FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA EFECTO ANTIULCEROSO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LAS HOJAS DE Baccharis latifolia “chilca” EN RATAS CON INDUCCIÓN DE LESIONES GÁSTRICAS POR INDOMETACINA TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO FARMACEÚTICO AUTORES: Bach. ZAVALA JULCARIMA, JULIO CÉSAR Bach. AQUINO AQUINO, JACQUELINE ROSA ASESOR: Mg. ACARO CHUQUICAÑA, FIDEL ERNESTO LIMA – PERÚ 2020 DEDICATORIA El presente trabajo de investigación va dedicado a Dios, quien como guía estuvo presente en el caminar nuestra vida, bendiciéndome y dándome fuerzas para continuar con mis metas trazadas en cada instante. A mis padres que, con apoyo incondicional, amor y confianza permitieron que logre culminar nuestros estudios profesionales. A mis padres, por ser nuestro pilar más importante y por demostrarme siempre sus consejos y apoyo incondicional sin importar nuestras diferencias de opiniones. A mis familiares, a pesar de nuestra distancia física, siento que están conmigo siempre y aunque nos faltaron muchas cosas por compartir juntos, sé que este momento hubiera sido tan especial para ustedes como lo es para nosotros. Un sentimiento especial de gratitud hacia mis amigos, cuyas palabras de aliento y empuje por la tenacidad, y apoyarme espiritualmente durante el compartir de las aulas. Jacqueline Rosa y Julio César iiii AGRADECIMIENTO Agradecer a mi Universidad María Auxiliadora por permitirme llevar a cabo mi investigación y proporcionar cualquier asistencia solicitada. Un agradecimiento especial a los miembros a la Escuela de Farmacia y Bioquímica y recursos humanos por su continuo apoyo. Me gustaría expresar mi agradecimiento a mi maestro asesor, el Mg. QF. Fidel Ernesto Acaro Chuquicaña, ha sido un gran mentor para mí. Me gustaría agradecerle por alentar mi investigación y por permitirme crecer como investigadora científica. Sus consejos tanto en investigación como en mi carrera profesional han sido invaluables. Fue un gran privilegio, honor trabajar y estudiar bajo su guía. Estoy extremadamente agradecido por lo que me ha ofrecido A la Dra. Flor Acustupa por su constante apoyo orientación y consejo en el desarrollo de la tesis. A Luis Escudero, Tecnólogo del laboratorio de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad María Auxiliadora por su colaboración y paciencia durante la ejecución de tesis. Agradecer a los maestros, de nuestra universidad que ayudaron con esta investigación. Su dinamismo, visión, sinceridad y motivación me han inspirado profundamente. Jacqueline Rosa y Julio César 3i ii RESUMEN Título: Efecto antiulceroso del extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina. Objetivos: Determinar el efecto antiulceroso del extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina. Metodología: Se realizó un estudio experimental, de nivel explicativo, para la evaluación del efecto antiulceroso se utilizó 30 ratas de la cepa Holtzman, los cuales fueron aleatorizados en 6 grupos de cinco animales cada uno, a los cuales se les indujo la formación de úlceras gástricas con indometacina, el efecto antiulceroso se determinó a través de tres indicadores: inflamación, número de bandas hemorrágicas y número de úlceras, se analizó mediante el Programa Estadístico SPSS versión 21, y se aplicó el análisis de Kruskall Wallis para analizar la varianza entre tratamientos y para determinar la diferencia entre los mismos mediante la prueba no paramétrica de Games Howell Resultado: Los metabólitos secundarios hallados fueron: flavonoides, compuestos fenólicos, alcaloides, triterpenoides/esteroides, azúcares reductores, aminoácidos saponinas, cumarinas y quinonas. Para la actividad antiulcerosa, el extracto etanólico de Baccharis latifolia, a dosis de 200 mg/kg logró una inhibición de las lesiones gástricas del 94% (p <0,05), un promedio de sólo 2 lesiones y una severidad de 1, por lo que mostró ser efectivo respecto a las dosis ensayadas de 100 y 400 mg/kg del extracto y similar en actividad antiulcerosa que el omeprazol. Conclusiones: En condiciones experimentales el extracto etanólico de Baccharis latifolia tiene actividad antiulcerosa en ratas. Palabras clave: Antiulceroso, Baccharis latifolia, inflamación, metabolitos. i4v ABSTRACT Title: Antiulcer effect of the ethanolic extract of the leaves of Baccharis latifolia “chilca” in rats with induction of gastric lesions due to indomethacin. Objectives: To determine the antiulcer effect of the ethanolic extract of the leaves of Baccharis latifolia “chilca” in rats with induction of gastric lesions due to indomethacin. Methodology: An experimental study was carried out, with an explanatory level, for the evaluation of the antiulcer effect, 30 rats of the Holtzman strain were used, which were randomized in 6 groups of five animals each, which were induced to form gastric ulcers with Indomethacin, the antiulcer effect was determined through three indicators: inflammation, number of hemorrhagic bands and number of ulcers, was analyzed using the SPSS Statistical Program version 21, and Kruskall Wallis analysis was applied to analyze the variance between treatments and for determine the difference between them using the non- parametric test of Games Howell. Result: The secondary metabolites found were: flavonoids, phenolic compounds, alkaloids, triterpenoids / steroids, reducing sugars, saponin amino acids, coumarins and quinones. For the antiulcer activity, the ethanol extract of Baccharis latifolia, at a dose of 200 mg / kg, achieved an inhibition of gastric lesions of 94% (p <0.05), an average of only 2 lesions and a severity of 1, for which proved to be effective with respect to the tested doses of 100 and 400 mg / kg of the extract and similar in antiulcer activity than omeprazole. Conclusions: Under experimental conditions, the ethanol extract of Baccharis latifolia has antiulcer activity in rats. Key words: Antiulcer, Baccharis latifolia, inflammation, metabolites. 5v INDICE Página PORTADA i DEDICATORIA ii AGRADECIMIENTO iii RESUMEN iv ABSTRACT v ÍNDICE vi LISTA DE FIGURAS ix LISTA DE TABLAS x INTRODUCCIÓN 1 1. PROBLEMA DE INVESTIGACION 2 1.1. Planteamiento del problema 2 1.2. Formulación del problema 3 1.2.1. Problema General 3 1.2.2. Problemas Específicos 4 1.3. Objetivos 4 1.3.1. Objetivo General 4 1.3.2. Objetivo Específicos 4 1.4. Justificación 5 1.4.1. Justificación teórica 5 1.4.2. Justificación práctica 5 1.4.3. Justificación social 6 1.4.4. Justificación metodológica 6 6vi 2. MARCO TEÓRICO 7 2.1. Antecedentes 7 2.1.1. Antecedentes internacionales 7 2.1.2. Antecedentes nacionales 11 2.2. Base teórica 13 2.2.1. Úlceras pépticas 13 2.2.2. Principales enfermedades del sistema digestivo 15 2.2.3. Baccharis latifolia 25 2.3. Definición de términos básicos 31 2.4. Hipótesis 33 3. METODOLOGÍA 34 3.1. Tipo de investigación 34 3.2. Nivel de investigación 34 3.3. Diseño de la investigación 34 3.4. Área de estudio 35 3.5. Población y muestra: Criterios de inclusión y exclusión 35 3.5.1. Población 35 3.5.2. Muestra 35 3.6. Variables y Operacionalización de variables 36 3.7. Instrumentos de recolección de datos 37 3.8. Validación de los instrumentos de recolección de datos 37 3.9. Procedimientos de recolección de datos 37 3.10. Componente ético de la investigación 41 3.11. Procesamiento y análisis de datos 41 vii 4. RESULTADOS 42 5. DISCUSIÓN 47 6. CONCLUSIONES 52 7. RECOMENDACIONES 53 8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 54 9. ANEXOS 62 9.1. Matriz de consistencia 62 9.2. Instrumento de recolección de datos 64 9.3. Información complementaria estadística 67 9.4. Identificación taxonómica 71 x 88 viii LISTA DE FIGURAS Página Figura 1. (A): Mucosa gástrica normal Gastritis crónica (B): Inflamación mononuclear ocupa toda la mucosa 16 Figura 2. Úlceras en el estómago y duodeno 17 Figura 3. Sitios de acción de las opciones farmacológicas más utilizadas en el tratamiento de la enfermedad de la úlcera péptica 18 Figura 4. Farmacoterapia en la EUP, asociada a H. pylori 20 Figura 5. Los AINES inducen lesión de la mucosa 21 Figura 6. Baccharis latifolia 26 Figura 7. Estructuras químicas en Baccharis latifolia 28 Figura 8. Número de lesiones gástricas por grupo experimental 48 Figura 9. Porcentaje de inhibición de lesiones gástricas por grupo experimental 49 Figura 10. Número de lesiones gástricas por grupo experimental 50 9x i ix LISTA DE TABLAS Página Tabla 1. Identificación de metabolitos secundarios de Baccharis latifolia 45 Tabla 2. Porcentaje de inhibición de lesiones gástricas y grado de severidad 47 1x 0 INTRODUCCIÓN Los profesionales de la salud, como parte de su quehacer profesional, realizan investigación científica: evaluación de la calidad de la salud, someten a prueba diferentes métodos de índole experimental y descriptivo. Es indiscutible que el investigar se constituye en una necesidad vital y permanente del ser humano, quien aspira al conocimiento, en busca de la verdad y el sentido de la vida. Prácticamente todas las sociedades humanas han utilizado las plantas no solo como fuentes de nutrición, sino también como terapia contra enfermedades y dolencias. Teniendo en cuenta el hecho que la síntesis de un producto farmacéutico requiere una enorme inversión de investigación, el descubrimiento de plantas medicinales útiles que se han utilizado durante milenios es muy atractivo. Los trastornos gastrointestinales se encuentran entre los más prevalentes, y los más comunes incluyen la úlcera gástrica y péptica. Aunque todavía existen brechas significativas en la comprensión de los trastornos gastrointestinales, es probable que surjan nuevas terapias a partir de la investigación y el desarrollo actuales. Varios investigadores han evaluado una gran cantidad de especies y hierbas por sus efectos antiulcerosos para lograr un resultado favorable. Se ha demostrado que grandes cantidades de plantas medicinales y nutrientes dietéticos poseen actividades gastroprotectoras y muchas de ellas son aún utilizadas por la medicina folklórica, por ello nuestro interés de evidenciar en un estudio experimental con hojas de Baccharis latifolia. Por ello, la investigación nos ayuda a mejorar el estudio porque nos permite establecer contacto con la realidad a fin de que la conozcamos mejor, la finalidad de esta radica en formular nuevas teorías o modificar las existentes, en incrementar los conocimientos; es el modo de llegar a elaborar teorías. El objetivo del presente estudio es determinar el efecto antiulceroso del extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “Chilca” en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina. 1 1. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 1.1. Planteamiento del Problema La enfermedad de la úlcera péptica (UP) es el resultado de un desequilibrio entre el ácido estomacal-pepsina y las barreras de defensa de la mucosa. Afecta a 4 millones de personas en todo el mundo anualmente. La incidencia de UP se ha estimado en alrededor del 1,5% al 3%. Una revisión sistemática de siete estudios de países desarrollados estimó que las tasas de incidencia anual de UP fueron del 0,10% -0,19% para la UP diagnosticada y del 0,03% -0,17% cuando se basaron en los datos de hospitalización.1 La prevalencia de por vida de la úlcera péptica en general se estima que la población es de aproximadamente 5-10%.2 Sin embargo, la prevalencia y la incidencia de la enfermedad úlcera péptica ahora es probablemente más baja que estas estimaciones en todo el mundo, especialmente en países de altos ingresos, porque los estudios epidemiológicos han mostrado una fuerte tendencia decreciente en la incidencia, las tasas de ingresos hospitalarios y la mortalidad asociada con la enfermedad en el últimos 20-30 años. 3,4 Aunque el manejo se ha vuelto más desafiante debido a la amenaza de aumentar la resistencia a los antimicrobianos en todo el mundo y al uso generalizado de la terapia antitrombótica compleja en la población que envejece. Las úlceras pépticas no asociadas con H. pylori o el uso de medicamentos antiinflamatorios no esteroideos (AINES) ahora también están imponiendo desafíos diagnósticos y terapéuticos sustanciales.5 Los principales factores de riesgo para las úlceras gástricas y duodenales son la infección por H. pylori y el uso de AINES. En cambio, solo una pequeña proporción de personas afectadas con H. pylori o que usan AINES desarrollan enfermedad ulcerosa péptica, lo que significa que la susceptibilidad individual es importante al comienzo del daño de la mucosa.6 2 El uso concomitante de AINES o aspirina con anticoagulantes, los corticosteroides y los inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina aumentan el riesgo de hemorragia digestiva alta. Aunque muchas personas que usan AINE o aspirina tienen infección concurrente por H. pylori, su interacción en la patogénesis de la úlcera péptica sigue siendo controvertida. En estudios observacionales dio como conclusión que los AINES, el uso de aspirina y la infección por H. pylori aumentan el riesgo de enfermedad ulcerosa péptica de forma independiente.7 El uso crónico de AINES, incluidas las dosis bajas de aspirina, se asocia con lesiones de la mucosa gastrointestinal. Sin embargo, los principales eventos adversos son relativamente poco frecuentes. Los pacientes con múltiples factores de riesgo, como antecedentes de enfermedad ulcerosa péptica, aumento de la edad, co-prescripción de corticosteroides y anticoagulantes, y el uso de dosis altas y a largo plazo de AINE tienen el mayor riesgo de toxicidad gastrointestinal grave.8, 9 Además son costosos y es probable que produzcan más efectos secundarios en comparación con los medicamentos a base de hierbas medicinales Es evidente que la evaluación experimental de las plantas medicinales para el tratamiento de la úlcera gástrica es bastante impresionante, pero muy pocos han llegado a ensayos clínicos y todavía pocos se han comercializado. Esto muestra que los beneficios de la investigación no están llegando a las personas a quienes se dirige la investigación médica y, por lo tanto, el tiempo, la mano de obra y los recursos no se utilizan de manera eficiente. 1.2. Formulación del Problema 1.2.1. Problema General ¿Tiene efecto antiulceroso el extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina? 3 1.2.2. Problemas Específicos - ¿Cuáles son los metabolitos secundarios presentes en el extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” con efecto antiulceroso? - ¿Cuál es la dosis que tiene la mayor eficacia del extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina? - ¿Qué porcentaje de inhibición de ulceras tiene el extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina? 1.3. Objetivos 1.3.1. Objetivo General Determinar el efecto antiulceroso del extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina. 1.3.2. Objetivo Específicos - Identificar los metabolitos secundarios presentes en el extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca”. - Evaluar dosis de 100 mg/kg, 200 mg/kg y 400 mg/kg del extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina. - Evaluar el porcentaje de inhibición de los indicadores (bandas hemorrágicas, inflamación y ulceras) del extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina. 4 1.4. Justificación 1.4.1. Justificación teórica Hoy en día, la medicina a base de hierbas se está convirtiendo en un tratamiento alternativo viable sobre medicamentos sintéticos disponibles comercialmente en el tratamiento de UP. Esto se basa en su menor costo, efectividad percibida, disponibilidad, así como pocos o ningún efecto adverso. Debido a la creciente concentración en las terapias alternativas en los años actuales, los productos herbales se han vuelto populares.10 Subrayamos y sustentamos claramente que los productos vegetales representan una rica fuente de moléculas bioactivas con potencial antiulceroso. Pasando de los usos tradicionales a los estudios preclínicos, la eficacia de ciertos remedios herbales ha sido investigada sustancialmente por estudios in vitro e incluso in vivo, y, en algunos casos, su actividad se ha atribuido a clases específicas de fitoquímicos como recursos naturales, seguros y efectivos que pueden usarse en la prevención e incluso el tratamiento de las úlceras. Sin embargo, la escasez de estudios en humanos, en la parte superior de la pirámide de medicina basada en la evidencia, ralentiza estos hallazgos prometedores, lo que requiere, en un futuro cercano, más ensayos clínicos para respaldar e incluso validar la infinidad de datos preclínicos. 1.4.2. Justificación práctica Justificamos desde la perspectiva práctica porque pueden representar un punto de partida para una mayor investigación etnofarmacológica intercultural comparativa, que puede contribuir a aumentar el conocimiento actual de las plantas medicinales populares y podría conducir a las estrategias de conservación y dirigidas a proteger posibles especies de plantas raras. La investigación actual contribuye a la literatura farmacológica existente al identificar una serie de nuevos usos de las plantas y sus beneficios para la 5 salud percibidos para los humanos. Los datos completos obtenidos beneficiarán a la comunidad científica para validar y evaluar aún más los beneficios medicinales de varias especies de plantas y simplificar el proceso de descubrimiento de fármacos. Más aún el contenido de esta tesis podría ser útil para la comunidad científica que se dedica al campo del descubrimiento de fármacos y el desarrollo de nuevas formulaciones de fármacos. Además, se puede utilizar como fuente de información para académicos. 1.4.3. Justificación social La justificación del presente estudio está dirigida a mejorar la calidad de atención de los pacientes con ulceras de origen digestivos, a través del análisis de una alternativa medicinal con evidencia probada. Los resultados de este estudio podrían ayudar a las pequeñas empresas a utilizar los recursos vegetales locales para la medicina, ya que los productos naturales satisfacen la demanda de los pacientes. Por consiguiente, las plantas medicinales también pueden proporcionar beneficios económicos a las comunidades locales. 1.4.4. Justificación metodológica La elaboración y aplicación de los criterios para cada una de los ítems elaborados y desarrollados durante la experimentación ha sido diseñado en base al método científico, situaciones que pueden ser investigadas por la ciencia, una vez que sean demostrados su validez y confiabilidad podrán ser utilizados en otros trabajos y en otras instituciones de investigación. Por lo tanto, destacamos la credibilidad de la información rigurosamente analizada y su importancia particular para la investigación y para una correcta comprensión del mundo humano. 6 2. MARCO TEÓRICO 2.1. Antecedentes 2.1.1. Antecedentes internacionales Siddiqui et al. (2018), tuvieron el objetivo de evaluar los efectos antiinflamatorios del aceite esencial de hoja y los extractos de Mikania cordata (Asteraceae). El método de estudio fue experimental. Entre los resultados destaca que la actividad antiinflamatoria, el aceite esencial (50 mg/kg) produjo la mayor inhibición del edema del 72,80% a las 4 horas después de la administración de carragenina, que fue comparable con la del fenilbutazona estándar (87,87%). Por otro lado, el extracto de cloroformo (800 mg/kg) y el extracto de acetato de etilo (800 mg/kg) mostraron hasta un 34,31% y un 15,27% de inhibición del edema, respectivamente, a las 4 horas después de la administración de carragenina. Los investigadores concluyeron que Mikania cordata, podría ser la opción terapéutica contra las inflamaciones y confirman el uso tradicional.11 Boeing et al. (2016), tuvieron el objetivo de evaluar la actividad antiulcerogénica del extracto etanólico crudo de hojas de Vernonia condensata (EEVC) de la familia Asteraceae. El método de estudio era experimental, se establecieron modelos experimentales de úlcera utilizando etanol e indometacina. Los resultados fueron que el EEVC de 30 y 300 mg/kg exhibió actividad antiulcerosa y evitó ambas lesiones gástricas inducidas por etanol o indometacina en ratas. El efecto de curación gástrica del EEVC (300 mg/kg, por vía oral dos veces al día durante siete días) se confirmó al examinar la apariencia macroscópica y microscópica de las úlceras gástricas crónicas inducidas por ácido acético en ratas. Los investigadores concluyeron que el EEVC demuestra efectos antiulcerosos mediante la inhibición de la secreción gástrica a través de vías colinérgicas gastrinérgicas. 12 7 De Barros et al. (2016), tuvieron el objetivo de evaluar efectos antiulcerosos del extracto metanólico de las hojas de Solidago chilensis (Asteraceae) en modelos de úlcera gástrica aguda. El método de estudio fue experimental. Los principales resultados fueron que el extracto metanólico de S. chilensis (EMSC) a 100 o 300 mg/kg redujo el área de la úlcera inducida por etanol/HCl en ratones en comparación con el grupo de vehículos. El EMSC también fue capaz de disminuir la úlcera gástrica inducida por indometacina en ratas a una dosis de 100 mg/kg. Los autores concluyeron que el extracto metanólico de las hojas de Solidago chilensis presenta efecto potencial sobre la curación gástrica y proporcionaron apoyo al uso tradicional de S. chilensis para la prevención y el tratamiento de las lesiones gástricas. 13 Dos Reis Lívero et al. (2016), aplicaron el objetivo evaluar los efectos gastroprotectores de dosis más bajas de extracto hidroetanólico de Baccharis trimera (EHBT) contra la exposición aguda y crónica al etanol. El método de estudio fue experimental. Los resultados fueron que la administración oral del EHBT (3, 10 y 30 mg/kg) 1 hora antes de la inducción de lesiones gástricas agudas con etanol redujo significativamente el área de la lesión en un 68, 63 y 79%, respectivamente, en comparación con el grupo de control (99.50 ± 14.50 mm2). El omeprazol (el control positivo) inhibió las lesiones gástricas en un 99%. La administración oral de EHBT u omeprazol dos veces al día durante 7 días redujo la ulceración gástrica crónica inducida por el ácido acético en un 64 y un 61%, respectivamente, en comparación con el grupo control (151,00 ± 12,80 mm2). Los autores concluyeron que en el presente estudio proporciona evidencia que la administración oral del EHBT tiene potentes efectos antiulcerosos contra las úlceras agudas y crónicas, que se reflejan en una reducción del área de la lesión y la supresión del estrés oxidativo gástrico, sin signos de toxicidad sistémica.14 Hariprasath et al. (2012), se plantearon el objetivo de evaluar los efectos gastroprotectores y la toxicidad oral aguda del extracto acuoso de hoja de 8 Senecio candicans (Asteraceae) en modelos experimentales. El método de estudio fue experimental, la actividad antiulcerogénica se realizó en el modelo inducido por etanol usando ratas albinas Wistar. Los resultados afirman que mostraron En el modelo inducido por etanol, el índice de úlceras (IU) en las ratas control fue de 32,42 ± 2,82 mientras que el pretratamiento de las ratas con 250 y 500 mg/kg de Senecio candicans disminuyó drásticamente el IU a 10.75 ± 2.72 y 4.33 ± 0.52, respectivamente. Entre los grupos tratados previamente con Senecio candicans, las ratas con 500 mg/kg mostró un porcentaje máximo de inhibición (83,52), mientras que 250 mg/kg el pretratamiento mostró solo el 66.73% de inhibición. En conclusión, es evidente que el extracto acuoso de hoja de Senecio candicans exhibe actividad antiulcerogénica de una manera dependiente de la dosis y su eficacia es mayor a la dosis máxima (500 mg/kg). El presente estudio proporciona apoyo adicional para el uso tradicional de esta planta en el tratamiento de la úlcera gástrica.15 Massignani et al. (2009), tuvieron el objetivo de evaluar la actividad antiulcerosa del aceite esencial de Baccharis dracunculifolia en modelos animales. El método de estudio fue experimental, los ensayos antiulcerosos se realizaron utilizando los siguientes protocolos en ratas: úlcera inducida por antiinflamatorios no esteroideos (AINE), úlcera inducida por etanol, úlcera inducida por estrés y determinación de secreción gástrica utilizando píloro ligado, el tratamiento en las dosis fue de 50, 250 y 500 mg/kg del aceite esencial de Baccharis dracunculifolia. Los resultados hallados fueron que el aceite esencial de Baccharis dracunculifolia disminuyó significativamente el índice de lesión, el área total de la lesión y el porcentaje de lesiones en comparación con los grupos de control positivos y negativos. Los investigadores concluyeron que el aceite esencial de B. dracunculifolia probablemente podría ser un buen agente terapéutico para el desarrollo de una nueva medicina fitoterapéutica para el tratamiento de la úlcera gástrica.16 9 Petrovic et al (2008), se plantearon el objetivo de evaluar las actividades antiinflamatorias, gastroprotectoras y antioxidantes de un extracto de cloruro de metileno de Hieracium gymnocephalum (Asteraceae). El método de estudio fue experimental, la prueba de edema de pata en rata inducida por carragenano se utilizó como modelo experimental para detectar la actividad antiinflamatoria. El extracto se administró vía oral en dosis de 25, 50, 100 y 200 mg/kg a ratas y sus efectos en comparación con la indometacina, se usó como fármaco de referencia. Los resultados mostraron que el extracto investigado redujo el edema de una manera dependiente de la concentración. El efecto antiinflamatorio obtenido fue del 5,9%, 11,7%, 31,2% y 44,1% a dosis de 25, 50, 100 y 200 mg/kg, respectivamente, siendo estadísticamente significativo a una dosis de 100 mg/kg. La indometacina tuvo un fuerte efecto antiinflamatorio del 73,4% a una dosis de 8 mg/kg, pero causó grandes lesiones gástricas. Cuando el extracto de la planta en la dosis más alta probada (200 mg/kg) se administró concomitantemente con indometacina, el efecto antiinflamatorio aumentó ligeramente, pero las lesiones gástricas se redujeron significativamente. Los investigadores concluyeron que las actividades inflamatorias y antiulcerosas del extracto de cloruro de metileno de H. gymnocephalum son causadas por la presencia de alcoholes triterpénicos. Por lo tanto, los mecanismos de inhibición de la peroxidación lipídica y la eliminación de radicales libres contribuyen parcialmente, pero no significativamente, a los efectos demostrados. 17 Bucciarelli et al. (2007), tuvieron el objetivo de evaluar la actividad gastroprotectora del extracto de Solidago chilensis (Asteraceae) ex frente a un modelo experimental de lesiones gástricas agudas inducidas por etanol. El método de estudio era experimental, los animales control recibieron excipiente (5 mL/kg) y los tratados a dosis de extracto acuoso 1 (350mg/kg), extracto acuoso 2 (700 mg/kg) y extracto metanólico (350 mg/kg). Cada animal recibió 8,5 mL/kg de etanol absoluto en forma oral para inducir la 10 formación de úlceras. Los resultados resaltan que el extracto acuoso ejerció una protección total en uno de los estómagos del grupo tratado, con una inhibición de las lesiones del 91,9 %; una dosis equivalente al doble de la anterior (extracto Acuoso 2), produjo una tasa de prevención de úlcera de 2/7 y una gastroprotección del 91,1 %, entre tanto el extracto metanólico protegió totalmente 5 de los 7 estómagos tratados, exhibiendo una inhibición del 97,4 %. Los investigadores concluyeron que los resultados obtenidos demuestran la capacidad antiulcerosa de Solidago chilensis al inhibir significativamente la formación de lesiones gástricas inducidas por etanol en ratones.18 2.1.2. Antecedentes Nacionales Castañeda y Miranda (2018), se plantearon el objetivo de determinar la actividad analgésica y antiinflamatoria del extracto etanólico de la raíz Taraxacum officinale (Asteraceae) en ratones. El método de estudio era experimental, para determinar el efecto antiinflamatorio se empleó el método de edema subplantar, los fármacos que se usaron como estándares fueron: Dexametasona 4 mg/kg y diclofenaco 50 mg/kg. Los resultados fueron que la actividad efectiva antiinflamatoria en la dosis de 25 mg/kg, tiene una evolución porcentual de inhibición del 56% al 99 % en un lapso de seis horas. Los autores concluyeron que el extracto etanólico de la raíz Taraxacum officinale posee un importante efecto antiinflamatorio, la presencia de los compuestos de relevancia farmacológica deberían ser aislados e identificados para su mejor aprovechamiento terapéutico. 19 Rivera (2018), se planteó el objetivo de evaluar la actividad antiinflamatoria del extracto etanólico de las hojas del Baccharis buxifolia (Lam.) Pers. “Talla” en ratones. El método de estudio era experimental, para determinar la actividad antiinflamatoria se utilizó 42 ratones albinos utilizándose el extracto en concentraciones de 100, 200 y 400 mg/kg de peso corporal y como estándar los fármacos dexametasona 4 mg/kg y diclofenaco 50 mg/kg 11 de peso respectivamente. Los principales resultados fueron que el mayor efecto antiinflamatorio se observó a dosis de 400 mg/kg con un porcentaje de inhibición de la inflamación de 62% comparado con las dosis del extracto en menor concentración 100 mg/kg con 10%, 200 mg/kg con 28% y los fármacos estándar diclofenaco 50 mg/kg con 31% y dexametasona 4 mg/kg con un porcentaje de inhibición de la inflamación de 48%. El autor concluye que el extracto etanólico de las hojas del Baccharis buxifolia presenta actividad antiinflamatoria a una dosis de 400 mg/kg. 20 Béjar (2016), tuvo el objetivo de determinar el efecto antioxidante del extracto hidroalcohólico de hojas de Jungia paniculata (Asteraceae) “matico serrano” sobre el tejido gástrico de ratas injuriado por etanol 70%. El método de estudio era experimental, la capacidad antioxidante se evaluó mediante el método del radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH) distribuidos aleatoriamente en 24 ratas Sprague Dawley. Entre los principales resultados, el extracto presentó una capacidad antioxidante de concentración inhibitoria media máxima (IC50) 4,15 μg/mL en comparación a Vitamina C 2,29 μg/mL y Trolox 3,38 μg/mL. El autor concluye que el extracto hidroalcohólico tiene buena actividad antioxidante y presenta efecto antiulceroso previniendo la lipoperoxidación e incrementando la capacidad antioxidante de glutatión peroxidasa y superóxido dismutasa. 21 Borja (2013), se planteó el objetivo de comprobar el efecto gastroprotector del extracto hidroalcohólico de las hojas de Mutisia acuminata ‘chinchilcuma’ (Asteraceae). El método de investigación era experimental, la actividad antiulcerosa se determinó induciendo úlcera gástrica con naproxeno en el estómago en ratas albinas. Los resultados demostraron que el tratamiento con mayor eficacia fue el extracto hidroalcóholico de las hojas a dosis de 400mg/kg y 600mg/kg, observándose 78 y 76 % de inhibición de ulcera gástrica. Comparados con el grupo patrón que obtuvo un 24% de inhibición. El estudioso concluye que el extracto hidroalcohólico de las hojas 12 de Mutisia acuminata a una dosis de 400 y 600mg/kg presenta efecto antiulceroso, comprobados con los cortes anatomopatológicos seriados del estómago en animales de experimentación. 22 Hoyos y Yep (2008), se plantearon el objetivo de diseñar una formulación de aplicación tópica a base de Baccharis latifolia (Chilca), con efecto antiinflamatorio, El método de estudio fue experimental, se evaluó el efecto antiinflamatorio utilizando el método del edema plantar inducido por carragenina en ratones, empleándose concentraciones de 1,25 mg/g, 2,5 mg/g, 3,75 mg/g, 5 mg/g y 7 mg/g del extracto frente a un grupo control; se determinó que la menor concentración que mantiene una inhibición de la inflamación mayor al 70% después de 5 horas de la inyección de carragenina es la concentración de 2,5 mg/g. Entre los resultados resaltan que el 2,5% crema-gel del Baccharis latifolia (Chilca), presenta efecto antiinflamatorio superior al extracto hidroalcohólico de Baccharis latifolia. Los autores concluyeron que el efecto antiinflamatorio es mayor al del extracto, comprobando que el efecto antiinflamatorio del extracto en crema-gel se mantiene y es incluso superior.23 2.2. Base Teórica 2.2.1. Úlceras pépticas Las úlceras pépticas son llagas o lesiones en la mucosa gastrointestinal que se extienden a lo largo de la mucosa muscular, caracterizadas típicamente por diferentes estadios de necrosis, infiltración de neutrófilos, reducción del flujo sanguíneo, aumento del estrés oxidativo e inflamación. Se manifiesta como una enfermedad no mortal, representada principalmente por síntomas periódicos de dolor epigástrico, que a menudo se alivian con alimentos o álcali, además de provocar mucha incomodidad a los pacientes, interrumpiendo sus rutinas diarias y también causando agonía mental.10,24 13 La enfermedad de la úlcera péptica se debe a un desequilibrio entre las barreras estomacales ácido-pepsina y defensa de la mucosa.1 Los AINES, Helicobacter pylori, el estrés fisiológico, el tabaquismo, los corticosteroides y la historia previa de úlceras pépticas son factores de riesgo para la úlcera péptica. En presencia de factores de riesgo, la recurrencia de la úlcera es común a pesar del tratamiento inicial exitoso.1 En similitud al tema, la prevalencia decreciente de infección por Helicobacter pylori y la mejora del tratamiento de la úlcera péptica como los inhibidores de la bomba de protones (IBP) o las terapias de erradicación de H. pylori redujeron la incidencia de la enfermedad no complicada de úlcera péptica en las últimas décadas. Sin embargo, varios estudios han mostrado resultados controvertidos que muestran una incidencia constante de enfermedad de úlcera péptica complicada, que puede deberse a factores de riesgo multifactoriales que incluyen el aumento del consumo de antiinflamatorios no esteroideos (AINES) o ácido acetilsalicílico (AAS), especialmente en pacientes ancianos con comorbilidades múltiples, hábitos de fumar o etiologías desconocidas.25 El tratamiento de la úlcera péptica se centra en la erradicación de la HP en pacientes con HP positivos y reduce el riesgo de úlceras inducidas por AINES y complicaciones relacionadas con la úlcera. Los regímenes de medicamentos que contienen antimicrobianos, como la claritromicina, metronidazol, amoxicilina y sales de bismuto, y los medicamentos antisecretarios, como los inhibidores de la bomba de protones (IBP) o antagonistas H2 (AH-2), se utilizan para aliviar los síntomas de la úlcera, curar la úlcera y erradicar la infección por HP.7 Se utilizan IBP, AH-2 y sucralfato para curar las úlceras inducidas por AINE con HP negativo, pero la recurrencia de la úlcera es probable en pacientes de alto riesgo si se continúa con el AINES. 26 14 La coterapia profiláctica con IBP o misoprostol se usa para disminuir el riesgo de úlcera en pacientes que toman AINES no selectivos. Los inhibidores de la COX-2 se usan a menudo en lugar de un AINE no selectivo para reducir el riesgo de úlceras y complicaciones. 26 2.2.2. Principales enfermedades del sistema digestivo a) Gastritis La gastritis es una afección inflamatoria de la mucosa gástrica que muestra cambios relacionados con la etiología y la respuesta del huésped. Fue identificado en el siglo XIX como resultado de autopsias. Puede haber imágenes morfológicas similares de gastritis basadas en diferentes etiologías, y puede haber más de un agente etiológico en la gastritis. 27 Adicionalmente, la gastritis es considerada en las enfermedades acidopépticas como trastornos en los que el ácido gástrico y la pepsina son factores patogénicos necesarios, pero por lo general insuficientes. Si bien los cáusticos por sí mismos, normalmente el ácido y la pepsina en el estómago, no producen daños ni síntomas por los mecanismos de defensa intrínsecos. Las barreras que impiden el reflujo del contenido gástrico al esófago constituyen la principal defensa de este órgano. Cuando fallan dichas barreras protectoras y se da el reflujo, puede haber dispepsia, esofagitis erosiva y gastritis de índole aguda o crónica. Los tratamientos se dirigen a disminuir y mejorar los procesos inflamatorios gástricos. 27,28 La gastritis crónica (Figura 1) es una de las enfermedades más comunes de toda la vida, graves e insidiosas en los seres humanos. Se puede estimar que más de la mitad de la población mundial tiene esta enfermedad en algún grado, lo que indica que incluso cientos de millones de personas en todo el mundo pueden tener gastritis crónica de una forma u otra.28 15 Figura 1. (A): Mucosa gástrica normal Gastritis no atrófica (B): Inflamación mononuclear leve en la capa superior de la mucosa ("gastritis crónica superficial") Fuente: Sipponen P, et al. (2015).28 Los exponentes de la gastritis crónica incluyen: infiltración de células linfoides y plasmáticas, y atrofia de las glándulas del cuerpo y el antro (con o sin metaplasia intestinal). La actividad del proceso inflamatorio se evidencia por la presencia de granulocitos eosinófilos y neutrófilos, que pueden generar microabscesos en la luminaria de los tubos glandulares.29 Muchos médicos consideran que la gastritis crónica es equivalente a la infección por Helicobacter pylori (HP). Sin embargo, se sabe que hay muchas otras causas de la enfermedad.29 La gastritis sin una infección por H. pylori es frecuente, y se estima en el 21% de todas las inflamaciones, y las causas del fenómeno son complejas. La GC avanza paso a paso, dentro de años y décadas, a la gastritis atrófica que se caracteriza por una pérdida de glándulas en la mucosa gástrica.29 16 Por ello a las úlceras gástricas se les asocia a otras patologías incluyendo la gastritis. b) Úlcera péptica gastrointestinales La enfermedad de úlcera péptica incluye úlceras tanto gástricas como duodenales, que representaron una gran amenaza para la población mundial en los últimos dos siglos con una alta morbilidad y mortalidad. 30 Las úlceras pépticas (Figura 2) 9 son lesiones inducidas por ácido que se encuentran en el estómago y el duodeno caracterizadas por una mucosa desnuda con un defecto que se extiende hacia la submucosa o la musculatura propia. Las lesiones que no alcanzan esta profundidad se llaman erosiones. El tratamiento de la enfermedad de la úlcera péptica y sus complicaciones siguen siendo un desafío. Figura 2. Úlceras en el estómago y duodeno. Fuente: Narayanan M, et al. (2018).9 Además, los fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINES), la aspirina en dosis bajas, el tabaquismo, el consumo excesivo de alcohol, el estrés emocional y los factores psicosociales son causas cada vez más importantes 17 de las úlceras y sus complicaciones, incluso en pacientes con H. pylori negativos. 26 La enfermedad de úlcera péptica continúa siendo una fuente de morbilidad y mortalidad significativas en todo el mundo. La mayoría de los casos de enfermedad de úlcera péptica están asociados con infección por H. pylori o el uso de AINES. 9 Los principales mecanismos fisiopatológicos y los sitios de acción del tratamiento antiulceroso se muestran la Figura 3. 6 Figura 3. Sitios de acción de las opciones farmacológicas más utilizadas en el tratamiento de la enfermedad de la úlcera péptica. CCK 2 = receptor de colecistocinina; PGE 2 = Prostaglandina E 2; PGI 2 = prostaglandina I- 2; EP 3 = receptor de prostaglandina E 3; HIST = histamina. Fuente: Kuna L, et al. (2019).6 18 El tratamiento de la enfermedad del ácido péptico varía desde el uso del antagonista del receptor H-2, los inhibidores de la bomba de protones (IBP) hasta la quimioterapia triple y el régimen secuencial para H. pylori. De manera similar, el tratamiento de la perforación varía de un enfoque conservador no operativo a un enfoque quirúrgico.30 Todavía hay una pregunta abierta sobre cómo interactúan la infección por H. pylori y los AINES o la aspirina, dejando sin resolver la mejor estrategia para manejar a los pacientes con ambos riesgos. La patogenia de H. pylori. Las lesiones gástricas relacionadas aún no se conocen completamente. Su desarrollo está liderado por una combinación de factores virulentos de H. pylori y la respuesta inmune del huésped; sin embargo, la combinación precisa de los factores de H. pylori y el perfil genético del huésped aún no se han aclarado por completo. 6 c) Ulceras por Helicobacter pylori La enfermedad de úlcera péptica (EUP) es un problema que tradicionalmente es el centro de atención de los gastroenterólogos. Muchos aspectos de esta patología han sido bien estudiados. Existen muchas teorías sobre el desarrollo de la EUP, incluyendo vascular, inflamatorio-gastritis, neurogénica, psicosomática, acido-péptica e infecciosa. 31 Roberts et al. (2016) Con respecto a la prevalencia de HP, se observó una fuerte disminución y la incidencia de cáncer gástrico en toda Europa.32 En un grupo de 8661 niños sintomáticos de Polonia, se identificó H. pylori en 1390 (16,05%).33 En África, un área con una alta prevalencia de infección por H. pylori y una baja incidencia de cáncer gástrico, la tasa de infección por H. pylori fue alta tanto en adultos como en niños34 que puede atribuirse a malas condiciones socioeconómicas e higiénicas. Sin embargo, un estudio retrospectivo realizado en Ghana que comparó el H. pylori las tasas de infección en pacientes con síntomas gastrointestinales superiores en 1999 y 19 2012 encontraron una tendencia decreciente en la prevalencia de infección por H. pylori, es decir, 69,7% en 1999 y 45,2% en 2012 (Darko R, et al. 2015). 35 Los medicamentos farmacoterapéuticos en enfermedades de úlcera péptica (EUP), asociada a H. pylori se observan en la Figura 4. Figura 4. Farmacoterapia en la EUP, asociada a H. pylori. Fuente: Narayanan M, et al. (2018).9 20 En la mayoría de los casos, la administración de fármacos antibacterianos lleva a la erradicación de HP, pero puede dar lugar a cepas bacterianas resistentes y facilitar la conversión de HP en formas de reposo (latentes). Por lo tanto, es relevante estudiar las formas latentes de HP, así como sus valores en la ulcerogénesis.31 d) Enfermedad de úlcera péptica por AINES Las úlceras inducidas por AINES (Véase la Figura 5) forman un subconjunto importante de úlceras que se producen debido a la supresión de la síntesis de prostaglandina gástrica. Las prostaglandinas son importantes para la integridad de la mucosa. 30 Figura 5. Los AINES inducen lesión de la mucosa. Fuente: Prabhu V, et al. (2014).30 21 La inhibición de la ciclooxigenasa (COX 1 y COX 2), más aún de la COX 2, se supone que causa la úlcera gástrica. Se sabe que la adherencia de los neutrófilos causa daño a la mucosa al liberar radicales libres de oxígeno, la liberación de proteasas y la reducción del flujo sanguíneo capilar. El papel del óxido nítrico (NO) y el sulfuro de hidrógeno (H2S), en el mantenimiento de la integridad de la mucosa gástrica es bien conocido. El NO y H2S, aumentan el flujo sanguíneo a la mucosa, estimula la secreción de moco, e inhiben la adherencia de los neutrófilos. Asimismo, los AINES, inhiben al NO y H2S. 30 La inhibición de la COX-1 en el tracto gastrointestinal conduce a una reducción de la secreción de prostaglandinas y sus efectos citoprotectores en la mucosa gástrica. Esto por lo tanto aumenta la susceptibilidad a lesiones de la mucosa. La inhibición de la COX-2 también puede desempeñar un papel en la lesión de la mucosa. 36 En la enfermedad de la úlcera péptica (EUP) asociada a los AINES o a la aspirina, las úlceras sanan más del 85% del tiempo con 6 a 8 semanas de terapia con IBP si se suspende el agente causante. La curación de la úlcera todavía es alcanzable, pero se retrasa con el uso continuo de AINES. Se puede iniciar una terapia antisecretora para la prevención de la enfermedad de úlcera péptica en pacientes que toman aspirina. Aunque los IBP, los bloqueadores H-2, el sucralfato y el misoprostol pueden considerarse para tratar la enfermedad de úlcera péptica asociada a los AINES, los IBP son mucho más efectivos que otros agentes. 36 El sucralfato es eficaz para tratar las úlceras duodenales asociadas a los AINES, pero no para el tratamiento o la prevención de las úlceras gástricas asociadas a los AINES. Además de su poca eficacia, el misoprostol a menudo está limitado por su perfil de efectos secundarios, que incluye trastornos gastrointestinales y reacciones abortivas. En los casos de úlceras refractarias, 22 se debe explorar tanto el cumplimiento del fármaco con el uso del IBP como el uso inadvertido de AINES. 5 Para las úlceras refractarias, se puede recomendar duplicar la dosis de IBP durante seis a ocho semanas, aunque la evidencia que lo respalda es débil. Además, evaluando para falso negativo las pruebas de H. pylori (mediante serología), tumores malignos, infecciones, enfermedad de Crohn, vasculitis, radioterapia abdominal superior, consumo de cocaína y síndrome de Zollinger-Ellison deben considerarse para las úlceras que se han tratado adecuadamente y no se han curado.9 Se necesita precaución para minimizar los efectos adversos conocidos. Antes de prescribir, el historial médico debe revisarse para evaluar el riesgo de toxicidad gastrointestinal. Esto incluye preguntar sobre el uso de aspirina y AINES de venta libre. Se debe tener en cuenta la elección del AINE y la duración de la terapia. Los pacientes deben estar informados y conocer los posibles eventos adversos graves.9 Los agentes gastroprotectores con licencia para la profilaxis de ulceración con AINES se encuentran como medicamentos de venta libre. 35 A continuación, los principales medicamentos en el tratamiento de las úlceras digestivas inducidas por AINES: - Inhibidores de la bomba de protones Los inhibidores de la bomba de protones reducen la secreción de ácido gástrico al inhibir la H+/K+-ATPasa. Son ampliamente utilizados para inducir la curación de úlceras gástricas y duodenales. En un ensayo aleatorio doble ciego, una dosis estándar de terapia con inhibidores de la bomba de protones fue eficaz para curar las úlceras y prevenir la recurrencia de lesiones gastroduodenales en pacientes que toman AINES.8 23 Los inhibidores de la bomba de protones son ligeramente mejores para prevenir las úlceras duodenales que las úlceras gástricas.8 Un metaanálisis reciente evaluó las estrategias actuales para la prevención de la toxicidad gastrointestinal. Se encontró que los inhibidores selectivos de la COX-2 en combinación con los inhibidores de la bomba de protones se asociaron con la probabilidad más baja de eventos absolutos para las complicaciones de la úlcera (0,07; intervalo de confianza del 95%: 0,02 a 0,18). Esta estrategia puede ser la forma más efectiva de reducir el riesgo de complicaciones de la úlcera, seguida del uso de un inhibidor selectivo de la COX-2 solo y un AINE no selectivo combinado con un inhibidor de la bomba de protones.37 - Antagonistas del receptor H-2 Los antagonistas de los receptores H-2 tienen un perfil de efectos adversos que es comparable a la terapia con inhibidores de la bomba de protones. Sin embargo, el análisis de los datos combinados mostró que una sola dosis diaria no protege contra las úlceras gástricas relacionadas con los AINES, pero las dosis dobles de antagonista del receptor H-2 (al menos ranitidina 300 mg dos veces al día) fueron eficaces para prevenir las úlceras gástricas y duodenales cuando se compararon a placebo.8 - Misoprostol El misoprostol es un análogo de la prostaglandina E1. Su efecto gastroprotector se logra mediante la inhibición de la liberación de ácido gástrico y pepsina y mejora la resistencia de la mucosa gástrica. Este efecto es en gran medida dependiente de la dosis. Un gran análisis de datos agrupados mostró que el misoprostol fue eficaz para prevenir las úlceras gástricas (74%) y duodenales (53%) en comparación con el placebo. Desafortunadamente, la utilidad clínica del misoprostol está limitada en gran 24 medida por sus efectos adversos gastrointestinales, como calambres, dolor abdominal y diarrea, por lo que es una opción de medicamento de tercera línea.8 El uso crónico de AINES que incluye aspirina en dosis bajas se asocia con lesión de la mucosa gastrointestinal. Sin embargo, los eventos adversos mayores son relativamente infrecuentes. Los pacientes con múltiples factores de riesgo, como antecedentes de enfermedad de úlcera péptica, aumento de la edad, prescripción conjunta de corticosteroides y anticoagulantes, y el uso prolongado de AINES a altas dosis y a largo plazo tienen el mayor riesgo de toxicidad gastrointestinal importante.8 Medidas simples, como el uso de la dosis más baja durante cortos períodos de tiempo cuando sea posible, prevendrán algo de la toxicidad relacionada con los AINES. Los inhibidores selectivos de la COX-2 también reducirán los eventos adversos gastrointestinales en comparación con los AINES no selectivos. La terapia con inhibidores de la bomba de protones es eficaz y tiene un perfil de efectos adversos aceptable en comparación con el misoprostol.8 2.2.3. Baccharis latifolia a) Características generales de Baccharis latifolia El género Baccharis pertenece a la familia Asteraceae, que representa una de las familias de angiospermas con más de 1500 géneros y más de 20000 especies. Esta familia es reconocida en el Perú por presentar alrededor de 245 géneros y 1530 especies. El género Baccharis es exclusivamente americano y presenta 250 especies, 70 de las cuales están presentes en el Perú y 20 de estas son endémicas. La mayor importancia del género está dada por el número de especies y en que las mismas, son elementos casi constantes de la vegetación de cualquier área estudiada. Por otra parte, existen entre ellas 25 malezas importantes, así como también, especies tóxicas o sospechosas de causar intoxicaciones al ganado. 38 Baccharis latifolia (Figura 6) es una especie espontánea que crece en las riberas de los ríos. 38 Figura 6. Baccharis latifolia Fuente: Loja et al. (2017).38 Baccharis latifolia, comúnmente conocida como "Chilca", es una planta nativa de América del Sur y ampliamente distribuida en la región andina que se extiende desde Mérida (Venezuela) hasta Tucumán (Argentina) Incluyendo Colombia, que crece en los trópicos, con temperaturas entre templado y frío templado. 38 26 En el Perú abunda en los departamentos de Amazonas, Ancash, Arequipa, Ayacucho, Cajamarca, Cusco, Huánuco, Huancavelica, Junín, Lima y Piura. Es una planta dioica arbustiva de 1 a 2 metros de altura. Presenta tallo cilíndrico, estriado longitudinalmente; hojas simples, alternas, pecioladas, con limbo aovadolanceolado; capítulo en cimas corimbosas y aquenio cilíndrico.39 b) Descripción Taxonómica de Baccharis latifolia A continuación, la representación botánica de Baccharis latifolia estudiada y calificada como Baccharis latifolia (Ruíz & Pav) Pers y tiene la siguiente posición taxonómica, según el sistema de clasificación de Cronquist (1981):39 Reino: Plantae Phylum: Magnoliophyta Clase: Magnoliopsida Orden: Asterales Familia: Asteraceae Género: Bacharis Especie: Baccharis latifolia Nombre común: Chilca c) Estudio fitoquímico de Baccharis latifolia De los pocos estudios realizados sobre B. latifolia se encuentra reportado principalmente compuesto terpénicos y/o esteroidales (Figura 7). Para destacar, se han reportado compuestos como alfa-felandreno, canfeno y óxido de cariofileno, terpinen-4-ol y γ –gurjuneno. De extracciones a partir de raíz se han aislado cuatro compuestos: uno derivado de timol y tres 27 sesquiterpenos: germacreno D, escualeno y un sesquiterpeno sustituido altamente oxigenado, y de las hojas se aislaron siete compuestos, entre los que se cuentan diterpenos de núcleo labdano y sesquiterpenos de núcleo germacreno. 40 Los aceites esenciales han sido obtenidos de las hojas de varias especies del género, los cuáles han servido para propósitos taxonómicos, predominando de forma constante la ocurrencia de sesquiterpenos especialmente de aquellos de la ruta del germacreno, mientras que monoterpenos son más bien dependientes de factores estacionales. 40 Figura 7. Estructuras químicas en Baccharis latifolia Fuente: Prada J. et al. (2016).40 La caracterización fitoquímica de extractos de etanol de B. latifolia de Bolivia fueron esterol, terpenos, flavonoides y saponinas. Los compuestos encontrados en las hojas fueron gallotaninos, leucoantocianidinas, compuestos fenólicos, alcaloides, cumarinas, esteroides, triterpenos, lactonas 28 sesquiterpénicas, flavonoides y aceites esenciales, por ejemplo, limoneno como el principal monoterpeno, beta- cubebenos, y d-cadineno. 41 d) Propiedades farmacológicas de Baccharis latifolia Los aceites esenciales obtenidos de B. latifolia han mostrado una actividad antimicrobiana interesante contra la bacteria Staphylococcus aureus y también una buena actividad contra los hongos Trichophytum rubrum y Trichophytum mentagrophytes con una concentración minima inhibitoria (CMI) de 31,25 y 62,5 μg/mL respectivamente y actividad moderada contra Aspargillus fumigatus (CMI = 157,4 ug/mL). Estaban inactivos contra las bacterias gramnegativas Pseudomonas aeruginosa, K. pneumoniae, P. vulgaris, E. coli, S. typhimurium y bacterias Gram-positivas Enterococcus faecalis y S. aureus. 41 El extracto de metanol de las hojas de B. latifolia inhibe la producción de especies reactivas de oxígeno] también exhibe actividad antiinflamatoria in vitro e in vivo generalmente en forma de infusión o cataplasma. 41 Los extractos de etanol de B. lafitfolia no tienen propiedades antiproliferativas en la célula Cac0-2. El extracto de diclorometano proporciona actividad antiinflamatoria a dosis de 300 mg/kg cuando se usa el modelo de inhibición del edema del oído de ratón. 41 Los extractos de hexano y diclorometano de B. latifolia exhibieron actividad inhibitoria en COX-1 con porcentajes más altos que los presentados por el medicamento de referencia indometacina (100%), con un efecto significativo en la liberación de LTC4. El efecto inhibitorio sobre COX-2 fue evidente con el hexano, el diclorometano y los extractos acuosos en 98,8%, 100% y 98,1%, respectivamente y similares a los del fármaco de referencia. 41 29 El extracto de metanol de B. latifolia tuvo un efecto inhibitorio del 55% sobre las especies reactivas al oxígeno en la producción de neutrófilos humanos estimulados con forbol-12-miristato-13-acetato. 41 El extracto de etanol de B. latifolia muestra una actividad antiproliferativa significativa contra líneas celulares de Hep3B, HepG2, PLC PFR 5, SNU- 182 y prueba de hepatocitos humanos primarios con un IC50 de 10,8 ± 4,6; 33,3 ± 3.4; 24,3 ± 24,3; 20,1 ± 2,2 mg/mL, respectivamente. 41 El extracto de acetona (200 mg/mL) tiene un porcentaje de inhibición de 82 ± 3 y 89 ± 2 contra las líneas celulares de cáncer de piel y lengua. 41 e) Usos tradicionales de Baccharis latifolia Esta especie tiene importantes usos en la medicina tradicional, principalmente en los pueblos de América. Es usada en cocimiento, en virtud de reducir la inflamación de las articulaciones. 40 Propiedades analgésicas/antiinflamatoria útiles para adormecer nervios y tendones, facilitando de este modo el tratamiento de huesos dislocados. 40 En infusión de las hojas para el dolor de estómago causado por el frio. La cocción de hojas, tallos e inflorescencias es un tónico antidiabético y para enfermedades hepáticas. 40 Se usan las hojas molidas en cataplasma para torceduras, luxaciones y hernias, pues son eficaces para desinflamar y fortificar las áreas afectadas. 40 La cataplasma de hojas secas, molidas con grasa (formando una pomada) es útil para cicatriza sin provocar infección, permitiendo el cierre de las heridas con mayor facilidad. También se usa como analgésico contra dolores reumáticos y de la cintura. 40 30 f) Toxicidad Baccharis latifolia El uso de B. latifolia es tóxico en altas dosis. Los estudios de toxicidad aguda realizados en el Departamento de Farmacia de la Universidad Nacional de Colombia revelaron una ligera depresión y heces blandas. No se observan cambios significativos en el aumento o pérdida de peso o cambios patológicos en los animales que recibieron el extracto. El estudio de toxicidad oral subaguda en ratas no mostró mortalidad, pero sí cambios en el peso relativo de los órganos como el bazo y los riñones, y la lesión del tejido renal sugiere una ligera respuesta tóxica. 41 2.3. Definición de Términos Básicos - Ácido Acetil Salicílico (Aspirina): La aspirina acetila la ciclooxigenasa e inhibe irreversiblemente la enzima ciclo oxigenasa-1 (COX-1). Los polimorfismos genéticos del gen COX-1 pueden afectar la inhibición inducida por la aspirina de la síntesis de prostaglandinas, lo que eventualmente puede provocar el desarrollo de úlcera péptica.43 - Ácido gástrico: Es un líquido digestivo formado en el estómago y está compuesto de ácido clorhídrico (HCl), cloruro de potasio (KCl) y cloruro de sodio (NaCl). El ácido juega un papel clave en la digestión de las proteínas, al activar las enzimas digestivas y al desentrañar las proteínas ingeridas para que las enzimas digestivas rompan las largas cadenas de aminoácidos. El ácido gástrico es producido por células en el revestimiento del estómago, que se acoplan en sistemas de retroalimentación para aumentar la producción de ácido cuando sea necesario. 44 - Antiinflamatorios no esteroideos (AINES): Los AINES inducen lesiones de la mucosa por varios mecanismos. La mayoría de los AINES son ácidos débiles y se convierten en protones y cruzan las membranas lipídicas para ingresar a las células epiteliales cuando se exponen al jugo ácido gástrico (pH 2). En la célula epitelial (pH 7,4), los AINES se ioniza y libera su H+ y no puede 31 atravesar la membrana lipídica y queda atrapado. Esto conduce al desacoplamiento de la fosforilación oxidativa, lo que lleva a una disminución de la producción de energía mitocondrial, una integridad celular reducida y una mayor permeabilidad celular.9 - Fitoquímicos: Los fitoquímicos son químicos vegetales no nutritivos que tienen propiedades protectoras o preventivas de enfermedades. Son nutrientes no esenciales, lo que significa que el cuerpo humano no los necesita para mantener la vida. Es bien sabido que las plantas producen estos químicos para protegerse, pero investigaciones recientes demuestran que también pueden proteger a los humanos contra las enfermedades. Algunos de los fitoquímicos conocidos son el licopeno en los tomates, las isoflavonas en la soja y los flavonoides en las frutas.10 - Helicobacter pylori: Es una bacteria en forma de espiral que crece en el tracto digestivo y puede estar presente en más de la mitad de la población mundial. Infecta el estómago durante la infancia. 45 - Indometacina: La indometacina surgió como un antiinflamatorio no esteroideo (AINE) extremadamente potente durante un esfuerzo masivo por encontrar medicamentos antiinflamatorios y analgésicos efectivos. Derivados del ácido acético. La indometacina fue probablemente el más potente de estos compuestos y uno de los primeros en participar en ensayos clínicos. 46 - Mucosa gástrica: El moco forma una capa protectora sobre la mucosa gástrica. La mucosa gástrica, contiene principalmente agua y pequeñas cantidades de electrolitos y glucoproteínas de mucina. Las glucoproteínas de mucina hacen que la mucosidad sea un gel viscoso. El principal estímulo fisiológico para la liberación de moco es la acetilcolina. El moco proporciona lubricación para el paso de los alimentos, protegiendo así la mucosa del estrés mecánico. El moco también contiene bicarbonato, que mantiene un pH casi normal en la superficie de la mucosa gástrica.44 32 2.4.Hipótesis H1: El extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” tiene efecto antiulceroso en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina H0: El extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” no tiene efecto antiulceroso en ratas con inducción de lesiones gástricas por indometacina 33 3. METODOLOGÍA 3.1. Tipo de Investigación De acuerdo a la finalidad del estudio es de tipo analítica debido a que presenta una relación causa-efecto. Desde la secuencia de la temporalidad es transversal porque son útiles para obtener una medición general tal como está en el momento del estudio. Están diseñados para estudiar algún fenómeno tomando una sección transversal de él a la vez. Dichos estudios son transversales con respecto tanto a la población de estudio como al momento de la investigación. 49 Es experimental, la misma tiene el propósito de estudiar o demostrar las propiedades clínicas o farmacológicas de sustancias, sus efectos secundarios y establecer su eficacia o seguridad. 49 3.2. Nivel de Investigación Explicativo: Tiene por propósito de hallar una relación de explicación o casualidad entre las variables de estudio. No sólo encamina detallar o acercarse a un problema, sino que intenta encontrar las causas del mismo. 49 3.3. Diseño de la Investigación El diseño de elección fue experimental, porque el investigador cambia o asigna valores de forma deliberada a variables independientes de manera planificada para determinar efectivamente su efecto en una o más variables dependientes. 50 Se realizó según el método modificado de Sahoo et al.51 para este ensayo los animales de experimentación fueron sometidos a acondicionamiento en el ambiente del laboratorio por una semana: condiciones de ciclo de luz – día de 12 horas, temperatura de 22 – 26 ºC, agua y alimentos ad libitum. Se les privó de agua y alimentos 18 horas antes del inicio del ensayo. Se formaron 6 grupos de cada uno con 5 animales los que fueron sometidos a los siguientes tratamientos 34 seleccionados adecuadamente con el extracto etanólico de Baccharis latifolia (EEBL): Grupo 1 (grupo control) suero fisiológico 4 mL/kg Grupo 2 (control positivo) indometacina 80 mg/kg + omeprazol 20mg/kg Grupo 3 (control negativo) indometacina 80 mg/kg Grupo 4 (grupo tratamiento 1) indometacina 80 mg/kg + EEBL 100 mg/kg Grupo 5 (grupo tratamiento 2) indometacina 80 mg/kg + EEBL 200 mg/kg Grupo 6 (grupo tratamiento 3) indometacina 80 mg/kg + EEBL 400 mg/kg 3.4. Área de Estudio Se llevó a cabo en la Universidad María Auxiliadora, Av. Canto Bello 434 del distrito de San Juan de Lurigancho. Se realizó la prueba de cualitativa, análisis fitoquímico y hallazgos de metabolitos secundarios, así también el tratamiento antiulcerosos del extracto de las hojas de Baccharis latifolia en el laboratorio de la institución. 3.5. Población y muestra: criterios de inclusión y exclusión 3.5.1. Población Animal: ratas machos obtenidos del bioterio del Instituto Nacional de Salud, ubicado en el distrito de Chorrillos, provincia y región de Lima. Vegetal: se consideró un total de 10 kilogramos de hojas frescas Baccharis latifolia “chilca” procedente del Distrito de Yauli, Provincia de Jauja y Departamento de Junín a 3580 m.s.n.m. 3.5.2. Muestra La selección de los grupos fue constituida por la población total del número de animales, ratas machos de 12 semanas de edad, con un peso entre 200 ± 10 g, divididos en seis grupos (cada grupo constituido por 5 animales). 35 a) Criterios de inclusión - Ratas albinas machos de la cepa Holtzman - Ratas albinas libre de manipulación o investigaciones anteriores - Ratas albinas mayores de tres meses de nacimiento b) Criterios de exclusión - Ratas albinas machos que presentaron alguna enfermedad o que sobrepasaron el peso promedio (200 ± 10 g). - Ratas albinas procedentes de otras cepas (Sprague Dawley) - Ratas albinas menores de 12 semanas de edad 3.6. Variables y Operacionalización de variables Variable Indicador Dimensión Valor Escala de Dependiente medición - Grado de inflamación. - Normal. 0 - Bandas hemorrágicas - Leve. 1 Actividad - % de inhibición. - Moderada 2 antiulcerosa Ordinal - Número de lesiones - Severa. 3 - Número de ulceras Variable Indicador Dimensión Valor Escala de Independiente medición 100 mg/kg 100 Extracto etanólico de 200 mg/kg 200 las hojas de Baccharis Dosificación oral 400 mg/kg 400 Ordinal latifolia “chilca” 36 3.7. Instrumentos de recolección de datos Están conformadas por la ficha de observación y de datos obtenidos durante el tratamiento. Los formatos de los instrumentos de recolección de datos están adjuntados en los anexos. 3.8. Validación de los instrumentos de recolección de datos La construcción del instrumento fue diseñada por los autores, con base en la adaptación y discusión de diversos estudios similares a la investigación. Los instrumentos fueron validados por juicio de expertos, integrado por tres profesionales de la Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica de la Universidad María Auxiliadora, designados por el Dr. Rubén Cueva Mestanza, Coordinador del área. 3.9. Procedimientos de recolección de datos a) Animales de experimentación: Se desarrolló en 30 ratas machos, los cuales se dividieron en 6 grupos en los que cada grupo estaban formados por 5 ratas, tenían de peso promedio de 200 ± 10 g. Se acondicionaron en el laboratorio de la Universidad María Auxiliadora, previo a las 48 horas, con agua y alimento ad libitum, ciclo luz-día de 12h y temperatura de 22 a 26 °C. b) Recolección Las plantas fueron recolectadas durante el periodo de lluvias en las primeras horas de la mañana, en los campos de cultivo en el Distrito de Yauli Provincia de Jauja y Departamento de Junín, la recolección se hizo en bolsas de papel kraft y bolsas de plástico (con 1ml de etanol al 96% para evitar el cambio de color de la planta), con la finalidad de preservar intactos los metabolitos secundarios de la planta, aproximadamente se recolectó unos 10 kg de muestra fresca de Baccharis latifolia. Una muestra de la planta entera (raíz, tallo y hojas) se llevó al Museo de Histori a Natural de la Universidad Nacional San Marcos para su identificación taxonómica. 37 c) Selección La muestra se seleccionó cuidadosamente tomando en cuenta que las hojas estén enteras y libres de partículas de polvo manchas, insectos u hongos posteriormente se lavó con agua destilada y fueron ventiladas al medio ambiente. 38 d) Secado De las hojas seleccionadas se sometieron a un proceso de secado encima de papel Kraft, (para evitar el contacto directo son la superficie) en un área sombreada y ventilada a temperatura ambiente aproximadamente por dos semanas. 38 e) Molienda Una vez seco el material, se procedió a la molienda en un molino de granos previamente desinfectada, posteriormente se tamizó, para obtener un producto seco y molido que se almacenó en frascos de vidrio ámbar para su preparación. 38 f) Preparación del extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia El producto seco y molido de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” fueron maceradas en una solución etanólica al 96%, durante 14 días en un frasco de color ámbar a temperatura ambiente, con agitación constante durante los primeros siete días, después se procedió a filtrar la solución en papel filtro, los filtrados se concentraron a sequedad en una estufa, para finalmente obtener el extracto seco la muestra se guardó en un frasco de color ámbar con tapa, hasta el momento de su utilización. 38 g) Porcentaje del extracto El porcentaje de rendimiento se calcula mediante la siguiente expresión: Pf % EES = x 100 Pi Dónde: % EES: Porcentaje de extracción del extracto seco Pf: Peso final (extracto seco) Pi: Peso inicial (muestra molida) Reemplazando: 38 130 g % EES = x 100 = 8,6% 1500 g h) Pruebas de solubilidad Se tomaron aproximadamente 100mg del extracto seco de las hojas de Baccharis latifolia “chilca” en diferentes tubos y luego se agregó 1 ml de disolvente de diferente polaridad, originando que sea soluble en agua destilada, metanol, etanol 40º, etanol 50º, etanol 70º, etanol 96º, acetona, acetato de etilo, éter etílico y cloroformo. Durante la extracción, los disolventes se difunden en el material de la planta sólida y se solubilizan compuestos con polaridad similar i) Determinación de metabolitos secundarios Se utilizó reacciones de coloración para determinar la presencia de los metabolitos secundarios del extracto seco etanólico de las hojas de Baccharis latifolia por análisis cualitativo. j) Inducción química de úlcera gástrica con indometacina De acuerdo al método modificado por Sabiu et al. (2015)52 se procedió a lo siguiente: - Las ratas fueron aclimatadas por una semana en jaulas metálicas con viruta de madera; en condiciones de temperatura y luminosidad estándar para disminuir el efecto del estrés, los alimentos y agua son administrados ad libitum, pero son sometidos a ayuno 24 horas antes del experimento. - Al inicio del experimento, se registró el peso de cada rata y la identificación de las mismas. - El extracto etanólico de Baccharis latifolia, fármaco de referencia (omeprazol 20mg/kg), suero fisiológico, se administró intragástricamente 60 minutos después de la administración oral de indometacina (80 mg/kg). - Se administró vía intragastrica los siguientes tratamientos. - La indometacina (80mg/kg) será disuelta en NaHCO3 al 4% se administrará por vía oral. 39 - Sesenta minutos después de la administración de la indometacina se administró los productos a evaluar. - Los animales fueron sacrificados 6 horas después de la administración de indometacina con una sobredosis de pentobarbital sódico (100 mg/kg) y los estómagos fueron abiertos por la curvatura mayor. Se removió el estómago intacto y se colocó el tejido en papel filtro humedecido en 0,9% NaCl diseccionándose el estómago a lo largo de la curvatura mayor. - Usando una jeringa con solución salina, se lavó y se extrajo el material residual del estómago, los estómagos se fijaron en una plancha porosa de tecnopor para su evaluación. - Las severidades de las lesiones gástricas fueron evaluadas considerando tres indicadores: inflamación, bandas hemorrágicas y número de ulceras. La inflamación por el grado de enrojecimiento se medirá como: 0 ausencia; 1 leve; 2 moderado; 3 severo, y las bandas hemorrágicas se observó de manera macroscópica y según la magnitud de la lesión observada en la mucosa gástrica (perdida de continuidad o rotura) fue calificada usando la escala de Alada modificada.53 Escala de Alada et al. (2008) modificada 53 Puntaje Característica 0 Normal 1 Leve (úlceras puntiformes < 1mm o micro-hemorragias 2 Moderada (2 o más úlceras hemorrágicas pequeñas) 3 Severa (úlceras grandes > 2mm de diámetro) - La obtención del porcentaje de inhibición de úlceras gástricas se calculó la puntuación total (la suma del puntaje total para todas las ratas del mismo grupo) y 40 el promedio de ambas escalas. El puntaje total se expresó en porcentaje de inhibición respecto al índice de ulceración del grupo control: % Inhibición = P. media de grupo control – P. media de grupo patrón X 100 Donde: P. media de grupo control P= puntaje obtenido en la evaluación macroscópica según escala. 3.10. Componente ético de la investigación La ética animal no son reglas estrictas que obligan a los investigadores a realizar investigaciones con animales de ciertas maneras, sino un espacio para promover la expresión de las obligaciones morales humanas hacia los animales utilizados en la investigación. Durante la investigación desarrollada, se evitó el dolor, sufrimiento y muerte prematura a las muestras en estudio. Para abordar esta dimensión ética, se abogó por el concepto de “3Rs”: Refinamiento (de métodos experimentales para minimizar daños y maximizar beneficios), Reducción (del número de animales utilizados) y Reemplazo (con métodos alternativos que no usan animales). 54 3.11. Procesamiento y análisis de datos En esta fase se aplicó el Programa Estadístico SPSS versión 21, año 2013 con el fin de procesar los datos, en cuanto a la clasificación, ordenamiento y codificación de datos, tabulación, presentación en tablas y figuras. Se aplicó el análisis de Kruskall Wallis de la varianza, debido a que los datos no cumplieron el supuesto de normalidad al evaluar la variable severidad de carácter ordinal, posteriormente la prueba de Games Howell (Análisis no paramétrico) para comparar las medias por grupo y determinar sus diferencias. Se consideró significativa una p<0,05, con intervalo de confianza al 95%. 41 4. RESULTADOS A continuación, se presentan los resultados obtenidos de acuerdo a los objetivos específicos formulados en la presente investigación, y considerando los indicadores se desarrolla el siguiente análisis de resultados. De acuerdo a la Tabla 1, los análisis de identificación fitoquímica preliminar por el método cualitativo, se logró identificar los siguientes constituyentes secundarios: flavonoides, compuestos fenólicos, alcaloides, triterpenoides/esteroides, azúcares reductores, aminoácidos saponinas, cumarinas y quinonas, estuvieron ausente los mucilagos/gomas Tabla 1. Identificación de metabólitos secundarios de Baccharis latifolia Reactivos Metabolitos Secundarios Resultados Shinoda Flavonoides + Cloruro Férrico Compuestos fenólicos + Dragendorff Alcaloides + Liebermann - Burchard Triterpenoides/esteroides + Acetato neutro de plomo Mucilagos/gomas - Felhing AyB Azúcares + reductores/glicósidos Ninhidrina Aminoácidos libres + Ácido sulfúrico Saponinas + Ensayo de Baljet Cumarinas + Bortranger Quinonas + Leyenda: Ausencia (-); Presencia (+) 42 Para el análisis de las características evaluadas se comprobó primero los supuestos de normalidad (Prueba de Kolmogorov-Smirnov) para el análisis de varianza (Prueba de Kruskall Wallis para casos no paramétricos o que no siguen una distribución normal) y luego de homogeneidad de varianzas (Prueba de Levenne). Luego cuando se encontró diferencias estadísticas entre tratamientos mediante el análisis de varianza, se ejecutó la Prueba de Games Howell para comparar los grupos experimentales al encontrarse que las varianzas no eran homogéneas, los detalles y valores de estas pruebas se muestran en el anexo (Información complementaria estadística). De acuerdo a la Tabla 2, referente al porcentaje de inhibición de las úlceras, las dosis de 100 y 200 mg/kg del extracto etanólico de Baccharis latifolia (EEBL) asociado a indometacina 80 mg/kg resultó estadísticamente diferente al tratamiento control (indometacina 80 mg/kg), por lo tanto son dosis eficaces en la inhibición de lesiones, las mismas diferencias significativas se aprecian para el número de lesiones gástricas (úlceras); mientras que el análisis de severidad basado en la escala de Alada, nos muestra que sólo el tratamiento de 200 mg/kg del extracto resultó efectivo en disminuir la severidad de las lesiones gástricas, no en el mismo grado que Omeprazol pero sí a diferencia de las otras dosis ensayadas, por lo que sí existe efecto antiulceroso (Figuras: 8, 9 y 10). 43 Tabla 2. Porcentaje de inhibición de lesiones gástricas y grado de severidad Tratamiento Número de Porcentaje de Severidad lesiones inhibición de (Grado) lesiones Suero fisiológico (4 mL/kg) 0 - - Indometacina 80 mg/kg + Omeprazol 20 mg/kg 0 100 0 Indometacina 80 mg/kg 24 - 2 Indometacina 80 mg/kg + Extracto 100 mg/kg 7 * 80 * 2 Indometacina 80 mg/kg + Extracto 200 mg/kg 2 * 94 * 1 * Indometacina 80 mg/kg + Extracto 400 mg/kg 23 37 2 Los valores se expresan como la media en seis observaciones *p < 0,05 (disminución en relación al control: Indometacina 80mg/kg) En la Figura 8, se observa que la indometacina 80 mg/kg + omeprazol 20 mg/kg inhibe las lesiones gástricas (bandas hemorrágicas) al 100%, el grado de severidad es nulo. La administración de solo indometacina 80 mg/kg no produjo ningún efecto farmacológico sobre los indicadores del estudio. Si comparamos con los resultados de la Tabla 2, son significativos los resultados a dosis de 200 mg/kg del EEBL en combinación indometacina 80 mg/kg solo dejando 2 lesiones gástricas latentes, si se equipara con los grupos de dosis a 100 y 400 mg/kg del EEBL donde las lesiones gástricas latentes son superiores. 44 30 25 20 15 10 * 5 * 0 0 0 Suero fisiológico Indometacina 80Indometacina 80Indometacina 80Indometacina 80Indometacina 80 (4mL/kg) mg/kg + mg/kg mg/kg + mg/kg + mg/kg + Omeprazol 20 Extracto 100 Extracto 200 Extracto 400 mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Grupos experimentales Figura 8. Número de lesiones gástricas por grupo experimental *p < 0,05 (disminución en relación al control: Indometacina 80mg/kg) 45 Número de lesiones gástricas En la Figura 9, el EEBL a partir de 200 mg/kg el porcentaje de inhibición de lesiones gástricas es 94 %, seguido de la dosis de 100 mg/kg era de 80%, entre tanto la dosis del EEBL de 400 mg/kg está representado por 37%. 120 * * 80 60 40 20 0 suero fisiológico Indometacina Indometacina Indometacina Indometacina Indometacina (4mL/kg) 80 mg/kg + 80 mg/kg 80 mg/kg + 80 mg/kg + 80 mg/kg + Omeprazol 20 Extracto 100 Extracto 200 Extracto 400 mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Grupos experimentales Figura 9. Porcentaje de inhibición de lesiones gástricas por grupo experimental *p < 0,05 (disminución en relación al control: Indometacina 80mg/kg) 46 Porcentaje de inhibición de lesiones gástricas En relación a la Figura 10, representados por el grado de severidad, la indometacina 80 mg/kg, indometacina 80 mg/kg + EEEBL 100 mg/kg e indometacina 80 mg/kg + EEEBL 400 mg/kg fue de 2, es decir tuvo consecuencias erosivas durante el tratamiento experimental. Sin embargo, el grado de severidad fue menor en 1, con el EEBL a 200 mg/kg, aunque indometacina 80 mg/kg + omeprazol 20 mg/kg no presento ningún grado de severidad. 2.5 2 1.5 * 1 0.5 0 suero fisiológico Indometacina Indometacina Indometacina Indometacina Indometacina (4mL/kg) 80 mg/kg + 80 mg/kg 80 mg/kg + 80 mg/kg + 80 mg/kg + Omeprazol 20 Extracto 100 Extracto 200 Extracto 400 mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Grupos experimentales Figura 10. Número de lesiones gástricas por grupo experimental *p < 0,05 (disminuciòn en relaciòn al control: Ind4o7metacina 80mg/kg) Grado de severidad 5. DISCUSIÓN En relación a los resultados de la Tabla 1, los hallazgos confirmaron que el extracto etanólico de Baccharis latifolia (EEBL) libera fitoquímicos diversos, como flavonoides, compuestos fenólicos, alcaloides, triterpenoides/esteroides, azúcares reductores, aminoácidos saponinas, cumarinas y quinonas. Es posible que los efectos combinados de diferentes componentes bioactivos de la planta sean responsables de la acción antiulcerogénica, que puede deberse a inhibición de la generación de radicales libres, acción antinflamatoria y la protección de la barrera mucosa. Estos resultados posibilitan su capacidad antiulcerosa, detallado con las investigaciones de Abebaw et al. (2017), afirmando que los flavonoides aumentarían el contenido de prostaglandina de la mucosa, actúan como captadores de radicales libres e inhiben la H+/K+-ATPasa; las saponinas pueden activar los factores protectores de la membrana mucosa, y los taninos hacen que la capa más externa de la mucosa sea menos permeable y previenen el desarrollo de úlceras debido a sus efectos precipitantes de proteínas y vasoconstricción, en cuanto a los triterpenos se encuentran entre los principios activos citoprotectores para los cuales se ha confirmado ampliamente la eficacia antiulcerogénica 55, entre tanto en la investigación de Wang et al. (2017), informa que los alcaloides tienen la capacidad de inhibir úlceras y es mayor que el grupo tratado con omeprazol, además, aumentan significativamente el factor de crecimiento epidérmico y aceleraron la curación de las úlceras gástricas 56, los taninos pueden prevenir el desarrollo de úlceras debido a sus efectos precipitantes de proteínas y vasoconstricción, la acción astringente puede ayudar a precipitar micro proteínas en el sitio de la úlcera, formando así una capa impermeable y protegiendo la mucosa subyacente de toxinas y otros irritantes (Mabeku et al; 2017) 57, mientras que Sepulveda et al. (2016), confirma que las cumarinas naturales muestran actividad antiulcerosa en el modelo de lesión gástrica inducida por etanol/HCl en ratones fue tan activa como el lansoprazol a 20 mg/kg y redujeron las lesiones gástricas en un promedio del 76%.58 Del mismo modo, Dos Reis Lívero et al. (2016), evaluaron el extracto hidroetanólico de Baccharis trimera (EHBT) redujó significativamente el área de la lesión y el estrés 48 oxidativo inducido por el consumo agudo y crónico de etanol aceleró la curación de las úlceras gástricas crónicas en ratas, lo que probablemente contribuyó a la eficacia de los flavonoides en el EHBT, puede ser parcialmente atribuible a la inhibición de la generación de radicales libres y la posterior prevención de la peroxidación lipídica. 14 Estos estudios explicarían el efecto antiulceroso de los fitoconstituyentes encontrados en el EEBL pueden ser los posibles agentes en el tratamiento de las úlceras inducidas en ratas. Aunque no hay datos disponibles de estudios en humanos, los beneficios antiulcerogénicos de los ingredientes naturales se han demostrado bien en modelos animales. De acuerdo a la Tabla 2, referente al porcentaje de inhibición de las úlceras, las dosis de 100 y 200 mg/kg del EEBL asociado a indometacina 80 mg/kg resultó estadísticamente diferente al tratamiento control (indometacina 80 mg/kg), por lo tanto son dosis eficaces en la inhibición de lesiones, las mismas diferencias significativas se aprecian para el número de lesiones gástricas (úlceras); mientras que el análisis de severidad basado en la escala de Alada,19 nos muestra que sólo el tratamiento de 200 mg/kg del extracto resultó efectivo en disminuir la severidad de las lesiones gástricas, no en el mismo grado que omeprazol pero sí a diferencia de las otras dosis ensayadas, por lo que sí existe efecto antiulceroso de acuerdo a las Figuras 8, 9 y 10. Estos resultados están de acuerdo a los resultado De Barros et al. (2016), demostraron el efecto antiulceroso del extracto metanólico de las hojas de Solidago chilensis (Asteraceae) la cual fue capaz de disminuir la úlcera gástrica inducida por indometacina en ratas a una dosis de 100 mg/kg13 mientras tanto, Petrovic et al. (2008), con el extracto de la planta de Hieracium gymnocephalum (Asteraceae) en la dosis más alta probada (200 mg/kg) se administró concomitantemente con indometacina, el efecto antiinflamatorio aumentó ligeramente, pero las lesiones gástricas se redujeron significativamente al 44,1%,17 mientras tanto la actividad antiulcerosa, el EEBL a dosis de 200 mg/kg logró una inhibición de las lesiones gástricas del 94% (p <0,05), al comparar la dosis de 250 mg/kg del aceite esencial de Baccharis dracunculifolia disminuyó significativamente el índice y porcentaje de lesiones gástricas en 49 comparación con los grupos experimentales.16 Aunque Boeing et al. (2016), a partir del extracto de Vernonia condensata (Asteraceae) a dosis de 300 mg/kg exhibió actividad antiulcerosa y evitó lesiones gástricas inducidas por etanol o indometacina en ratas. 12 Diametralmente opuesto, a dosis menores investigados por Siddiqui et al. (2018) reporta que Mikania cordata (Asteraceae) 50 mg/kg produce mayor inhibición de la inflamación a nivel de úlceras inducidas al 72,80%.11 Da Silva et al. (2013), evaluaron el extracto etanólico de raíces de Arctium lappa (Asteraceae) en la curación de úlceras gástricas crónicas inducidas por ácido acético al 80% en ratas a dosis de 1, 3, 10 y 30 mg/kg redujo el área de la lesión gástrica en 29,2%, 41,4%, 59,3% y 38,5%, respectivamente, y a 10 mg/kg promovió una regeneración significativa de la mucosa gástrica, promoviendo la regeneración de la mucosa gástrica dañada, probablemente a través de sus mecanismos antiulcerosos y antioxidantes.59 Referente a los 400 mg/kg del EEBL, no demostró una actividad antiulcerosa significativa, sin embargo, Borja (2013), demostró que el tratamiento con mayor eficacia fue el extracto hidroalcóholico de las hojas de Mutisia acuminata (Asteraceae) a dosis de 400mg/kg observándose 78 % de inhibición de ulcera gástrica. 22 En la presente investigación se ha demostrado el efecto antiulceroso al evaluar el EEBL mostró una reducción significativa en la lesión de la mucosa, lo que indicó que pueden depender de la acción sinérgica de todos los compuestos presentes como los flavonoides podrían haber contribuido a las propiedades antiulcerosas de esta planta, incluso pudiendo eliminar agentes dañinos de la mucosa gástrica conferidos por su prominente actividad antioxidante así como con el efecto estimulante sobre los niveles de prostaglandina E2 (PGE2) y prostaglandina I2 (PGI2) de la mucosa gástrica asimismo una disminución resultante en la actividad de la fosfolipasa A2 sérica (sPLA2) y un declive en los niveles de mieloperoxidasa (MPO),60 asimismo existe la probabilidad de reponer el nivel de óxido nítrico (NO) gástrico y desempeñar un papel en el mantenimiento de la integridad gástrica, aumentando la citoprotección y mejorar el efecto antiulceroso, por lo tanto, el EEBL puede ejercer su efecto antiulcerogénico 50 mediante el aumento de NO endógeno en la mucosa gástrica. 61,62 Quizás conferidos por los fitoconstituyentes antioxidantes presentes en la muestra de estudio. En la presente investigación, observamos que el tratamiento con el extracto etanólico de Baccharis latifolia protege la mucosa de las ratas contra el daño gástrico de indometacina, lo que sugiere que exhiben un efecto antiulceroso significativo. 51 6. CONCLUSIONES - El examen fitoquímico confirma la presencia de los compuestos como flavonoides, compuestos fenólicos, alcaloides, triterpenoides/esteroides, azúcares reductores, aminoácidos saponinas, cumarinas y quinonas, son de particular interés, ya que han sido reportados por su capacidad de reducir la gravedad de las lesiones de las bandas hemorrágicas, disminuir la inflamación y aumentar la tasa de curación de heridas en roedores. Estas acciones pueden atribuirse a cualquiera de los componentes activos o como resultado de efectos sinérgicos. - Los resultados mostraron efectos protectores contra las erosiones gástricas inducidas por la indometacina en modelos animales por Baccharis latifolia como lo demuestra la ausencia de daño a la mucosa a la dosis de 100 mg / kg y 200 mg/kg fue estadísticamente diferente a 400 mg/kg, y puede atribuirse a sus actividades contra el daño hemorrágico e inflamación a nivel gástrico. Los componentes activos pueden ser responsables de las propiedades antiulcerosas y proteger la mucosa gástrica. - La dosis de 100 mg/kg del extracto etanólico de Baccharis latifolia (asociado a indometacina 80 mg/kg), el nivel de inhibición de lesiones gástricas fue 80% dejando latente 7 lesiones, entre tanto a 200 mg/kg está representado por 94% con 2 lesiones pendientes, aunque con menor grado de severidad, en relación a dosis de 400 mg/kg inhibió las lesiones gástricas fue 37%, fue la que tuvo menor acción antiulcerosa y mayor número de lesiones gástricas que registró durante el tratamiento. - Sobre la base de los resultados de este estudio, se indica claramente que el extracto etanólico de Baccharis latifolia, a partir de 200 mg/kg el porcentaje de inhibición de lesiones gástricas es 94 %, seguido de la dosis de 100 mg/kg con el 80%, entre tanto la dosis del EEBL de 400 mg/kg está representado por 37%. 52 7. RECOMENDACIONES - Los investigadores deben tener un interés más activo en la evaluación de los medicamentos a base de plantas medicinales para determinar la posible actividad antiulcerosa y la estandarización para ser clínicamente efectivos y competitivos a nivel mundial. Adicionalmente la estandarización es indispensable para mantener una calidad reproducible en la evaluación biológica. - La escasez de estudios en humanos con plantas medicinales, en la parte superior de la pirámide de medicina basada en la evidencia, ralentiza estos hallazgos prometedores, lo que requiere, en un futuro próximo, más ensayos clínicos para respaldar e incluso validar los datos preclínicos. - Se recomienda trabajar más para dilucidar los mecanismos moleculares que podrían ser responsables de esta nueva actividad de Baccharis latifolia. 53 8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Chung KT, Vishalkumar GS. Perforated peptic ulcer - an update. 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Desde la hojas de Baccharis latifolia etanólico de las hojas de antiulceroso en ratas con Independiente secuencia de la temporalidad es transversal porque son “chilca” en ratas con Baccharis latifolia “chilca” inducción de lesiones Extracto etanólico de las útiles para obtener una medición general tal como está inducción de lesiones en ratas con inducción de gástricas por indometacina hojas de Baccharis latifolia en el momento del estudio. Es experimental, la misma gástricas por indometacina? lesiones gástricas por “chilca tiene el propósito de estudiar o demostrar las propiedades indometacina. H0: El extracto etanólico de clínicas o farmacológicas Problemas específicos Objetivos específicos las hojas de Baccharis Nivel de investigación 1. ¿Cuáles son los 1. Identificar los latifolia “chilca” no tiene Explicativo: Tiene por propósito de hallar una relación metabolitos secundarios metabolitos secundarios efecto antiulceroso en ratas de explicación o casualidad entre las variables de presentes en el extracto presentes en el extracto con inducción de lesiones estudio. No sólo encamina detallar o acercarse a un etanólico de las hojas de etanólico de las hojas de gástricas por indometacina problema, sino que intenta encontrar las causas del Baccharis latifolia “chilca” Baccharis latifolia “chilca”. mismo. con efecto antiulceroso? Diseño de investigación 2. ¿Cuál es la dosis que 2. Evaluar dosis de 100, El diseño de elección fue experimental, porque el tiene la mayor eficacia del 200 y 400 mg/kg del investigador cambia o asigna valores de forma extracto etanólico de las extracto etanólico de las deliberada a variables independientes de manera hojas de Baccharis latifolia hojas de Baccharis latifolia planificada para determinar efectivamente su efecto en “chilca” en ratas con “chilca” en ratas con una o más variables dependientes. inducción de lesiones inducción de lesiones gástricas por indometacina? gástricas por indometacina 64 3. ¿Qué porcentaje de 3. Evaluar el porcentaje de Población inhibición de ulceras tiene inhibición de los Ratas machos obtenidos del bioterio del Instituto el extracto etanólico de las indicadores (bandas Nacional de Salud, ubicado en el distrito de Chorrillos, hojas de Baccharis latifolia hemorrágicas, inflamación Región Lima. “chilca” en ratas con y ulceras) del extracto Muestra inducción de lesiones etanólico de las hojas de La selección de los grupos fue constituida por la gástricas por indometacina? Baccharis latifolia “chilca” población total del número de animales, ratas machos de . en ratas con inducción de 12 semanas de edad, con un peso entre 200 ± 10 g, lesiones gástricas por divididos en seis grupos (cada grupo constituido por 5 indometacina. animales). Procesamiento y análisis de datos Programa Estadístico SPSS versión 21, con el fin de procesar los datos, en cuanto a la clasificación, ordenamiento y codificación de datos, tabulación, presentación en tablas y figuras. Se aplicó el análisis de Kruskall Wallis de la varianza, debido a que los datos no cumplieron el supuesto de normalidad al evaluar la variable severidad de carácter ordinal, posteriormente la prueba de Games Howell (Análisis no paramétrico) para comparar las medias por grupo y determinar sus diferencias. 65 9.2. Instrumento de recolección de datos Diseño de investigación Grupo Concentración Observación Biológico 1 Blanco Suero fisiológico (4 mL/kg) 5 ratas - Indometacina 80mg/kg + Control positivo 5 ratas 2 Omeprazol (20mg/kg) - Control negativo Indometacina 80mg/kg 5 ratas 3 - Indometacina 80mg/kg+ Tratamiento 1 5 ratas 4 EEBL 100 mg/kg - Indometacina 80mg/kg + 5 Tratamiento 2 5 ratas EEBL 200 mg/kg - 6 Tratamiento 3 Indometacina 80mg/kg+ 5 ratas EEBL 400 mg/kg - 6646 Datos obtenidos de la investigación Especies Lesiones Gástricas Grup o Identificació Peso Tratamiento/ dosis Bandas Nº de Índice de Inflamación n Hemorrágicas ulceras ulceración 270 g 1 Suero fisiológico (4 ml/kg) 0 0 0 - 276 g 2 Suero fisiológico (4 ml/kg) 0 0 0 - 285 g 3 Suero fisiológico (4 ml/kg) 0 0 0 G-1 - 267 g 4 Suero fisiológico (4 ml/kg) 0 0 0 - 297 g 5 Suero fisiológico (4 ml/kg) 0 0 0 - 279 g Promedio de grupo: 0 0 0 - 273 g 1 Indometacina 80mg/kg + 0 0 0 - Omeprazol (20 mg/kg) 262 g 2 Indometacina 80mg/kg + 0 1 0 - Omeprazol (20 mg/kg) 277 g 3 Indometacina 80mg/kg + 0 1 0 - G-2 Omeprazol (20 mg/kg) 263 g 4 Indometacina 80mg/kg + 0 1 0 - Omeprazol (20 mg/kg) 280 g 5 Indometacina 80mg/kg + 0 1 0 - Omeprazol (20 mg/kg) 271 g Promedio de grupo: 0 0.8 0 - 242 g 1 Indometacina 80mg/kg 2 2 23 - 268 g 2 Indometacina 80mg/kg 1 2 21 - 232 g 3 Indometacina 80mg/kg 2 2 36 G-3 - 232 g 4 Indometacina 80mg/kg 0 1 12 - 235 g 5 Indometacina 80mg/kg 3 3 29 - 241.8 g Promedio de grupo: 5.6 7.6 99.8 - 298 g 1 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 100 mg/kg 1 2 14 - 304 g 2 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 100 mg/kg 1 2 7 - 309 g 3 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 100 mg/kg 2 1 8 G-4 - 313 g 4 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 100 mg/kg 0 1 5 - 293 g 5 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 100 mg/kg 0 1 2 - 303.4 g Promedio de grupo: 2.4 6.2 34.4 - 329 g 1 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 200 mg/kg 1 0 7 - 312 g 2 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 200 mg/kg 0 0 0 - 335 g 3 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 200 mg/kg 1 0 0 G-5 - 250 g 4 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 200 mg/kg 0 1 1 - 296 g 5 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 200 mg/kg 0 0 2 - 304.4 g Promedio de grupo: 0.4 0.2 8.4 - 352 g 1 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 400 mg/kg 1 2 19 - 300 g 2 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 400 mg/kg 2 1 23 - 326 g 3 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 400 mg/kg 0 1 10 G-6 - 308 g 4 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 400 mg/kg 2 2 34 - 323 g 5 Indometacina 80mg/kg+ EEBL 400 mg/kg 2 2 27 - 321.8 g Promedio de grupo: 5.4 6.4 91.4 - 6657 Prueba de solubilidad del extracto etanólico de las hojas de Baccharis latifolia Reactivos Resultados Agua destilada + Metanol + Etanol 40º + Etanol 50º + Etanol 70º + Etanol 96º + Acetona + Acetato de Etilo + Éter Etílico + Cloroformo + Leyenda: Ausencia (-); Positiva (+). 6668 9.3. Información complementaria estadística Determinación de la normalidad en la distribución del número de ulceras según grupo de experimentación Hipótesis Nula (Ho): La distribución del número de ulceras por grupo de experimentación es de tipo normal. Hipótesis alterna (H1): La distribución del número de ulceras por grupo de experimentación NO es de tipo normal. Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra Número de úlceras N 30 Parámetros normalesa,b Media 9,33 Desv. Desviación 11,604 Máximas diferencias Absoluto ,236 extremas Positivo ,236 Negativo -,211 Estadístico de prueba ,236 Sig. asintótica(bilateral) ,000 c a. La distribución de prueba es normal. b. Se calcula a partir de datos. c. Corrección de significación de Lilliefors. Nivel de significancia: 95%; alfa (α) = 0.05. p-valor de la prueba de Kolmogorov-Smirnov: 0.000 El p-valor es menor que alfa (α); por lo tanto se rechaza la Ho y se acepta la alterna (H1). Conclusión: - Los datos no se distribuyen de manera normal. - Por tal motivo un Análisis de Varianza (ANOVA) pierde significado estadístico. - Es necesario realizar pruebas de comparación no paramétricas (Kruskall-Wallis) para confirmar posibles diferencias entre grupos. 679 Determinación de la homogeneidad entre las varianzas relativas al promedio del número de ulceras según grupo de experimentación Hipótesis Nula (Ho): Las varianzas en el número de ulceras por grupo de experimentación son homogéneas. Hipótesis alterna (H1): Las varianzas en el número de ulceras por grupo de experimentación NO son homogéneas. Prueba de homogeneidad de varianzas Estadístico de Levene gl1 gl2 Sig. Número de Se basa en la media 4,092 5 24 ,008 ulceras Se basa en la mediana 3,412 5 24 ,018 Se basa en la mediana y con gl 3,412 5 11,519 ,040 ajustado Se basa en la media recortada 4,062 5 24 ,008 Nivel de significancia: 95%; α = 0.05. p-valor de la prueba de Levene: 0.008 El p-valor es menor que α; por lo tanto, se rechaza la Ho y se acepta la alterna (H1). Conclusión: - Las varianzas en el número de ulceras por grupo de experimentación NO son homogéneas - Por tal motivo un análisis Post-Hoc de Tukey pierde significando estadístico. - En cambio, se realizará un análisis Post-Hoc de Games-Howell. 6780 Análisis no paramétrico de Kruskal-Wallis del número de ulceras según grupo de experimentación. Hipótesis Nula (Ho): La distribución del número de ulceras es la misma entre los grupos de experimentación. Hipótesis alterna (H1): La distribución del número de ulceras NO es la misma entre los grupos de experimentación. Nivel de significancia: 95%; α = 0.05. p-valor de la prueba de Kruskal-Wallis: 0.000 El p-valor es menor que α; por lo tanto, se rechaza la Ho y se acepta la alterna (H1). Conclusión: - Si hay diferencias en la distribución del número de ulceras gástricas entre los grupos de experimentación. Por lo tanto, también se concluye que hay diferencias del promedio del número de ulceras gástricas entre los grupos de experimentación. - Es necesario evaluar si esas diferencias se deben a los tratamientos empleados (extractos de la planta, omeprazol). Para ello se realizará un análisis Pos-Hoc. 6791 Análisis Post-Hoc del número de ulceras según grupo de experimentación. Se realizará la prueba de Games-Howell debido a que las varianzas del número de ulceras entre grupos de experimentación resultaron no ser homogéneas (Item 4 del reporte estadístico). Extrayendo los resultados más importantes del cuadro de Games-Howell. Grupo de experimentación (I) Grupo de experimentación (J) Sig. Interpretación Suero fisiológico (4 Indometacina 80 mg/kg + EEBL 100 mg/kg 0,116 Similitud estadística mL/kg) Indometacina 80 mg/kg + EEBL 200 mg/kg 0,668 Similitud estadística Indometacina 80 mg/kg Indometacina 80 mg/kg + EEBL 100 mg/kg 0,116 Similitud estadística + Omeprazol 20 mg/kg Indometacina 80 mg/kg + EEBL 200 mg/kg 0,668 Similitud estadística Indometacina 80 mg/kg Indometacina 80 mg/kg + EEBL 400 mg/kg 1 Similitud estadística Suero fisiológico (4 mL/kg) 0,116 Similitud estadística Indometacina 80 mg/kg + Omeprazol 20 Indometacina 80 mg/kg 0,116 Similitud estadística mg/kg + EEBL 100 mg mg/kg Indometacina 80 mg/kg + EEBL 200 mg/kg 0,346 Similitud estadística Indometacina 80 mg/kg + EEBL 400 mg/kg 0,092 Similitud estadística Suero fisiológico (4 mL/kg) 0,668 Similitud estadística Indometacina 80 mg/kg Indometacina 80 mg/kg + Omeprazol 20 + EEBL 200 mg/kg mg/kg 0,668 Similitud estadística Indometacina 80 mg/kg + EEBL 100 mg/kg 0,346 Similitud estadística Indometacina 80 mg/kg Indometacina 80 mg/kg 1 Similitud estadística + EEBL 400 mg/kg Indometacina 80 mg/kg + EEBL 100 mg/kg 0,092 Similitud estadística Conclusión: - La cantidad de ulceras obtenidas luego del tratamiento con extracto etanólico de Baccharis latifolia en concentraciones de 100 mg/kg y 200 mg/kg es estadísticamente la misma comparada con el tratamiento de Omeprazol. Ambos tratamientos son similares estadísticamente a la cantidad de ulceras obtenidas de un estomago sano (Suero fisiológico 4 mL/kg). - La cantidad de ulceras obtenidas luego del tratamiento con extracto etanólico de Baccharis latifolia en concentración de 400 mg/kg es estadísticamente la misma comparada con un estomago enfermo de ulcera gástrica (Indometacina 80 mg/kg). 702 9.4. Identificación taxonómica 56 73 Validación de los instrumentos 74 75