INFORME FINAL DE INVESTIGACIÓN “EFECTO CICATRIZANTE DEL UNGÜENTO DE Dodonaea viscosa JACQ. CHAMISA EN RATONES Balb/C 53” Responsable del Estudio Dr. Ruben Eduardo Cueva Mestanza LIMA – PERÚ 2017 1 EFECTO CICATRIZANTE DEL UNGÜENTO DE Dodonaea viscosa Jacq. “Chamisa” EN RATONES Balb/C 53 RESUMEN Objetivos: Determinar el efecto cicatrizante del ungüento a base de extracto etanólico de las hojas de Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa”, en ratones Balb/c 53. Además determinar la concentración adecuada del ungüento a base de extracto etanólico de las hojas de Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa” y detectar si los metabolitos secundarios participan en forma conjunta en el efecto cicatrizante. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio tipo experimental, de nivel aplicativo, con siete grupos en total y una muestra de 56 ratones Balb/c 53. Se aplicó el método (tensiométrico y Vaisberg), el análisis del test de cicatrización se realizó mediante instrumentos de recolección de datos y finalmente, se utilizó el programa estadístico SPSS 24. Resultados: Se observó la variabilidad de las diferencias que existen entre los grupos de control y los tres tratamientos de concentración de Chamisa. Conclusión: se determinó que el ungüento del extracto etanólico de Dodonaea viscosa Jacq. “Chamisa” al 10% presenta actividad cicatrizante en un 75.42%. Se comprobó que el ungüento de Dodonaea viscosa Jacq. “Chamisa” 10%, tiene un mayor porcentaje de cicatrización en comparación con el control positivo, ungüento de Croton lechleri “Sangre de Drago” 10% (54.91% del test de cicatrización).La marcha fitoquimica detectada en el extracto etanólico de las hojas de Dodonaea viscosa Jacq.”Chamisa” contiene: Compuestos Fenólicos, Flavonoides, Alcaloides y Taninos. Palabras clave: cicatrizante, herida, extracto etanólico. 2 ABSTRACT Objectives: To determine the healing effect of ethanolic extract ointment on leaves of Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa" in Balb / c 53 mice. In addition, determine the adequate concentration of the ethanolic extract ointment of the leaves of Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa" and to detect if the secondary metabolites participate jointly in the cicatrizing effect. Materials and Methods: An experimental study was carried out at the application level, with seven groups in total and a sample of 56 Balb / c 53 mice. The method (tensiometric and Vaisberg) was applied, analysis of the healing test was performed using data collection instruments and finally, the statistical program SPSS 24 was used. Results: The variability of the differences between the control groups and the three Chamisa concentration treatments was observed. Conclusion: it was determined that the ointment of the ethanolic extract of Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa" at 10% shows cicatrizant activity at 75.42%. It was found that the ointment of Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa" 10%, has a higher percentage of healing compared to the positive control, Croton lechleri ointment "Sangre de Drago" 10% (54.91% of the healing test). The phytochemical gait detected in the ethanolic extract of the leaves of Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa" contains: Phenolic Compounds, Flavonoids, Alkaloids and Tannins. Key words: healing, wound, ethanol extract. 3 INTRODUCCIÓN Herida es toda lesión de la piel accidental o intencional, que provoca un cambio en la coloración de los tejidos (1). Las heridas son un problema de salud que afecta a la población de todas las edades. La cicatrización de dichas heridas es un fenómeno complejo que exige los conocimientos específicos y el trabajo de un equipo multidisciplinario para poder abarcar todos los aspectos. (2) Según datos publicados por el Ministerio de Trabajo y Asuntos Sociales, en el año 2005 se han registrado en España un total de 1.661.582 accidentes de trabajo de los cuales 333.604 están identificados como “heridas y lesiones superficiales”. Es considerada la segunda lesión más frecuente sólo detrás de las “dislocaciones, esguinces y torceduras” (3). En Chile, las estadísticas del 2008 muestran una suma de 160.000 pacientes portadores de algún tipo de heridas o úlceras, de las cuales 80% es de usuarios de FONASA (Fondo Nacional de Salud). Ese mismo año, FONASA presento una propuesta de reembolso para el manejo de las heridas, realizando la 1ª Encuesta Epidemiológica Nacional de Heridas y Úlceras, que dio la siguiente distribución: 77,2% corresponde a clasificación general de heridas; 14% a quemaduras y 8,8% a úlceras de pie diabético (4). Por otro lado, corresponde resaltar que las plantas medicinales juegan un papel importante en la salud humana, actualmente se conservan prácticas y usos milenarios de estas especies. (5) En reportes previos, Cevallos et al. (2016) estudiaron la composición química, actividad cicatrizante y toxicidad del látex de Croton lechleri “Sangre de Drago” en ratas Wistar, donde se evidencio su actividad cicatrizante mediante la formación de una costra muy temprana y el cierre de la herida en menos tiempo, respecto al grupo tratado con una crema comercial. Entre sus conclusiones, atribuyen dichos efectos a la presencia de alcaloides, taninos, flavonoides, azúcares reductores y saponinas (6). En la presente investigación se trata de satisfacer de algún modo las necesidades de salud de nuestro país, manifestando la importancia que le damos al uso de las plantas medicinales. Se realizó el estudio de las hojas de Dodonaea viscosa Jacq."Chamisa” del departamento de Huánuco, que son utilizadas empíricamente para procesos inflamatorios, pero la población desconoce sus propiedades cicatrizantes. 4 El presente estudio tuvo como objetivo general determinar el efecto cicatrizante del ungüento a base de extracto etanólico de las hojas de Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa”, en ratones Balb/c 53. Como objetivo específico, se determinó la concentración adecuada del ungüento a base de extracto etanólico de las hojas de Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa” y se detectó si los metabolitos secundarios contribuyen en el efecto cicatrizante. MATERIALES Y METODOS Diseño de investigación y tipo de estudio Se realizó un estudio experimental con diseño de nivel aplicativo, en un muestreo probabilístico de selección aleatoria simple lineal de 56 ratones albinos divididos en 7 grupos de 8 ratones Balb/c 53 de experimentación, realizado en el bioterio de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. MATERIAL BIOLÓGICO Obtención de muestras vegetal Se recolectaron 5 Kilos de hojas de la especie vegetal Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa”, en el distrito de Amarilis, Provincia de Huánuco, departamento de Huánuco a 4000 m.s.n.m. Y la ficha taxonómica fue certificada por el biólogo Campos De La Cruz José Ricardo de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, según el sistema de clasificación de Arthur Cronquist (1988). REINO: PLANTAE División: MAGNOLIOPHYTA Clase: MAGNOLIOPSIDA Sub Clase: ROSIDAE Orden: SAPINDALES Familia: SAPINDACEAE Género: Dodonaea Especie: D. viscosa Jacq 5 Las hojas fueron llevadas a sequedad, luego fueron pulverizadas en una máquina de molino para obtener una muestra homogénea, posteriormente se procedió a pesar la muestra vegetal (hojas):390g y seguidamente a trasvasar en un frasco de vidrio ámbar para macerar la muestra durante 7 días en alcohol (96%), finalmente se procede a evaporar el extracto etanólico a 40°C en una estufa hasta conseguir el extracto seco. A partir de este extracto se realizó la prueba de análisis fitoquímico y la elaboración del ungüento. Análisis fitoquímico Se realizó la identificación de los metabolitos secundarios (7)(8): Reactivo Reacción Resultado FeCl3 1mL extracto etanólico + V gts Coloración FeCl3 verde azulado Shinoda 1ml extracto etanólico + (7 Coloración virutas de Mg metalico + V roja gts Hcl ) AlCl3 1ml extracto etanólico + V Fluorescenci gotas AlCl3 a amarilla (luz U.V) Dragend 1mL extracto etanólico + V gts Precipitado orff Rvo. Dragendorff rojo naranja Mayer 1mL extracto etanólico + V gts Precipitado Rvo. Mayer blanco popoff 1mL extracto etanólico + V gts Precipitado Rvo. Popoff amarillo Wagner 1mL extracto etanólico + V gts Precipitado Rvo. Wagner pardo oscuro Sonnesc 1mL extracto etanólico + V gts Precipitado hein Rvo. Sonneschein amarillo verdoso gelatina 1mL extracto etanólico + II gts Precipitado Rvo. Gelatina blanco Procedimiento de Fabricación Se calculó el porcentaje de rendimiento del extracto etanólico de Dodonaea viscosa Jacq, al 8,97% p/p. A partir del rendimiento se preparó el ungüento a base de extracto seco de Dodonaea viscosa Jacq."Chamisa” al 5%, 8% y 10% y al 10% de extracto seco de Croton lechleri “Sangre de Drago”. 6 Se fundió los excipientes: lanolina anhidra 40C°, vaselina solida 60C°y parafina 60C°. Se Incorporó el extracto seco de Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa” en lanolina anhidra (muestra A). Se Incorporó la muestra A en la vaselina (muestra B), finalmente se vertió la muestra B en la parafina para obtener la forma farmacéutica deseada. Determinación del test de cicatrización El test de cicatrización se empleó a fin de medir la adición de la fuerza de tensión (medida en gramos), necesaria para abrir una herida de 1cm de longitud producida en la región dorsal lumbar del ratón modelo de referencia de Howes 1965 (9). Procesamiento de datos Para la generación de la base de datos se empleó la hoja de cálculo Excel 2013 en la que se obtuvo la distribución de frecuencias y porcentajes del test de cicatrización en siete grupos de ratones experimentales. Así mismo se analizaron los resultados con el software para análisis estadístico SPSS 24, se realizó el Análisis de la varianza (ANOVA) con un factor inter-sujetos, para muestras independientes, y los gráficos de cajas y bigotes. 7 RESULTADOS 8 Este cuadro contiene un análisis descriptivo de la variable dependiente por grupos, así como, los límites superior e inferior para la media de cada grupo al 95% de confianza. 9 Gráfico 3. Cajas y Bigotes En el gráfico 3. Se observa las diferencias que existen entre las medias de los grupos de control y los 3 tratamientos de Chamisa en sus diferentes concentraciones. Podemos distinguir que la concentración del 10% de Ungüento de Chamisa muestra una mayor efectividad en el tratamiento del efecto de cicatrización, a diferencia de las otras concentraciones. Figura 1. Marcha fitoquimica del extracto etanolico de Dodonaea viscosa Jacq. “Chamisa” de forma cualitativa. 10 DISCUSIÓN El uso de plantas en el tratamiento de enfermedades, basado en la medicina popular que carecen estudios etnobotánicos y etnofarmacológicos, no suele ir de la mano con un real conocimiento de sus propiedades terapéuticas que ofrezcan parámetros que justifiquen y afirmen su aplicación como una aceptable alternativa para la salud pública (10). El objetivo de este estudio es dar a conocer la propiedad cicatrizante de la planta Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa”, con la finalidad de contribuir beneficiosamente en el tratamiento de heridas de la población, comparándolo con otros productos no naturales existentes en el mercado. Con respecto a la composición de los ácidos fenólicos, flavonoides, y taninos juegan un rol importante en la cicatrización de heridas, los taninos actúan sobre los radicales libres, triterpenos y flavonoides que promueven la cicatrización debido a sus propiedades astringentes y antimicrobianas que se reportan en las especies vegetales (11). Los Compuestos Fenólicos, Flavonoides, Alcaloides y Taninos presentan una propiedad en la actividad cicatrizante en forma conjunta según se demuestra (tabla 1) del experimento. En estudios complementarios, las composiciones químicas de los extractos de diferentes plantas, identificaron 23 flavonoides mediante la técnica de HPLC / masas. Es una técnica específica que permite clasificar diferentes compuestos de metabolitos primarios y secundarios (12). En un ensayo cualitativo del extracto etanólico de Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa. Las reacciones de coloración y precipitación, son pruebas confirmatorias que permiten realizar el estudio. (Figura 1). Los resultados de la actividad cicatrizante del ungüento a base del extracto etanólico de las hojas de Dodonaea viscosa Jacq. "Chamisa”, donde de acuerdo a los datos obtenidos en el grafico (1, 2 y 3) y tabla 2 .Nos indica la acción cicatrizante presente en el ungüento de 10% chamisa, en la que se observó una mayor necesidad de fuerza de tensión para la apertura del corte cicatrizado. Seguidos por los que usaron ungüento 8% ,5% de chamisa, ungüento de 10% Croton lechleri y ungüento base. 11 CONCLUSIONES En la investigación se determinó que el ungüento a base de extracto etanólico de Dodonaea viscosa Jacq. “Chamisa” al 10% presenta un mayor efecto cicatrizante. Se comprobó que el ungüento de Dodonaea viscosa Jacq. “Chamisa” 10%, tiene mayor porcentaje de cicatrización en comparación con el control positivo, ungüento de Croton lechleri “Sangre de Drago” 10% (54.91%). La marcha fitoquimica detecta que el extracto etanólico de las hojas de Dodonaea viscosa Jacq.”Chamisa” contiene: Compuestos Fenólicos, Flavonoides, Alcaloides y Taninos. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Fuentealba P. Enfermería en curación de heridas. En: Martí M, Estrada de Ellis S. Definición de heridas. Buenos Aires: Fundación Alberto J. Roemmers; 2012. P. 21- 22. 2. Beaskoetxea P, Bermejo M, Capillas R, Cerame S, García F, Gómez J, Et al. Situación actual sobre el manejo de heridas agudas y crónicas en España: Estudio ATENEA. Gerokomos. 2013; 24 (1): 27-31. 3. Cerraton F, Palacios E, Pino J. Incidencia y frecuencia de heridas en los centros asistenciales. Asepeyo. 2009; 1(151): 3-4. 4. Aburto I, Morgado P. Revista chilena de heridas & ostomías. En: Salas del Campo C, editor. Gestión en manejo avanzado en heridas y ulceras en Chile. Santiago: Imprenta Salesianos; 2010. P. 7-9. 5. Molina L, Galván R, Patiño A, Fernández R. 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