FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA DE LA CREMA A BASE DEL 
EXTRACTO METANÓLICO DE LAS FLORES DE Nerium 
oleander L. “LAUREL ROSA” SOBRE Candida albicans 
ATCC 10231
TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO 
FARMACÉUTICO
AUTORES:
Bach. FERNANDEZ MELENDEZ, EMELY LISSETH
https://orcid.org/0000-0002-0917-9057
Bach. ROJAS SUCLUPE, JOSÉ LUIS
https://orcid.org/0000-0003-3733-9924
ASESOR:
Mg. LA SERNA LA ROSA, PABLO ANTONIO
https://orcid.org/0000-0001-7065-012X
LIMA – PERÚ
2022
DEDICATORIA
A DIOS, quien me dió grandes personas como ejemplo y
motivación en mi vida; y hoy me lleva a dedicar este gran logro
a MI FAMILIA, de forma especial a mis padres GLADYS y
JAIME, son mi mayor fortaleza y un hontanar de amor
inagotable.
A mis hermanos:  Aracely; Patricia; Edgar; Eduardo y Maythe,
que siempre me incentivan a ser mejor cada día, a quienes
admiro y respeto porque cada uno ha forjado su camino en esta
vida.
Decido dedicar este trabajo, a 4 personas importantes de los
cuales siempre aprendí mucho y recibí amor, sabiendo que
desde el cielo hoy me miran con orgullo, a mis abuelos Baltazar;
Jesús y Delicia y a quien aún sigue a mi lado y es como mi
segunda madre, Esperanza.
 Y sin lugar a dudas a mi amor José Luis, mi novio que me tomó
de la mano; decidiendo compartir juntos esta vida y el sueño de
ser profesionales.
Emely Lisseth Fernández Meléndez
Por el don de la vida y la bondad que le precede dedico
infinitamente a DIOS, que sin importar mis errores sigue a mi
lado y me demuestra su amor al confortarme con la salud de mis
padres TELMO y CORINA quienes son mi tesoro más preciado
y el motor que impulsa mis días.
Este arduo trabajo es dedicado también a mis hermanas:
Roxana; Mariana y Nathaly que siempre me brindan su amor, y
al resto de familiares que me demuestran su apoyo en
momentos difíciles.
De forma especial dedico esto, a la mujer que llego a mi vida en
el momento exacto a mi novia Emely; deseando que DIOS nos
conserve siempre juntos el resto de mi vida y mantenga vivo
nuestro amor.
José Luis Rojas Suclupe
AGRADECIMIENTO
Guiados por la fortaleza que nos brinda, iniciamos agradeciendo
a DIOS; que es el centro de nuestro ahínco para seguir adelante
diariamente y llenarnos de sabiduría en cada momento difícil que
encontramos en la elaboración de nuestra tesis y de nuestra
vida.
Agradecemos a nuestro asesor de tesis; el Mg. La Serna La
Rosa, Pablo Antonio, por su apoyo, conocimientos y pautas
indispensables para culminar nuestra tesis. Además de una
relación amical, la cual nos brindó la confianza de consultar
cualquier duda, durante el proceso de nuestra investigación.
Agradecidos también, con la universidad “María Auxiliadora” por
acceder a nuestra investigación y formar la plana docente idónea
para nuestra tesis. De tal forma, que hoy en día estamos
próximos a cumplir nuestra meta de ser químicos farmacéuticos;
una profesión que nos apasiona y de la cual tenemos grandes
expectativas a largo plazo.
Para culminar agradecemos al conjunto de profesionales; que
conforman nuestro jurado y evaluaron nuestro trabajo de
investigación.
ÍNDICE GENERAL
Páginas
I. INTRODUCCIÓN............................................................................................... 10
II. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................ 15
2.1 Enfoque y diseño de investigación .............................................................. 15
2.2 Población, muestra y muestreo(19) ............................................................ 15
2.3 Variables de investigación........................................................................... 15
2.4 Técnica e instrumento de recolección de datos .......................................... 16
2.5 Plan de recolección de datos ...................................................................... 16
2.6. Métodos de análisis estadísticos ................................................................ 21
2.7 Aspectos éticos ........................................................................................... 21
III.  RESULTADOS ............................................................................................... 22
IV.  DISCUSIÓN ................................................................................................... 28
4.1.  Discusión de resultados ............................................................................ 28
4.2. Conclusiones. ............................................................................................. 31
4.3. Recomendaciones ..................................................................................... 31
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................................... 32
ÍNDICES DE TABLAS
Páginas
Tabla 1. Metabolitos secundarios presentes en el extracto metanólico de flores de
Nerium oleander L. “laurel rosa”. .......................................................................... 22
Tabla 2. Formulación de la crema a base del extracto metanólico de flores de
Nerium oleander L. “laurel rosa” y grupos control que muestran actividad antifúngica
sobre Candida albicans ATCC 10231. ................................................................. 23
Tabla 3. Análisis de la Varianza (ANOVA) de los datos recolectados .................. 25
Tabla 4. Análisis por sub grupos homogéneos mediante la prueba de Tukey ..... 26
Tabla 5. Sensibilidad antifúngica de Candida albicans ATCC 10231 frente a las
cremas a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa”
y los grupos control según la escala de Duraffourd .............................................. 27
Tabla 6. Prueba de normalidad ............................................................................ 46
Tabla 7. Prueba de homogeneidad de varianzas ................................................. 46
ÍNDICES DE FIGURAS
Páginas
Figura  1. Actividad antifúngica sobre Candida albicans ATCC 10231 de las cremas
a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” a las
concentraciones del 15%, 20% y 25% ................................................................. 24
Figura  2. Recolección de la especie vegetal ....................................................... 47
Figura  3. Selección y lavado de la muestra más adecuada ................................ 48
Figura  4. Secado de las flores de Nerium oleander L.  “Laurel rosa” .................. 49
Figura  5. Obtención del pulverizado de flores de Nerium Oleander L.  “Laurel rosa”
 ............................................................................................................................. 50
Figura  6. Preparación del macerado y filtración .................................................. 51
Figura  7. Obtención del extracto metanólico de Nerium Oleander L.  “Laurel rosa”
 ............................................................................................................................. 52
Figura  8. Prueba de solubilidad ........................................................................... 53
Figura  9. Estudio fitoquimico ............................................................................... 54
Figura  10. Preparación de la formulación en crema ............................................ 55
Figura  11. Preparación del inóculo ...................................................................... 56
Figura  12. Preparación de pocitos en agar y aplicación de la crema .................. 57
Figura  13. Incubación de los cultivos de Candida albicans ................................. 58
Figura:  14. Recolección de datos: Medida del halo de inhibición ........................ 59
ÍNDICES DE ANEXOS
Páginas
Anexo A. Matriz de consistencia .......................................................................... 36
Anexo B. : Operacionalización de variables ......................................................... 38
Anexo C. : Ficha de recolección de datos – Estudio Fitoquímico ......................... 39
Anexo D. : Ficha de recolección de datos – Microbiología ................................... 40
Anexo E. : Carta de presentación ......................................................................... 41
Anexo F. : Carta de aceptación ............................................................................ 42
Anexo G. : Certificado de clasificación taxonómica .............................................. 43
Anexo H: Certificado de análisis de la cepa ......................................................... 44
Anexo I. : Determinación del comportamiento paramétrico de los datos .............. 46
Anexo J. : Evidencias de la parte experimental .................................................... 47
RESUMEN
Objetivo: Determinar la actividad antifúngica que poseerá la crema a base del
extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. (laurel rosa) sobre a Candida
albicans ATCC 10231
Materiales y métodos: La investigación se basó en un estudio de enfoque
cuantitativo, explicativo, prospectivo, transversal de diseño experimental con dos
grupos control, el positivo conformado por la crema terbinafina al 1% y el negativo
por la crema base. La población vegetal estuvo conformada de Nerium oleander L.
(laurel rosa), la obtención del extracto se realizó por maceración, el cual se
incorporó a la crema base a las concentraciones del 15%, 20% y 25%. La actividad
antifúngica se evaluó por medio de la técnica de difusión en pozos.
Resultados: Los resultados encontrados se evaluaron en base al tamaño del halo
de inhibición para la crema al 15% se obtuvo 8,93 + 0,43mm, para la crema al 20%
fue de 10,73 + 0,33mm; para la crema al 25% fue de 11,28 + 0,37mm; por su parte,
los grupos control mostraron los siguientes valores, crema base (control negativo)
de 6,11 + 0,33mm y terbinafina 1% (control positivo) de 23,46 + 0,42mm. Además,
Candida albicans ATCC 10231 presentó sensibilidad nula a la crema base, fue
sensible a las cremas elaboradas a base del extracto metanólico de flores de
Nerium Oleander L. “Laurel rosa” en todas las concentraciones, y es altamente
sensible a la terbinafina.
Conclusiones: La crema a base del extracto metanólico de flores de Nerium
oleander L. (laurel rosa) presentaron actividad antifúngica sobre a Candida albicans
ATCC 10231, pero fue menor en comparación con la crema terbinafina.
Palabras clave: Extracto metanólico, Nerium oleander L., laurel rosa, actividad
antifúngica, Candida albicans ATCC 10231.
ABSTRACT
Objective: To determine the antifungal activity of the cream based on the
methanolic extract of flowers of Nerium oleander L. (pink laurel) on Candida albicans
ATCC 10231.
Materials and methods: The research was based on a quantitative, explanatory,
prospective, cross-sectional study with an experimental design with two control
groups, the positive group made up of 1% terbinafine cream and the negative group
made up of the base cream. The plant population was made up of Nerium oleander
L. (pink laurel), the extract was obtained by maceration, which was incorporated into
the base cream at concentrations of 15%, 20% and 25%. The antifungal activity was
evaluated by means of the well diffusion technique.
Results: The results found were evaluated based on the size of the inhibition halo
for the 15% cream, 8.93 + 0.43mm was obtained, for the 20% cream it was 10.73 +
0.33mm; for the 25% cream it was 11.28 + 0.37mm; On the other hand, the control
groups showed the following values: base cream (negative control) of 6.11 +
0.33mm and terbinafine 1% (positive control) of 23.46 + 0.42mm. In addition,
Candida albicans ATCC 10231 showed no sensitivity to the base cream, was
sensitive to creams made from the methanolic extract of flowers of Nerium oleander
L. "Laurel rosa" in all concentrations, and is highly sensitive to terbinafine.
Conclusions: The cream based on the methanolic extract of flowers of Nerium
oleander L. (pink laurel) showed antifungal activity against Candida albicans ATCC
10231, but it was lower compared to the 1% terbinafine cream.
Keywords: Methanolic extract, Nerium oleander L., rose laurel, antifungal activity,
Candida albicans ATCC 10231.
I. INTRODUCCIÓN
Las infecciones fúngicas tienen un gran impacto en la morbilidad y mortalidad
humana, sin embargo, las consecuencias de estas enfermedades en la salud no
han sido ampliamente evaluadas, además, a pesar de la necesidad urgente de
pruebas diagnósticas efectivas, nuevos medicamentos y vacunas seguras y
efectivas, los estudios de la fisiopatología de las infecciones fúngicas humanas
terminan rezagados con respecto a las enfermedades causadas por otros
patógenos. Los hongos más comunes que causan infecciones
musculoesqueléticas son Candida, Aspergillus, hongos dimórficos (Blastomyces,
Coccidioides, Histoplasma) y Cryptococcus, cuyos síntomas que producen a
menudo son subagudos y pueden enmascararse como otros trastornos, lo que
puede conducir a retrasos sustanciales en el tratamiento(1,2).
Las infecciones fúngicas, ya sean superficiales o sistémicas, están aumentando y
afecta a casi 40 millones de personas en todo el mundo. Entre los patógenos que
causan daños en la piel, las infecciones fúngicas son las más comunes, por
ejemplo, la candidiasis es una infección fúngica causada por el hongo del género
Candida, principalmente Candida albicans (que es el más común de ellos). Es
importante señalar que este hongo vive naturalmente en nuestro cuerpo, en la piel,
en el intestino, en la mucosa oral y en la microbiota vaginal, y que junto con las
bacterias mantienen el pH ácido en la región intima, entre 3,8-4,5(3).
La revista europea “Microbiología Clínica y Enfermedades Infecciosa” publicó su
estudio donde informó que más de 830 millones de personas de diferentes
continentes sufren de infecciones dérmicas o sistémicas por hongos, las cuales
suelen ser recurrentes, resistentes, crónicas y en algunos casos se desenlaza
ocasionando la muerte de los pacientes(3,4).
En el Perú las estadísticas en salud muestran que Candida albicans es el principal
agente fúngico responsable de las infecciones en las personas con el sistema
inmunológico debilitado, con probabilidad de ocasionar una infección a nivel
sistémico. Por otro lado, un estudio realizado en el área de odontología informó que
cerca del 40% de la población pediátrica con caries a nivel nacional presenta
Candida albicans al igual que en los adultos, que utilizan prótesis dentales(4–6).
Las plantas medicinales se han recetado durante mucho tiempo en varios países,
durante siglos; sin embargo, existe poca información disponible de Nerium oleander
L. (laurel rosa) bajo la formulación de crema, sobre su uso en infecciones fúngicas
en la piel; por lo tanto, el estudio se centra en evaluar la actividad antifúngica de
una crema formulada con Nerium oleander L. (laurel rosa).
Nerium oleander L. es una especie vegetal que pertenece a la familia Apocynaceae,
la cual destaca por tener especies que son utilizadas a nivel mundial por las
comunidades con diversos fines, especialmente como ornamentales y medicinales;
está compuesta por cerca de 5.000 especies distribuidas en 400 géneros, la familia
tiene representantes ampliamente utilizados en la medicina tradicional(7).
Nerium oleander L., también llamado laurel rosa, se cultiva en todo el mundo y es
una de las plantas ornamentales más utilizadas. La especie también tiene un gran
potencial medicinal, con registros de su uso en Brasil como expectorante, tónico
cardíaco, diurético y emético, también se han informado dosis muy pequeñas de
extracto de hojas para uso en mordeduras de serpientes, por otro lado, el extracto
de flores de N. oleander L. tiene usos antinociceptivos y cardiotónicos. Además,
tienen registros del uso de su corteza como catártico, febrífugo y fiebre intermitente,
las semillas se utilizan como purgante en hidropesía y reumatismo. Toda la planta
tiene propiedades anticancerígenas y se investigó su uso en este tratamiento,
basándose en el uso popular de la planta en el tratamiento de callos, verrugas,
úlceras cancerosas, carcinoma, tumores ulcerativos(8).
La actividad antifúngica del extracto de las partes florales de la especie también se
observó frente a importantes hongos patógenos (F. oxysporum, A. alternata,
Fusariumsolanie Rizoctonia solani). Así mismo, el compuesto cardenólido extraído
de las raíces de N. oleander, mostró actividades antibacterianas, los extractos de
las raíces y hojas de la planta mostraron resultados efectivos contra bacterias y
hongos, también se comprobó la actividad antimicrobiana de los extractos del tallo
de la planta, contra Pseudomonas aeruginosae y Bacillus subtilis. Por otro lado, el
aceite esencial extraído de las flores de N. oleander mostró potencial antibacteriano
contra Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus(9).
Existe alrededor de 5 millones de especies de hongos, de este gran número, solo
unos pocos cientos de especies causan enfermedades en los humanos,
desafortunadamente Candida albicans es la especie fúngica más prevalente que
crece como patógeno comensal u oportunista en el huésped humano, se asocia
con muchas infecciones potencialmente mortales, especialmente en personas
inmunodeprimidas. El genoma de Candida albicans es muy flexible y puede
soportar una amplia gama de variaciones en un entorno en constante cambio, por
lo tanto, la plasticidad del genoma es fundamental para su adaptación y durante
mucho tiempo ha sido de gran interés; C. albicans tiene un genoma heterocigoto
diploide que es muy dinámico y puede mostrar variaciones de reordenamiento
cromosómico y aneuploidía de pequeña a gran escala, lo que tiene implicaciones
en la resistencia a los medicamentos, la virulencia y la patogenicidad(11).
Los antecedentes nacionales que se relacionan con nuestro estudio citan a los
autores tales como, Chumacero  P.  y  León  E.  (2021), quienes tuvieron como
objetivo principal “determinar la actividad contra Escherichia coli del  extracto  de
etanol y extracto de metanol de la especie Nerium oleander”. Para su ejecución los
extractos se prepararon a través de la maceración y posterior filtrado, por otra parte,
la actividad bacteriana se evaluó por difusión en disco o llamado también Kirby-
Bauer. El extracto etanólico a una concentración del 75% formó una zona inhibitoria
de 18.9mm y el extracto con metanol al 100% formó una zona de inhibición de
21mm, confirmando la actividad antibacteriana de ambos extractos de Nerium
oleander sobre E. coli(12).
Asimismo, Rojas R. (2019), por medio de su tesis evaluó el efecto in vitro de un
decocto a base de Nerium oleander sobre larvas de Spodoptera frugiperda, para
formular el decocto las hojas de Nerium oleander fueron hervidas en agua (1 litro
por cada 20 granos de hojas), luego se obtuvieron concentraciones de 0.5%, 1%,
1.5% y 2%. En los resultados se observó que el tratamiento en una concentración
al 2% sobre las larvas disminuyó su viabilidad en un 40%, produciendo una muerte
del 60%. Se confirma el efecto larvicida in vitro del decocto de hojas de Nerium
oleander(13).
Por su parte, Quintanilla C, Guerreo J (2018), establecieron por objetivo en su
estudio, determinar el efecto anti Staphylococcus aureus y anti Escherichia coli in
vitro de un extracto de etanol a base de las hojas de Vallesia glabra (cun cun). Para
la ejecución de la tesis la técnica empleada para obtener el extracto de la planta fue
por maceración en frio, posteriormente se disolvió el extracto hasta llegar a una
concentración del 10%, 20%, 30%, 50% y 100% para inocularlos en las placas
cultivadas con las bacterias, adicionalmente el control negativo fue el etanol y el
positivo fue gentamicina, para evaluar la sensibilidad de las bacterias se aplicó la
técnica de Kirby-Bauer. Se concluyó que el extracto etanólico de hojas de Vallesia
glabra inhibió a Staphylococcus aureus, más no a Escherichia coli(14)
Por otro lado, Fernández H. (2016), por medio de su investigación tuvo por objetivo
evaluar la actividad rodenticida del laurel rosa (Nerium oleander) a diferentes
concentraciones, en el estudio se elaboró una pasta con maíz y hojas secas de
Nerium oleander (laurel rosa) a las concentraciones de 10%, 20%, 30%, 40% y
50%, se alimentó a ratas por 10 días con este preparado y observo el efecto. Los
resultados mostraron que Nerium oleander (laurel rosa) posee un efecto letal sobre
esto roedores a las concentraciones del 30%, 40% y 50%, concluyendo el estudio
que la especie vegetal tiene un efecto rodenticidas en las preparaciones con
concentración superior a 30%(15).
De la misma forma, citaremos como antecedentes internacionales a los autores
Dos Santos A. et al (2022), quienes ejecutaron un estudio sistemático para
conocer la actividad terapéutica de tres plantas medicinales como: A. cathartica, C.
roseus y Nerium oleander. Después de seleccionar varios artículos científicos se
analizó que dichas plantas presentan efecto antiparasitario, antifebril, laxante,
purgante, regenerador epitelial, antiséptico, expectorante, diurético y antiemético.
Por lo tanto, estas plantas pertenecientes a la familia Apocynaceae presenta varias
acciones terapéuticas(16).
Por su parte, Ayumi, I. (2021), quien definió como objetivo desarrollar un extracto
etanólico con efecto antifúngico a partir del látex de Euphorbia sp y las hojas Nerium
oleander. Para su desarrollo se utilizó un moho del género Rhizopus que crece
habitualmente en el pan, este moho se cultivó en placas Petri con agar y el extracto
fue inoculado en dicho cultivo. Ambas especies vegetales mostraron un efecto
antifúngico retrasando el crecimiento y eliminando a los hongos(17).
Además, Esmail, A. (2020), investigó los “principios activos y efectos
farmacológicos de Nerium oleander”. A través de una evaluación fitoquímica se
mostró que Nerium oleander presenta metabolitos como taninos, saponinas,
alcaloides, flavonoides, fenoles, cardenólidos, glucósidos cardíacos, triterpenoides,
triterpenos y esteroides. El efecto antimicrobiano del aceite esencial de N. oleander
fue evaluado en bacterias grampositivas y gramnegativas, levaduras y mohos,
evidenciándose varios grados del efecto antimicrobiano sobre los microorganismos
utilizados, la concentración mínima inhibitoria fue de 125 a 500 y 250 a 2000 ug/μl
para bacterias y hongos respectivamente. Finalmente, la investigación concluye
que Nerium oleander presenta actividad farmacológica para combatir varios
microorganismos(18).
De esta manera, el presente estudio enmarca su investigación en el estudio de
principios antimicóticos de Nerium oleander L., específicamente sobre Candida
albicans por su alto poder infectivo y su elevada resistencia antimicótica, iniciando
la búsqueda de nuevos principios a partir de esta planta, que ayuden al tratamiento
de estas enfermedades o sean complementarios al tratamiento farmacológico
mediante la elaboración de una formulación farmacéutica que permita la
aplicabilidad del principio.
El estudio planteado se enfoca en la problemática ocasionada por enfermedades
cuyo agente etiológico es Candida albicans el cual produce la enfermedad conocida
como candidiasis, que afecta de forma recurrente y habitual a la población, además,
de la resistencia que este microorganismo presenta frente a un tratamiento
farmacológico convencional, por lo mismo, de demostrarse la actividad antifúngica
de una formulación magistral (crema) a base del extracto metanólico de las flores
de Nerium oleander L. “laurel rosa” permitiría al área de salud tomar como
alternativa natural el uso de esta crema en afecciones por candidiasis, asimismo,
se reducirían los niveles de resistencia del microorganismo y el costo del
tratamiento seria económicamente más accesible
Por otro lado, el objetivo general establecido en la presente investigación es
determinar la actividad antifúngica que poseerá la crema a base del extracto
metanólico de flores de Nerium oleander L. (laurel rosa) sobre a Candida albicans
ATCC 10231.
La hipótesis principal que se ha planteado en la presente investigación es la
siguiente: La crema a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L.
(laurel rosa) presenta actividad antifúngica frente a Candida albicans ATCC 10231.
II. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 Enfoque y diseño de investigación
La investigación se centró en un análisis cuantitativo, basado en el estudio
estadístico de las variables, además correspondió a un estudio prospectivo y
transversal al momento de realizar la recolección de los datos; por tanto, el diseño
del estudio fue experimental(19).
2.2 Población, muestra y muestreo(20)
La población vegetal estuvo conformada por 5 Kg de planta (incluyendo flores y
ramas) de Nerium oleander L. “laurel rosa” recolectada en el distrito de Pimentel,
del departamento de Lambayeque ubicada a 6.78° de latitud Sur y 79.88° de
longitud Oeste.
La población biológica estuvo representada por la cepa microbiológica de
Candida albicans ATCC 10231 de la empresa Gen Lab Perú.
La muestra se conformó por 2 Kg, de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” la
cual cumplió los siguientes criterios de inclusión y exclusión:
Criterios de inclusión:
- De estar en estado fresco, recién recolectada
- No debe mostrar signos de contaminación o deterioro mecánico
- Debe haber sido identificada por un profesional botánico
- De un solo tamaño
Criterios de exclusión:
- Los cultivos no deben haber sido tratados con plaguicidas
- La especie vegetal solo debe corresponder al lugar de recolección indicado
- No se puede emplear otro tipo de especie o variedad de la planta
El tipo de muestreo por la cercanía al sitio de recolección y la facilidad de
obtención del permiso para la extracción corresponde al no probabilístico por
conveniencia.
2.3 Variables de investigación
Variable independiente
Extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. (laurel rosa) en crema a
diferentes concentraciones
Definición conceptual: Preparado farmacéutico en crema conformado por
principios activos de Nerium oleander L
Definición operacional: Elaboración de crema base con agregado de extracto
metanólico de Nerium oleander L.
Variable dependiente
Actividad antifúngica sobre Candida albicans ATCC 10231.
Definición conceptual: Inhibición en el crecimiento del hongo por acción
antifúngica del preparado farmacéutico(21).
Definición operacional: Medición del diámetro del halo de inhibición formado en
cultivos de Candida albicans
2.4 Técnica e instrumento de recolección de datos
Técnica:
· Maceración: Fermentación en solventes polares o medianamente polares de
una muestra vegetal por determinado tiempo, extrayendo por acción física
los componentes de la planta al solvente(22).
· Difusión en pozo: Método comúnmente empleado para determinar o medir
la acción de una sustancia sobre un tipo de microorganismos específico,
mediante la acción directa de la sustancia con el cultivo microbiológico(23).
Instrumento de recolección:
· Ficha de recolección de datos
· Instrumento de medición digital
2.5 Plan de recolección de datos
2.5.1. Autorización y coordinaciones previas para la recolección de datos
Previo al inicio de los procedimientos se coordinó con el propietario del
terreno de cultivo confirmando su aceptación mediante un documento escrito
(anexo F), luego se procedió a recolectar la muestra vegetal por la mañana.
Se recolectó una muestra integra para realizar identificación botánica por el
especialista botánico, quien emitió un certificado de clasificación botánica
(anexo G).
2.5.2. Recolección de la muestra vegetal
Se recolectó aproximadamente 5 kg de la planta las cuales que luego de la
selección mediante criterios de inclusión y exclusión se emplearon 2
kilogramos de flores, posteriormente se procedió a lavar con abundante agua
destilada para luego ser desinfectadas con lejía (0.5%) por 5 minutos y
finalmente se enjuagaron.
Luego se colocaron las flores sobre papel kraft en una mesa a temperatura
ambiente y bajo sombra, se dejó secar por 24 horas y posteriormente se llevó
a una estufa eléctrica para su desecado completo, luego se trozaron en
partículas pequeñas y pulverizó mediante un molino de cuchillas, el
pulverizado obtenido fue tamizado para uniformizar las partículas del polvo.
2.5.3. Preparación del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L.
(laurel rosa):
El pulverizado obtenido se colocó en un frasco de color oscuro para evitar el
paso de la luz de 4 litros de capacidad luego se agregó metanol (1 litro) y
dejó en maceración por un periodo de tiempo de 10 días, con agitación de 5
minutos cada 12 horas para uniformizar la mezcla.
Luego de este tiempo se filtró y lo que se obtuvo fue colocado en una estufa
eléctrica para evaporar el solvente, el producto obtenido se consideró el
extracto seco de las flores, se obtuvo aprox. 28,9gr de extracto seco.
Seguido se realizó las disoluciones al 100% (4mg de extracto seco con 4ml
de metanol), 75% y 50%.
2.5.4 Marcha fitoquímica
El procedimiento aplicado para la determinación de los metabolitos de la
planta se tomó del estudio realizado por Lozano N. (2015)(24), el cual se
desarrolló de la siguiente forma:
Alcaloides: Se empleó la reacción de Dragendorff donde en un tubo de
ensayo se agregó 1 ml del extracto y posteriormente se agregó 1 ml de ácido
clorhídrico al 1%, se llevó a calor directo por 2 minutos y luego se enfrió y
agregó 3 gotas del reactivo de Dragendorff. Un precipitado naranja ladrillo
indica una reacción positiva.
Taninos y compuestos fenólicos: Se agregó 1 ml del extracto y luego
adicionó 3 gotas del reactivo de cloruro férrico. La coloración rojo-vino
evidencia la existencia de compuestos fenólicos, un color verde intenso
demuestra la existencia de taninos pirocatecólicos, un color azul evidencia
la existencia de taninos pirogaláctonicos.
Saponinas: Se colocó 1 ml del extracto y agregó 4 ml de agua destilada, se
mezcló vigorosamente por 2 minutos, luego se observó si existe presencia
de espuma con 2 mm de espesor y permanencia por más de 2 minutos, lo
que indicaría la presencia de saponina.
Flavonoides: Se agregó 1 ml de la muestra en un tubo de ensayo y luego
se agregó 1 ml de HCl cc, se llevó a calor directo por 10 minutos, luego se
dejó enfriar y se agregó 1 ml de H2O destilada y 2 ml de alcohol isoamílico,
la formación de una coloración roja a marrón en la zona del alcohol es una
prueba de la presencia de flavonoides.
Aminoácidos: En un tubo de vidrio con 1 ml del extracto se agregó 3 gotas
de reactivo de Ninhidrina, luego se llevó a baño maría (45°C) por 10 min.
luego se retiró y dejó enfriar, la aparición de un color azul-violeta confirma la
existencia de aminoácidos.
Aminoácidos azufrados: En un tubo de vidrio con 1 ml del extracto se
agregó 3 gotas de reactivo de acetato de plomo, se agito por 1 minutos y se
dejó reposar por 5 minutos, la formación de un precipitado blanco lechoso
indica la presencia de aminoácidos azufrados.
Mucilago: Una alícuota de 2ml del extracto se llevó a una temperatura de 0
a 5°C por un tiempo de 10 minutos, luego de los cuales se retiró y observo
la presencia de una consistencia gelatinosa, que indicará la presencia de
mucilago.
Quinonas: A 1ml del extracto se agregó 1 ml de cloroformo se mezcló
totalmente y luego agregó 1 ml de NaOH y nuevamente se agito, se dejó
reposar por 10 minutos hasta identificar la separación de dos fases, la
formación de una coloración rosado-roja indica en la fase acuosa, indica la
presencia de quinonas.
Triterpenos y Esteroides: Se empleó el método de Liebermann-Burchard,
a una alícuota de 1 ml del extracto se agregó 0.5 ml de ácido acético glacial
y luego 5 gotas de H2SO4 concentrado por la pared del tubo de ensayo sin
agitar, la formación rápidamente de un color rosado-rojo que cambia azul o
azul verdoso luego indica la presencia de estructuras esteroidales, la
formación de un color rosado-rojo que cambia a verde intenso o verde oscuro
indica la presencia de estructuras esteroidales.
2.5.5. Elaboración de la crema formulada a base del extracto metanólico de
las flores Nerium oleander L. (laurel rosa):
Para su elaboración, primero se obtuvo la crema base, para lo cual se
pesaron los insumos para la fase oleosa, alcohol cetílico 3.75g más la cera
blanca de abejas 0.25g y se mezclaron en baño maria hasta formar una
mezcla lechosa; a continuación la fase acuosa que consta del propilenglicol
1.25g y lauril sulfato de sodio 0.5g se mezcla en otro recipente a baño maria.
Para formar la crema se incorpora la fase acuosa en la fase oleosa con
agitacion moderada hasta lograr una homogenización de las fases y obtener
la crema base.
Para la preparación de la crema con extracto metanólico de las flores de
Nerium oleander L.(laurel rosa), a la crema base se incorpora la disolución
del extracto seco al 100% y seguidamente se mezcló con una espatula para
uniformizar la crema. De esa forma se obtuvo las cremas a las
concentraciones del 15 %, 20% y 25% respectivamente.
Fórmulación:
Alcohol cetílico…………………………3.75g
Cera blanca de abejas ……………….0.25g
Propilenglicol…………………………..1.25g
Lauril sulfato de Sodio ……………......0.5g
Agua conservante …………….....csp. 25g
2.5.6. Reactivación de la cepa de Candida albicans(25):
Para la reactivación de la cepa de Candida albicans proporcionada por la
empresa distribuidora Gen Lab. del Perú, el cual vino en la presentación de
un sachet con el liofilizado de la cepa, se siguieron los protocolos
convencionales brindados por el proveedor para la activación, para lo cual
se dejó a temperatura ambiente por 2 horas, luego se abrió el sachet y
mezcló el liofilizado con agua estéril, se retiró con un hisopo el contenido de
la cepa y se aplicó a dos placas Petri con agar Sabouraud e incubó por 48
horas.
Luego de transcurrido este tiempo se evidenció la formación de colonias y
retiró con un hisopo estéril dos colonias del cultivo para re-suspenderlo en
agua destilada, se hicieron diluciones sucesivas 1:10 hasta obtener una
concentración bacteriana de 1.5 x 108 UFC, mediante la comparación con la
escala de McFarland 0.5.
El inóculo obtenido se empleó para realizar los sembrados en placas con
agar Mueller Hinton.
2.5.7. Evaluación de actividad antimicótica de las flores Nerium oleander L.
(laurel rosa):
a) Se realizó un sembrado en superficie del inóculo mediante la técnica en
estrías en 30 placas con agar Mueller Hinton
b) Se prepararon con un sacabocado 3 pocitos (6 mm de diámetro) en 15
placas con cultivo y en 15 placas 2 pozos del mismo diámetro, mediante el
siguiente procedimiento:
·  En las placas con 3 pocitos se colocaron 20 ul de la crema de extracto
metanólico (grupo experimental) al 15 %, 20% y 25% respectivamente
· En las placas con 2 pocitos se colocaron 20 µl de la crema base y 20 µl
de terbinafina respectivamente
· Las placas se incubaron por 24 horas a una temperatura de 37°C + 0,5;
luego de este tiempo se identificó el crecimiento del microorganismo y los
halos de inhibición formados, luego se procedió a realizar la recolección
de datos mediante la medición de la zona de inhibición con el instrumento
de medición digital (vernier), registrando los datos obtenidos en la ficha de
datos.
Nuestra investigación se realizó en el laboratorio MICROCLIN, sucursal-
Chiclayo.
2.6. Métodos de análisis estadísticos
En el análisis de los datos recolectados se emplearon los programas
Microsoft Excel 2016 y el SPSS versión 26, para obtener los parámetros
estadísticos y representar los datos mediante tablas y figuras, además se
realizaron las pruebas estadísticas de normalidad y homogeneidad de
varianzas para posteriormente aplicar las pruebas de contrastación de
ANOVA y Tukey con una significancia de 0,05.
2.7 Aspectos éticos
Se consideraron los principios éticos de todo trabajo de investigación, evitando
el riesgo de daño a los que participaron en el estudio mediante las medidas de
bioseguridad y tratamiento de residuos sólidos para evitar el daño al medio
ambiente, por otro lado el principio de veracidad, confirmando que los
resultados obtenidos son verídicos y sometiéndonos a las pruebas de plagio
que establece la Universidad, así mismo, los autores son los únicos
responsables de la información que está contenida en el presente
estudio.(26,27)
III.  RESULTADOS
Tabla 1. Metabolitos secundarios presentes en el extracto metanólico de
flores de Nerium oleander L. “laurel rosa”.
IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS
Metabolitos Secundarios Reactivos Resultado
Quinonas Borntrager -
Compuestos fenólicos FeCl3 +++
Flavonoides Shinoda ++
Mucílagos -
Taninos FeCl3 +
Alcaloides Dragendorff ++
Triterpenos / Esteroides Liebermann Burchard ++
Aminoácidos Ninhidrina -
Aminoácidos azufrados Acetato de plomo -
Saponinas Espuma -
Leyenda:
Ausente    (-)
Escaso (+)
Leve (++)
Moderado   (+++)
Abundante  (++++)
Interpretación:
En la tabla 1 se muestra el resultado de la marcha fitoquímica obtenida al exponer
el extracto metanólico de las flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” a diferentes
reactivos los cuales al reaccionar con los metabolitos muestran cambios de
coloración, precipitado, turbidez, entre otros; los metabolitos secundarios
encontrados fueron compuestos fenólicos, flavonoides, taninos, alcaloides y
triterpenos.
Tabla 2. Formulación de la crema a base del extracto metanólico de flores de
Nerium oleander L. “laurel rosa” y grupos control que muestran actividad
antifúngica sobre Candida albicans ATCC 10231.
Diámetro del halo de inhibición (mm)
95% Intervalo de confianza para la
Desv. Error Media
N Media Estándar Estándar Límite inferior Límite superior Mínimo Máximo
Crema al 15% 15 8,93 0,43 0,11 8,69 9,17 8,18 9,65
Crema al 20% 15 10,73 0,33 0,09 10,54 10,91 9,97 11,18
Crema al 25% 15 11,28 0,37 0,10 11,07 11,49 10,66 11,83
Crema Base (-) 15 6,11 0,33 0,06 5,98 6,24 5,90 6,62
Terbinafina (+) 15 23,46 0,42 0,11 23,23 23,70 22,60 24,00
Fuente: Elaboración propia
Interpretación:
Los estadísticos obtenidos con respecto a la actividad antifúngica relacionada con
el diámetro de la zona de inhibición formada sobre el cultivo de Candida albicans
ATCC 10231, por las cremas elaboradas a base de Nerium oleander L. (laurel rosa)
a las concentraciones del 15%, 20% y 25%; así mismo, para la crema base (control
negativo) y control positivo (terbinafina), se muestran en la tabla 2, los estadísticos
presentados son la media, desviación estándar, error estándar, el intervalo de
confianza con respecto a la media con un nivel de confianza del 95% y los valores
máximo y mínimo encontrados para cada grupo de datos como se muestra en la
tabla, los valores obtenidos para la crema al 15% fue de 8,93 + 0,43mm, para la
crema al 20% fue de 10,73 + 0,33mm; para la crema al 25% fue de 11,28 + 0,37mm;
por su parte, los grupos control mostraron los siguientes estadísticos, crema base
(control negativo) de 6,11 + 0,33mm y terbinafina (control positivo) de 23,46 +
0,42mm.
Figura  1. Actividad antifúngica sobre Candida albicans ATCC 10231 de las
cremas a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel
rosa” a las concentraciones del 15%, 20% y 25%
Crema 15% Crema 20% Crema 25%
Fuente: Elaboración propia
Los datos obtenidos con respecto a la media y desviación estándar se muestran en
la figura 1, donde nos permite apreciar valores más altos en los diámetros de los
halos de inhibición de los grupos experimentales (crema a base de Nerium oleander
L. (laurel rosa) a las concentraciones del 15%, 20% y 25%;) con respecto al control
negativo, lo de demuestra la presencia de actividad antifúngica, así mismo, al
comparar con el grupo control positivo se observa que este último presenta mayor
actividad antifúngica.
Tabla 3. Análisis de la Varianza (ANOVA) de los datos recolectados
Diámetro del halo de inhibición
Suma de cuadrados df Media al cuadrado F p-valor.
Entre grupos 2664,574 4 666,144 4984,335 0,000
Dentro de grupos 9,355 70 0,134
Total 2673,930 74
Fuente: SPSS ver. 26
Análisis:
En la tabla 3, se observa mediante el análisis de la varianza (ANOVA), en el cual
realizó una comparación de los valores promedio de los halos de inhibición entre
grupos de tratamiento para determinar diferencias entre sus valores, en tal sentido,
el análisis estadístico devuelve un valor p < 0,05; existiendo diferencia
estadísticamente significativa entre los valores promedio de los halos de inhibición
de los grupos.
Conclusión:
Los valores promedio de los halos de inhibición de los distintos grupos de datos
presentan diferencias estadísticamente significativas entre sí; es decir, los grupos
analizados presentan diferente actividad antifúngica.
Además, un valor p < 0,05 rechaza la hipótesis nula (H0) y acepta la hipótesis
alterna (H1), donde se afirma que si presenta actividad antifúngica la crema a base
del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” frente a
Candida albicans ATCC 10231.
Así mismo se muestra, los valores obtenidos para los halos de inhibición de las
cremas a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa”
a sus diferentes concentraciones(observar tabla 2), donde se evidencia que la
crema con extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” al 15%
presenta un halo de inhibición de 8,93 + 0,43mm, para la crema con extracto
metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” al 20% presenta un halo
de inhibición de 10,73 + 0,33mm y para la crema con extracto metanólico de flores
de Nerium oleander L. “laurel rosa” al 25%  presenta un halo de inhibición de 11,28
+ 0,37mm. Estos resultados en comparación con la crema base (control negativo)
que presento un halo de inhibición de 6,11+ 0,33mm; evidencia que las cremas con
extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” a sus diferentes
concentraciones tiene mayor actividad antifúngica frente a Candida albicans
ATCC10231(observar tabla 4).
Por otro lado, los resultados de los halos de inhibición de las cremas a base del
extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” en todas sus
concentraciones (15%, 20% y 25%) comparados con los parámetros en la escala
de Duraffourd (observar tabla 5), refuerza la aceptación de H1 en nuestra
investigación porque se evidencia claramente la sensibilidad presente en Candida
albicans ATCC 10231 a las cremas a base del extracto metanólico de flores de
Nerium oleander L. “laurel rosa” en todas sus concentraciones (15%, 20% y 25%).
Hipótesis de contrastación:
H1: La crema a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel
rosa” si presenta actividad antifúngica frente a Candida albicans ATCC 10231.
H0: La crema a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel
rosa” no presenta actividad antifúngica frente a Candida albicans ATCC 10231.
Tabla 4. Análisis por sub grupos homogéneos mediante la prueba de Tukey
Diámetro de inhibición
HSD Tukeya
Grupos de trabajo N Subconjunto para alfa = 0.05
1 2 3 4 5
Crema Base (-) 15 6,11
Crema al 15% 15 8,93
Crema al 20% 15 10,73
Crema al 25% 15 11,28
Terbinafina (+) 15 23,46
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 15,000.
Fuente: SPSS ver. 26
Análisis:
En la tabla 4, se muestra el análisis estadístico de la prueba de Tukey, la cual se
basa en un análisis similar comparativo de los grupos de datos, pero a diferencia
de la prueba de ANOVA, esta prueba devuelve la comparación por pares y permite
determinar la actividad antifúngica entre todos los grupos de datos; de la tabla se
observa que los valores promedios de los grupos de tratamientos son diferentes
todos entre sí, correspondiente mayor actividad antifúngica a la crema terbinafina
empleada como grupo control positivo.
Tabla 5. Sensibilidad antifúngica de Candida albicans ATCC 10231 frente a las
cremas a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel
rosa” y los grupos control según la escala de Duraffourd
Sensibilidad Sensible Muy Altamente
Tratamiento nula sensible sensible
< 8 mm 8–14 mm 15-20 mm > 20 mm
Crema Base (-) 6,11
Crema al 15% 8,93
Crema al 20% 10,73
Crema al 25%  11,28
Terbinafina (+) 23,46
La sensibilidad antifúngica de Candida albicans ATCC 10231 frente a las cremas a
base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L.  “Laurel  rosa” y los
grupos control se muestra en tabla 5, las que fueron valoradas tomado como
referencia la escala de Duraffourd; se aprecia que la crema base (control negativo)
presentó sensibilidad nula, se observa también que el hongo es sensible a las
cremas elaboradas a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L.
“Laurel rosa” a todas las concentraciones, y es altamente sensible a la terbinafina
(control positivo).
IV.  DISCUSIÓN
4.1.  Discusión de resultados
La inefectividad de los tratamientos farmacológicos, por el uso repetitivo de
los mismos. En infecciones causadas por Candida Albicans es la razón de
esta investigación, decidiendo así elaborar una crema de uso tópico con
actividad antifúngica mediante la incorporación de los principios activos
obtenidos de las flores de Nerium oleander L. “Laurel rosa”. Cuyos resultados
hallados se discuten a continuación:
Con respecto al primer objetivo se identificó en el extracto metanólico de
flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” compuestos fenólicos (+++),
flavonoides (++), taninos (+), alcaloides (++) y triterpenos (++)  luego del
estudio fitoquímico realizado, estos resultados se corroboran con los
encontrados por Esmail, A. (2020), quien realizó un estudio fitoquímico de
las hojas de Nerium oleander y pudo identificar alcaloides, flavonoides,
taninos, fenólicos, saponinas, cardenólidos, glucósidos cardíacos,
triterpenoides, triterpenos y esteroides resultados que se muestran similares
a los encontrados en el estudio fitoquímico de esta investigación, a estos
principios activos se les atribuye actividad antimicrobiana y farmacológica de
esta planta.
Con respecto al segundo objetivo, se evidenció actividad antifúngica sobre
Candida albicans ATCC 10231 de las cremas a base del extracto metanólico
de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” a las concentraciones del 15%,
20% y 25% mediante la formación de halos de inhibición para la crema al
15% de 8,93 + 0,43mm, para la crema al 20% de 10,73 + 0,33mm; para la
crema al 25% de 11,28 + 0,37mm; superior al del control negativo empleado
(crema base) de 6,11 + 0,33mm. Del mismo modo, Chumacero P. y León
E. (2021), evaluaron el efecto antibacteriano de los extractos etanólicos y
metanólicos de Nerium oleander sobre Escherichia coli obteniendo halos de
inhibición para el extracto metanólico al 100% de las hojas de la planta de
21.040mm, estos valores si bien es cierto superan los resultados obtenidos,
se debe valorar el hecho de encontrar actividad antimicrobiana en los
extractos de esta planta, además de considerar que el estudio trabajo bajo
una formulación farmacéutica.
Como tercer objetivo, se confirmó que todas las cremas elaboradas al 15%,
20% y 25% poseen actividad antifúngica contra Candida albicans ATCC
10231, lo que se demuestra en la figura 1, al observar la diferencia en los
tamaños de los halos de inhibición de los grupos experimentales con el
control negativo. Por otro lado, Rojas R. (2019), también evaluó el efecto del
decocto de Nerium oleander sobre larvas III de Spodoptera frugiperda in vitro
observando que poseen propiedades o principios activos contra estas larvas,
así mismo, Fernández H. (2016), observó que esta planta tiene la capacidad
de combatir plagas, por tal motivo, evaluó la actividad rodenticida del laurel
rosa (Nerium oleander) a diferentes concentraciones, los resultados
mostraron que Nerium oleander (laurel rosa) posee un efecto letal sobre esto
roedores a las concentraciones del 30%, 40% y 50%.
Dos Santos A. et al (2022), por su parte evaluó el poder de esta planta
mediante una revisión sistémica de diferentes estudios, evidenciando que
esta es utilizada para la parasitosis, fiebre, laxante, purgante, antiséptico,
cicatrizante, antihemorrágico, expectorante, antídoto en mordedura de
serpientes, diurético y emético lo que demuestra sus propiedades
medicinales, por lo que, son una fuente de metabolitos con interés
farmacológico.
Es reconocida la actividad que presenta los extractos de esta planta en
diferentes formulaciones, lo que se debe principalmente a sus principios
activos, los que permanecen sin cambio al ser preparados de distinta manera
o mezclados con otros componentes, lo que la hace una especie vegetal
prometedora en distintos campos.
Con respecto al cuarto objetivo, luego de realizar la comparación de la
actividad antifúngica de las cremas elaboradas a base del extracto
metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” con terbinafina sobre
Candida albicans ATCC 10231 se evidencia que estas presentan menor
efecto antifúngico que la crema terbinafina empleada como control positivo.
Por su parte, Ayumi, I. (2021), desarrolló una solución antimicótica a partir
de las hojas de Nerium oleander, para combatir un microorganismo (moho)
que crece en el pan, demostrando que esta planta presenta actividad frente
a este microorganismo, retrasando la aparición de hongos y eliminándolos,
pero determinó que dicho preparado tiene menor acción que los productos
comerciales del mercado, sin embargo, es una buena alternativa natural.
En ambos estudios se muestra que una formulación a base de especies
vegetales no llega a tener el mismo efecto que un producto comercial el cual
está elaborado a base de componentes químico que producen daño también
al medio ambiente o representan riesgo para los manipuladores, lo que no
sucede con los productos naturales.
Con respecto al quinto y último objetivo, se evaluó la sensibilidad antifúngica
de Candida albicans ATCC 10231 frente a las cremas a base del extracto
metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” y los grupos control
mediante la valoración del tamaño de los halos de inhibición empleando la
escala de Duraffourd, donde se pudo observar que Candida albicans ATCC
10231 frente a la crema base (control negativo) presentó sensibilidad nula,
se observa también que el hongo es sensible a las cremas elaboradas a
base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “Laurel rosa” a
todas las concentraciones, y es altamente sensible a la terbinafina (control
positivo)
4.2. Conclusiones
1. Se determinó actividad antifúngica sobre Candida albicans ATCC 10231
en las cremas a base del extracto metanólico de flores de Nerium oleander
L. “laurel rosa” a las concentraciones del 15%, 20% y 25% mediante la
formación de halo de inhibición de 8,93 + 0,43mm; 10,73 + 0,33mm y
11,28 + 0,37mm respectivamente.
2. Se identificaron los metabolitos secundarios como compuestos fenólicos
(+++), flavonoides (++), taninos (+), alcaloides (++) y triterpenos (++) en
el extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa”.
3. Se determinó que todas las concentraciones de la crema a base del
extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” que
posee actividad antifúngica sobre Candida albicans ATCC 10231 al
presentar mayor halo de inhibición que el grupo control negativo.
4. La actividad antifúngica de las cremas a base del extracto metanólico de
flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” son menores que la terbinafina
sobre Candida albicans ATCC 10231
5. Al evaluar la sensibilidad antifúngica de Candida albicans ATCC 10231 se
observa que presentó sensibilidad nula a la crema base (control negativo),
es sensible a las cremas a todas las concentraciones elaboradas a base
del extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. “Laurel rosa” y es
altamente sensible a la terbinafina (control positivo)
4.3. Recomendaciones
- Profundizar el estudio fitoquímico de Nerium oleander L. “laurel rosa” con
estudios complementarios mediante instrumentos analíticos que permitan
identificar la estructuras y separar los metabolitos.
- Evaluar el efecto de las cremas a base de Nerium oleander L. “laurel rosa”
frente a otros tipos de microorganismos y en diferentes formulaciones
farmacéuticas
- Evaluar el efecto sinérgico en formulaciones magistrales de Nerium
oleander L. “laurel rosa” con otros medicamentos
- Promover el uso de plantas medicinales en el tratamiento farmacológico
de las enfermedades.
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PAHO. 2016;
Anexo A. Matriz de consistencia
Tema: ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA DE LA CREMA A BASE DEL EXTRACTO METANÓLICO DE FLORES DE Nerium oleander L.  “LAUREL ROSA”
SOBRE CANDIDA ALBICANS ATCC 10231
Problema general Objetivo general Hipótesis General
¿La crema a base del extracto metanólico de flores de Determinar la actividad antifúngica que poseerá la  La crema a base del extracto metanólico
Nerium oleander L. “laurel rosa” poseerá acción crema a base del extracto metanólico de flores de de flores de Nerium oleander L. (laurel
antifúngica sobre Candida albicans ATCC 10231? Nerium oleander L. (laurel rosa) sobre a Candida rosa) presenta actividad antifúngica frente
albicans ATCC 10231 a Candida albicans ATCC 10231
Problemas específicos Objetivos específicos Hipótesis específicas
¿Cuáles serán los metabolitos secundarios con Identificar los metabolitos secundarios con actividad El extracto metanólico de flores de Nerium
actividad antifúngica, que se encuentran presentes en antifúngica, que se encuentran presentes en el oleander L. “laurel rosa” presenta
el extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. metabolitos secundarios con actividad
“laurel rosa”? “laurel rosa”. antifúngica.
¿Cuál será la actividad antifúngica sobre Candida Determinar la actividad antifúngica sobre Candida Las cremas a base del extracto metanólico
albicans ATCC 10231 de las cremas a base del albicans ATCC 10231 de las cremas a base del de flores de Nerium oleander L. “laurel
extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. rosa” a las concentraciones del 15%, 20%
“laurel rosa” a las concentraciones del 15%, 20% y “laurel rosa” a las concentraciones del 15%, 20% y y 25% presentan actividad antifúngica
25%? 25% sobre Candida albicans ATCC 10231
¿Cuál será la formulación de la crema a base del Determinar la formulación de la crema a base del Las cremas a base del extracto metanólico
extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. de flores de Nerium oleander L. “laurel
“laurel rosa” que posee actividad antifúngica sobre “laurel rosa” que posee actividad antifúngica sobre rosa” al 15%, 20% y 25% poseen actividad
Candida albicans ATCC 10231? Candida albicans ATCC 10231. antifúngica sobre Candida albicans ATCC
¿Cuál será la actividad antifúngica de las cremas a Comparar la actividad antifúngica de las cremas a 10231.
base del extracto metanólico de flores de Nerium base del extracto metanólico de flores de Nerium Las cremas a base del extracto metanólico
de flores de Nerium oleander L. “laurel
oleander L. “laurel rosa” comparado con terbinafina oleander L. “laurel rosa” con terbinafina sobre rosa” presentan mayor actividad
sobre Candida albicans ATCC 10231? Candida albicans ATCC 10231. antifúngica a la terbinafina sobre Candida
¿Cuál será la sensibilidad antifúngica de Candida Evaluar la sensibilidad antifúngica de Candida albicans ATCC 10231.
albicans ATCC 10231 frente a las cremas a base del albicans ATCC 10231 frente a las cremas a base del Candida albicans ATCC 10231 es muy
extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. extracto metanólico de flores de Nerium oleander L. sensible a las cremas a base del extracto
“laurel rosa” y grupos control? “laurel rosa” y los grupos control metanólico de flores de Nerium oleander L.
ü “laurel rosa” y los grupos control sobre
Candida albicans ATCC 10231
Anexo B. : Operacionalización de variables
UNIDAD DE
VARIABLE INDEPENDIENTE DEFINICIÓN CONCEPTUAL DIMENSIONES INDICADORES MEDIDA/PUNTO DE
CORTE
25%
Crema a base del extracto metanólico de Formulación farmacéutica obtenida a Concentración
flores de Nerium oleander L. “laurel rosa” base de principios activos naturales. 20%
Porcentaje
15%
UNIDAD DE
VARIABLE DEPENDIENTE DEFINICIÓN CONCEPTUAL DIMENSIONES INDICADORES MEDIDA/PUNTO DE
CORTE
≤ 8mm Sensibilidad Nula (-)
Inhibición en el crecimiento o Sensible (+)
Actividad antifúngica sobre Candida 8mm a 14mmdesarrollo normal de los hongos Tamaño de halo
albicans ATTCC 10231 de inhibición 15mm a 20mm Muy Sensible (++)
˃ a 20mm Sumamente Sensible (+++)
Anexo C. : Ficha de recolección de datos – Estudio Fitoquímico
Metabolitos Secundarios Reactivos Resultado
Quinonas Borntrager
Compuestos fenólicos FeCl3
Flavonoides Shinoda
Antocianinas NaOH 10%
Taninos Gelatina
Taninos Gelatina Sal
Alcaloides Dragendorff
Alcaloides Wagner
Alcaloides Mayer
Triterpenos y Esteroides Liebermann Burchard
Lactonas α, β insaturadas Baljet
Azucares Reductores Benedict
Azucares Reductores Fehling
Saponinas Espuma
Leyenda:
Ausente    (-)
Escaso (+)
Leve (++)
Moderado   (+++)
Abundante  (++++)
Anexo D. : Ficha de recolección de datos – Microbiología
Concentración de la Crema a base del extracto Grupos control
metanólico de flores de Nerium oleander L.
Repetición “laurel rosa”
Negativo Positivo
15% 20% 25% (crema (terbinafina)
base)
1 9,01 10,62 11,47 6,62 22,96
2 8,50 9,97 11,05 5,98 23,23
3 9,52 10,59 11,44 5,90 23,57
4 9,65 11,07 11,67 5,92 23,72
5 8,67 10,76 10,66 6,02 23,84
6 9,22 11,18 11,79 5,92 23,74
7 8,89 10,81 11,83 5,98 24,00
8 8,99 10,89 10,85 5,95 23,07
9 9,21 10,81 11,60 6,26 23,32
10 8,28 10,53 11,50 5,92 22,60
11 9,11 10,54 10,85 5,91 23,94
12 9,36 10,30 10,85 6,12 23,77
13 8,18 11,11 11,18 6,33 23,12
14 8,70 11,11 11,21 6,42 23,89
15 8,68 10,59 11,25 6,40 23,20
Anexo E. : Carta de presentación
Anexo F. : Carta de aceptación
Anexo G. : Certificado de clasificación taxonómica
Anexo H: Certificado de análisis de la cepa

Anexo I. : Determinación del comportamiento paramétrico de los datos
Tabla 6. Prueba de normalidad
Shapiro-Wilk
Grupos de trabajo Statistic df Sig.
Crema al 15% 0,978 15 0,954
Crema al 20% 0,943 15 0,422
Diámetro del halo Crema al 25% 0,949 15 0,510
de inhibición (mm)
Crema Base (-) 0,828 15 0,008
Terbinafina (+) 0,928 15 0,258
Fuente: SPSS ver. 26
Tabla 7. Prueba de homogeneidad de varianzas
Estadístico de
Levene gl1 gl2 Sig.
Se basa en la media 2,037 4 70 0,099
 Diámetro del Halo de Se basa en la mediana 1,795 4 70 0,140
Inhibición
Se basa en la mediana y 1,795 4 67,026 0,140
con gl ajustado
Se basa en la media 2,053 4 70 0,096
recortada
Anexo J. : Evidencias de la parte experimental
Figura  2. Recolección de la especie vegetal
Figura  3. Selección y lavado de la muestra más adecuada
Figura  4. Secado de las flores de Nerium oleander L.  “LAUREL ROSA”
Figura  5. Obtención del pulverizado de flores de Nerium oleander L.
“LAUREL ROSA”
Figura  6. Preparación del macerado y filtración
Figura  7. Obtención del extracto metanólico de Nerium oleander L.
“LAUREL ROSA”
Figura  8. Prueba de solubilidad
Figura  9. Estudio fitoquimico
Figura  10. Preparación de la formulación en crema
Figura  11. Preparación del inóculo
Figura  12. Preparación de pocitos en agar y aplicación de la crema
Figura  13. Incubación de los cultivos de Candida albicans
Figura:  14. Recolección de datos: Medida del halo de inhibición