,333 9,893 Aloxano 6 521,667 61,847 61,705 25,191 527,833 58,571 Glibenclamida 6 294,833 51,963 49,259 20,110 135,167 30,948 Insulina 6 281,167 23,870 14,624 5,970 99,500 13,531 Extracto 100mg/kg 6 469,833 73,551 81,569 33,300 462,500 79,188 Extracto 200mg/kg 6 373,333 121,622 114,526 46,755 373,333 116,302 Extracto 300mg/kg 6 307,833 38,499 21,729 8,871 121,667 14,501 Total 42 331,476 149,677 175,149 27,026 256,048 188,086 Según el anexo 09. Los valores de las medias en el día 5 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 14mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 21mg/dL, luego de la glibenclamida 49mg/dL. Se mantiene igual a las 4 horas de tratamiento. 91 Anexo 10. Análisis descriptivos. DÍA 6 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Blanco 6 82,167 9,283 81,500 8,849 80,333 9,092 Aloxano 6 340,500 267,919 342,500 269,608 344,833 271,440 Glibenclamida 6 302,333 60,530 153,167 20,331 122,167 14,497 Insulina 6 285,000 37,778 134,500 12,470 105,167 10,496 Extracto 100mg/kg 6 462,000 67,932 457,500 65,568 455,167 65,487 Extracto 200mg/kg 6 404,000 118,183 388,000 121,108 38,833 121,769 Extracto 300mg/kg 6 318,500 34,605 164,167 18,324 130,167 14.,359 Total 42 313,500 155,891 245,905 173,717 231,810 181,560 Según el Anexo 10. Los valores de las medias en el día 6 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 134mg/dL, seguido de la glibenclamida 153mg/dL, luego del extracto de 300mg/kg con 164mg/dL. Se mantiene igual a las 4 horas de tratamiento. 92 Anexo 11. Análisis descriptivos día 7 por horas. DÍA 7 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Blanco 6 81,000 12,490 81,500 11,221 78,833 9,663 Aloxano 6 363,167 284,789 364,167 285,512 367,000 287,609 Glibenclamida 6 302,833 49,049 159,000 19,380 126,000 7,376 Insulina 6 295,833 32,468 114,667 9,913 87,833 12,513 Extracto 100mg/kg 6 458,667 70,093 449,333 74,880 444,500 77,902 Extracto 200mg/kg 6 384,000 92,024 345,833 113,839 339,667 114,252 Extracto 300mg/kg 6 336,333 40,884 151,667 19,531 116,333 19,775 Total 42 317,405 156,120 238,024 175,232 222,881 182,942 Según el Anexo 11. Los valores de las medias en el día 7 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 114mg/dL, seguido del extracto de 300mg/kg con 151mg/dL, luego de la glibenclamida 159mg/dL. Se mantiene igual a las 4 horas de tratamiento. 93 Anexo 12. Análisis descriptivos día 8 por horas. DÍA 8 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Blanco 6 79,167 16,315 78,667 15,095 75,000 15,786 Aloxano 6 272,667 301,631 272,833 301,771 274,167 303,209 Glibenclamida 6 295,667 35,234 155,667 21,059 114,833 19,641 Insulina 6 305,167 37,043 136,500 22,819 100,333 14,774 Extracto 100mg/kg 6 369,000 187,482 366,167 186,693 362,667 184,794 Extracto 200mg/kg 6 437,667 100,257 383,167 77,091 369,667 74,880 Extracto 300mg/kg 6 351,833 47,402 164,833 25,918 121,000 9,209 Total 42 301,595 168,364 222,548 169,491 202,524 175,422 Según el Anexo 12. Los valores de las medias en el día 8 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 136mg/dL, seguido de la glibenclamida 155mg/dL, luego del extracto de 300mg/kg con 164mg/dL. Se mantiene igual a las 4 horas de tratamiento. 94 Anexo 13. Análisis descriptivos día 9 por horas. DÍA 9 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Blanco 6 80,833 10,704 79,000 13,828 79,000 11,419 Aloxano 6 273,333 301,706 275,667 304,029 277,833 306,587 Glibenclamida 6 301,000 38,005 169,167 20,371 132,000 17,573 Insulina 6 317,500 25,944 129,500 13,308 94,333 19,253 Extracto 100mg/kg 6 344,833 176,088 339,167 172,665 352,333 177765 Extracto 200mg/kg 6 349,333 83,077 330,500 81,171 312,667 77,311 Extracto 300mg/kg 6 349,167 59,139 155,500 25,681 110,500 12,046 Total 42 288,000 156,389 211,214 158,814 194,095 167,008 Según el Anexo 13. Los valores de las medias en el día 9 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 129mg/dL, seguido, del extracto de 300mg/kg con 155mg/dL, luego de la glibenclamida 169mg/dL. Se mantiene igual a las 4 horas de tratamiento. 95 Anexo 14. Análisis descriptivos día 10 por horas. DÍA 10 0 HORAS 2 HORAS 4 HORAS GRUPOS N Media DS Media DS Media DS Blanco 6 79,000 16,211 77,667 12,044 78,667 14,390 Aloxano 6 279,500 307,891 280,667 309,124 285,000 313,417 Glibenclamida 6 282,167 62,467 162,833 17,175 116,000 17,065 Insulina 6 304,333 40,884 145,167 15,817 108,167 17,982 Extracto 100mg/kg 6 327,167 180,200 322,167 178,900 321,167 177,958 Extracto 200mg/kg 6 340,833 70,428 321,667 67,769 312,000 70,174 Extracto 300mg/kg 6 307,500 62,651 156,333 23,157 118,500 20,216 Total 42 274,357 155,759 209,500 156,804 191,357 164,165 Según el Anexo 14. Los valores de las medias en el día 10 de tratamiento, se evidencia desde las 2 horas la insulina tiene el valor más bajo con 145mg/dL, seguido, del extracto de 300mg/kg con 156mg/dL, luego de la glibenclamida 162mg/dL. A las 4 horas se puede evidenciar que la insulina sigue primero pero se observa un cambio con respecto a la glibenclamida que esta superior que el extracto de 300mg/kg. 96 Anexo 15. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 1 por horas. COMPARACIONES MÚLTIPLES DÍA 1 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS 6 HORAS 8 HORAS p- p- p- p- p- GRUPOS Diferencia valor Diferencia Diferencia de Diferencia de Diferencia GRUPOS valor valor valor valor de medias de medias medias medias de medias Blanco 338,167 0,000 143,333 0,147 134,000 0.198 117,500 49,346 106,833 0,309 Aloxano -41,500 0,996 -240,333 0,002 -255,833 0.001 -286,500 49,346 -305,333 0,000 Insulina -8,333 1,000 4,333 1,000 47,500 0.973 79,500 49,346 81,000 0,629 Extracto 100 mg/kg 45,500 0,994 -150,167 0,113 -154,833 0.090 -171,333 49,346 -184,833 0,008 Extracto 200 mg/kg 36,833 0,998 -149,667 0,116 -160,667 0.071 -178,667 49,346 -183,000 0,009 Extracto 300 mg/kg 34,333 0,999 -113,000 0,388 -100,833 0.515 -45,667 49,346 -37,000 0,986 Blanco 346,500 0,000 139,000 0,172 86,500 0.683 38,000 49,346 25,833 0,998 Aloxano -33,167 0,999 -244,667 0,001 -303,333 0.000 -366,000 49,346 -386,333 0,000 Glibenclamida 8,333 1,000 -4,333 1,000 -47,500 0.973 -79,500 49,346 -81,000 0,629 Extracto 100 mg/kg 53,833 0,984 -154,500 0,096 -202,333 0.011 -250,833 49,346 -265,833 0,000 Extracto 200 mg/kg 45,167 0,994 -154,000 0,098 -208,167 0.008 -258,1667 49,346 -264,000 0,000 Extracto 300 mg/kg 42,667 0,995 -117,333 0,344 -148,333 0.117 -125,167 49,346 -118,000 0,206 En el Anexo 15. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 97 Insulina Glibenclamida Anexo 16. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 2 por horas. COMPARACIONES MULTIPLES DÍA 2 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS GRUPOS GRUPOS Diferencia de Diferencia de Diferencia de p-valor p-valor p-valor medias medias medias Blanco 295,000 0,000 127.000 0,054 86,500 0,296 Aloxano -118,833 0,217 -294,500 0,000 -344,833 0,000 Insulina 102,333 0,379 81,000 0,451 69.500 0,552 Glibenclamida Extracto 100 mg/kg -77,833 0,688 -248,833 0,000 -295,167 0,000 Extracto 200 mg/kg -16,833 1,000 -180,333 0,002 -220,000 0,000 Extracto 300 mg/kg -8,167 1,000 -3,000 1,000 23,667 0,996 Blanco 192,667 0,006 46,000 0,918 17,000 0,999 Aloxano -221,167 0,001 -375,500 0,000 -414,333 0,000 Glibenclamida -102,333 0,379 -81.000 0,451 -69,500 0,552 Insulina Extracto 100 mg/kg -180,167 0,012 -329,833 0,000 -364,667 0,000 Extracto 200 mg/kg -119,167 0,214 -261,333 0,000 -289,500 0,000 Extracto 300 mg/kg -110,500 0,291 -84,000 0,407 -45,833 0,892 En el Anexo 16. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 98 Anexo 17. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 3 por horas. COMPARACIONES MULTIPLES DÍA 3 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS GRUPOS GRUPOS Diferencia de Diferencia de Diferencia de p-valor p-valor p-valor medias medias medias Blanco 259,833 0,000 139,333 0,012 85,000 0,231 Aloxano -163,500 0,007 -284,333 0,000 -344,167 0,000 Insulina 69,667 0,642 67,000 0,576 53,000 0,747 Glibenclamida Extracto 100 mg/kg -87,167 0,383 -237,833 0,000 -295,833 0,000 Extracto 200 mg/kg -14,000 1,000 -128,000 0,027 -151,833 0,002 Extracto 300 mg/kg 4.1667 1,000 27,000 0,991 26,1667 0,989 Blanco 190,167 0,001 72,333 0,487 32,000 0,970 Aloxano -233,167 0,000 -351,333 0,000 -397,167 0,000 Glibenclamida -69,667 0,642 -67,000 0,576 -53,000 0,747 Insulina Extracto 100 mg/kg -156,833 0,010 -304,8333 0,000 -348,833 0,000 Extracto 200 mg/kg -83,667 0,432 -195,000 0,000 -204,833 0,000 Extracto 300 mg/kg -65,500 0,703 -40,000 0,936 -26,833 0,988 En el Anexo 17. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 99 Anexo 18. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 4 por horas. COMPARACIONES MULTIPLES DÍA 4 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS GRUPOS GRUPOS Diferencia de Diferencia de Diferencia de p-valor p-valor p-valor medias medias medias Blanco 209,500 0,001 81,167 0,445 49,833 0,861 Aloxano -230,167 0,000 -377,667 0,000 -417,167 0,000 Insulina 12,333 1,000 14,500 1,000 26,333 0,993 Glibenclamida Extracto 100 mg/kg -173,667 0,006 -299,833 0,000 -300,667 0,000 Extracto 200 mg/kg -87,833 0,427 -194,000 0,001 -192,500 0,000 Extracto 300 mg/kg -28,167 0,995 2,833 1,000 18,500 0,999 Blanco 197,167 0,001 66,667 0,667 23,500 0,996 Aloxano -242,500 0,000 -392,167 0,000 -443,500 0,000 Glibenclamida -12,333 1,000 -14,500 1,000 -26,333 0,993 Insulina Extracto 100 mg/kg -186,000 0,003 -314,333 0,000 -327,000 0,000 Extracto 200 mg/kg -100,167 0,276 -208,500 0,000 -218,833 0,000 Extracto 300 mg/kg -40,500 0,966 -11,667 1,000 -7,833 1,000 En el Anexo 18. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 100 Anexo 19. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 5 por horas. COMPARACIONES MULTIPLES DÍA 5 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS GRUPOS GRUPOS Diferencia de Diferencia de Diferencia de p-valor p-valor p-valor medias medias medias Blanco 223,167 0,000 117,167 0,035 62,833 0,536 Aloxano -226,833 0,000 -333,500 0,000 -392,667 0,000 Insulina 13,667 1,000 58,667 0,657 35,667 0,941 Glibenclamida Extracto 100 mg/kg -175,000 0,001 -272,333 0,000 -327,333 0,000 Extracto 200 mg/kg -78,500 0,366 -188,167 0,000 -238,167 0,000 Extracto 300 mg/kg -13,000 1,000 20,167 0,997 13,500 1,000 Blanco 209,500 0,000 58,500 0,660 27,167 0,984 Aloxano -240,500 0,000 -392,167 0,000 -428,333 0,000 Glibenclamida -13,667 1,000 -58,667 0,657 -35,667 0,941 Insulina Extracto 100 mg/kg -188,667 0,000 -331,000 0,000 -363,000 0,000 Extracto 200 mg/kg -92,167 0,196 -246,833 0,000 -273,833 0,000 Extracto 300 mg/kg -26,667 0,990 -38,500 0,931 -22,167 0,995 En el Anexo 19. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 101 Anexo 20. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 6 por horas. COMPARACIONES MULTIPLES DÍA 6 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS GRUPOS GRUPOS Diferencia de Diferencia de Diferencia de p-valor p-valor p-valor medias medias medias Blanco 220,667 0,038 71,667 0,930 41,833 0,995 Aloxano -38,167 0,997 -189,333 0,093 -222,667 0,030 Insulina 1,333 1,000 18,667 1,000 17,000 1,000 Glibenclamida Extracto 100 mg/kg -159,667 0,249 -304,333 0,001 -333,000 0,000 Extracto 200 mg/kg -101,667 0,744 -234,833 0,018 -262,667 0,006 Extracto 300 mg/kg -16,167 1,000 -11,000 1,000 -8,000 1,000 Blanco 202,833 0,069 53,000 0,984 24,833 1,000 Aloxano -55,500 0,981 -208,000 0,049 -239,667 0,016 Glibenclamida -17,333 1,000 -18,667 1,000 -17,000 1,000 Insulina Extracto 100 mg/kg -177,000 0,155 -323,000 0,000 -350,000 0,000 Extracto 200 mg/kg -119,000 0,587 -253,500 0,009 -279,667 0,003 Extracto 300 mg/kg -33,500 0,999 -29,667 0,999 -25,000 1,000 En el Anexo 20. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 102 Anexo 21. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 7 por horas. COMPARACIONES MULTIPLES DÍA 7 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS GRUPOS GRUPOS Diferencia de Diferencia de Diferencia de p-valor p-valor p-valor medias medias medias Blanco 221,833 0,040 77,500 0,919 47,167 0,993 Aloxano -60,333 0,974 -205,167 0,074 -241,000 0,023 Insulina 7,000 1,000 44,333 0,995 38,167 0,998 Glibenclamida Extracto 100 mg/kg -155,833 0,291 -290,333 0,003 -318,500 0,001 Extracto 200 mg/kg -81,167 0,898 -186,833 0,130 -213,667 0,059 Extracto 300 mg/kg -33,500 0,999 7,333 1,000 9,667 1,000 Blanco 214,833 0,051 33,167 0,999 9,000 1,000 Aloxano -67,333 0,956 -249,500 0,016 -279,167 0,005 Insulina Glibenclamida -7,000 1,000 -44,333 0,995 -38,167 0,998 Extracto 100 mg/kg -162,833 0,245 -334,667 0,001 -356,667 0,000 Extracto 200 mg/kg -88,167 0,857 -231,167 0,030 -251,833 0,015 Blanco -40,500 0,997 -37,000 0,998 -28,500 1,000 En el Anexo 21. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 103 Anexo 22. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 8 por horas. COMPARACIONES MULTIPLES DÍA 8 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS GRUPOS GRUPOS Diferencia de Diferencia de Diferencia de p-valor p-valor p-valor medias medias medias Blanco 216,500 0,145 77,000 0,958 39,833 0,999 Aloxano 23,000 1,000 -117,167 0,761 -159,333 0,430 Insulina -9,500 1,000 19,167 1,000 14,500 1,000 Glibenclamida Extracto 100 mg/kg -73,333 0,971 -210,500 0,146 -247,833 0,051 Extracto 200 mg/kg -142,000 0,601 -227,500 0,093 -254,833 0,041 Extracto 300 mg/kg -56,167 0,993 -9,167 1,000 -6,167 1,000 Blanco 226,000 0,114 57,833 0,990 25,333 1,000 Aloxano 32,500 1,000 -136,333 0,615 -173,833 0,328 Glibenclamida 9,500 1,000 -19,167 1,000 -14,500 1,000 Insulina Extracto 100 mg/kg -63,833 0,986 -229,667 0,088 -262,333 0,033 Extracto 200 mg/kg -132,500 0,674 -246,667 0,054 -269,333 0,026 Extracto 300 mg/kg -46,667 0,997 -28,333 1,000 -20,667 1,000 En el Anexo 22. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 104 Anexo 23. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 9 por horas. COMPARACIONES MULTIPLES DÍA 9 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS GRUPOS GRUPOS Diferencia de Diferencia de Diferencia de p-valor p-valor p-valor medias medias medias Blanco 220,167 0,116 90,167 0,909 53,000 0,994 Aloxano 27,667 1,000 -106,500 0,822 -145,833 0,534 Insulina -16,500 1,000 39,667 0,999 37,667 0,999 Glibenclamida Extracto 100 mg/kg -43,833 0,998 -170,000 0,343 -220,333 0,110 Extracto 200 mg/kg -48,333 0,996 -161,333 0,404 -180,667 0,285 Extracto 300 mg/kg -48,167 0,996 13,667 1,000 21,500 1,000 Blanco 236,667 0,074 50,500 0,995 15,333 1,000 Aloxano 44,167 0,998 -146,167 0,521 -183,500 0,268 Glibenclamida 16,500 1,000 -39,667 0,999 -37,667 0,999 Insulina Extracto 100 mg/kg -27,333 1,000 -209,667 0,139 -258,000* 0,037 Extracto 200 mg/kg -31,833 1,000 -201,000 0,172 -218,333 0,116 Extracto 300 mg/kg -31,667 1,000 -26,000 1,000 -16,167 1,000 En el Anexo 23. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 105 Anexo 24. Pruebas de post hoc (prueba de Tukey) día 10 por horas. COMPARACIONES MULTIPLES DÍA 10 0 HORAS 2 HORAS 4HORAS GRUPOS GRUPOS Diferencia de Diferencia de Diferencia de p-valor p-valor p-valor medias medias medias Blanco 203,167 0,201 85,167 0,933 37,333 0,999 Aloxano 2,667 1,000 -117,833 0,755 -169,000 0,375 Insulina -22,167 1,000 17,667 1,000 7,833 1,000 Glibenclamida Extracto 100 mg/kg -45,000 0,998 -159,333 0,433 -205,167 0,173 Extracto 200 mg/kg -58,667 0,991 -158,833 0,437 -196,000 0,215 Extracto 300 mg/kg -25,333 1000 6,500 1,000 -2,500 1,000 Blanco 225,333 0,118 67,500 0,978 29,500 1,000 Aloxano 24,833 1,000 -135,500 0,620 -176,833 0,323 Glibenclamida 22,167 1,000 -17,667 1,000 -7,833 1,000 Insulina Extracto 100 mg/kg -22,833 1,000 -177,000 0,311 -213,000 0,143 Extracto 200 mg/kg -36,500 0,999 -176,500 0,314 -203,833 0,179 Extracto 300 mg/kg -3,167 1,000 -11,167 1,000 -10,333 1,000 En el Anexo 24. Se realiza la comparación de los promedios de tratamientos del extracto hidroalcohólico con los medicamentos Glibenclamida e Insulina con acción hipoglicemiante ya conocida. Aquellos valores con signo negativo corresponden a niveles altos de glucosa y por tanto a niveles reducidos de efecto hipoglicemiante. 106 Anexo 25. Subconjuntos homogéneos día 1 por horas DÍA 1 O HORAS GLU2HORAS GLU4HORAS GLU6HORAS GLU8HORAS HSD Tukeya HSD Tukeya HSD Tukeya HSD Tukeya HSD Tukeya S S S S S GR N GR N GR N GR N GR N 1 2 1 2 3 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 A 6 73,333 A 6 73,000 A 6 70,500 A 6 69,167 A 6 69,667 E 6 366,000 D 6 212,000 212,000 D 6 157,000 157,000 D 6 107,167 107,167 D 6 95,500 F 6 374,667 C 6 216,333 216,333 C 6 204,500 204,500 204,500 C 6 186,667 186,667 C 6 176,500 G 6 377,167 G 6 329,333 329,333 G 6 305,333 305,333 305,333 G 6 232,333 232,333 G 6 213,500 213,500 C 6 411,500 F 6 366,000 366,000 E 6 359,333 359,333 E 6 358,000 358,000 F 6 359,500 359,500 D 6 419,833 E 6 366,500 366,500 F 6 365,167 365,167 F 6 365,333 365,333 E 6 361,333 361,333 B 6 453,000 B 6 456,667 B 6 460,333 B 6 473,167 B 6 481,833 p- 1,000 0,858 p- 0,147 0,096 0,254 p- 0,198 0,117 0,071 0,090 p- 0,237 0,178 0,130 0,257 p- 0,068 0,056 0,174 valor valor valor valor valor Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 6,000. S: Subconjunto para alfa = 0.05, GR: grupos, A: blanco, B: aloxano, C: glibenclamida, D: insulina, E: extracto 100mg/kg, F: extracto 200mg/kg, G: extracto 300mg/kg. En el Anexo 25. Se evidencia que los valores en la primera columna presentan un mayor efecto hipoglicemiante. Se puede observar del primer día a las 0, 2, 4, 6, 8 horas de tratamiento, que primero está la insulina seguido de la glibenclamida y extracto de 300mg. 107 Figura N°11. Recolección de muestra vegetal de Passiflora tripartita “Tumbo”. 108 SECADO MOLIDO Figura N°12. Obtención del polvo fino de las hojas Passiflora tripartita “Tumbo”. Figura N°13. Pesada del polvo obtenido. 109 Figura N°14. Preparación del extracto hidroalcohólico de Passiflora tripartita “Tumbo”. Figura N°15. Filtrado del extracto hidroalcohólico de Passiflora tripartita “Tumbo” con papel Whatman N°40. 110 Figura N°16. Secado del extracto hidroalcohólico de Passiflora tripartita “Tumbo” en estufa a temperatura de 38 °C. Figura N°17 .Obtención del extracto seco de Passiflora tripartita “Tumbo”. 111 Figura N° 18. Prueba de solubilidad Figura N° 19. Análisis fitoquímico 112 Pesado de sal marina Disolvió en agua destilada Filtración 4 veces Pesado de los huevos de Adiciono a la pecera Eclosión a 48 horas Artemia salina Figura N°20. Obtención de larvas de Artemia salina. Extracto hidroalcohólico K2Cr2O7 Agua + sal marina Figura N°21. Preparación de los tratamientos para el ensayo de toxicidad en Artemia salina. 113 Pasado las 48 horas Selecciono 10 nauplios Adiciono a la placa petri Administración de los tratamientos: extracto hidroalcohólico, K2Cr2O7 y agua + sal marina Figura N°22. Exposición a los naupios de Artemia salina a los tratamientos en 24 horas. 114 Artemias vivas Artemia muerta Figura N°23. Observación y conteo de los nauplios vivos y muertos. 115 Figura N°24. Aclimatación de los animales de experimentación. Figura N°25. Pesado de los animales de experimentación y toma de glucosa en ayunas. Figura N°26. Preparación del aloxano. 116 Figura N°27. Inducción a hiperglicemia con aloxano 130mg/kg. Medición de glucosa Identificación con marcadores Agrupación aleatoriamente en 6 24 horas después de e n la cola de la rata grupos + 1 grupo sin inducción inducción Figura N°28. Animales de experimentación con hiperglicemia. Glibenclamida Extracto Insulina hidroalcoholico Figura N°29. Preparación de los tratamientos a administrar. 117 Administración vía oral Administración vía intraperitoneal Figura N°30. Administración de los tratamientos. Figura N°31. Medición de la glucosa después de la administración de los tratamientos. 118