FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO DEL EXTRACTO
ETANÓLICO DE Vaccinium corymbosum L. (arándano)
Y Fragaria vesca L. (fresa)
TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO
FARMACÉUTICO
AUTORES
Bach. CARRIÓN LIZANA, DANI
https://orcid.org/0000-0003-1871-0070
Bach. TERÁN RAMÍREZ, ELVIA
https://orcid.org/0000-0002-2189-7019
ASESOR
Mg. FLORES LÓPEZ, OSCAR BERNUY
https://orcid.org/0000-0001-9091-2537
LIMA - PERÚ
2022
DEDICATORIA
A mi Dios y familia por el apoyo y
amor incondicional.
A Dios, ya que gracias a él he logrado concluir mi carrera,
a mis padres, porque ellos siempre estuvieron a mi lado brindándome su apoyo a mis
hijos (Halton, Jhoseph y Herson) que fueron el impulso, a mis abuelitos, a mi tía y a mi
primo que me levantaron cuando estuve a punto de rendirme, a mis hermanas por sus
palabras y compañía,
a mi esposo por su amor, su tiempo y su apoyo incondicional, a mi amiga que estuvo
en las buenas y malas conmigo.
1
AGRADECIMIENTO
A la Universidad María Auxiliadora por acogernos y darnos
la oportunidad de culminar nuestra carrera
frente a la coyuntura nacional relacionada a la pandemia
A nuestro asesor de tesis. Mg. Q.F. Oscar Flores López,
por compartir su conocimiento en relación a consejos y
sugerencias para poder llevar a cabo el desarrollo
 de la presente tesis.
2
INDICE GENERAL
DEDICATORIA ............................................................................................................. 1
AGRADECIMIENTO ..................................................................................................... 2
INDICE GENERAL ....................................................................................................... 3
RESUMEN .................................................................................................................... 6
ABSTRACT .................................................................................................................. 6
I. INTRODUCCIÓN ................................................................................................... 8
II. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................ 12
2.1. Enfoque y diseño de la investigación ............................................................ 12
2.2. Población, muestra y muestreo..................................................................... 12
2.3. Variables de investigación ............................................................................ 13
2.4. Técnicas e instrumentos para la recolección de datos .................................. 13
2.5. Plan metodológico para la recolección de datos ........................................... 13
2.6. Procesamiento del análisis estadístico ......................................................... 17
2.7. Aspectos éticos ............................................................................................ 17
III. RESULTADOS ................................................................................................. 18
Resultados de la Prueba de solubilidad ...................................................................... 18
Resultados de Scring Fitoquimico ............................................................................... 19
1. DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE SEGÚN EL MÉTODO DPPH ..................... 23
Resultados de la evaluación antioxidante mediante método espectrofotométrico con
radical DPPH en muestras. ......................................................................................... 24
REGISTRO FOTOGRAFICO ...................................................................................... 29
IV. DISCUSIÓN ..................................................................................................... 31
4.1. Discusión de resultados ................................................................................ 31
4.2. Conclusiones ................................................................................................ 31
4.3. Recomendaciones ........................................................................................ 32
V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................. 32
VI. ANEXO ............................................................................................................ 35
ANEXO A: Técnicas e instrumentos de recolección de datos ..................................... 35
3
ANEXO B: Matriz de consistencia ............................................................................... 39
ANEXOS C: Operacionalización de las variables ........................................................ 40
ANEXOS D: Certificación de las plantas. .................................................................... 41
ANEXOS E: Evidencias del trabajo de campo ............................................................ 43
4
Índice de Ilustraciones
Ilustración 1: Reacción de radical con compuestos antioxidantes ............................. 14
Ilustración 2: Ecuación para la actividad antioxidante con DPPH .............................. 16
Ilustración 3: Recta de Trolox para DPPH ................................................................. 24
Ilustración 4: Actividad antioxidante del extracto acuoso de arándanos (uM Equiv.
Trolox) ........................................................................................................................ 25
Ilustración 5: Actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de arándanos (uM
Equiv. Trolox).............................................................................................................. 26
Ilustración 6: Actividad antioxidante del extracto acuoso de fresas (uM Equiv. Trolox)
 ................................................................................................................................... 27
Ilustración 7: Actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de fresas (uM
Equiv.Trolox) .............................................................................................................. 28
Ilustración 8: Muestras de arándanos y fresas, adicionadas para el análisis ............. 29
Ilustración 9: Preparación de las muestras con solución DPPH y solución patrn;
Solución metanólica de Trolox a 1000 uM .................................................................. 30
Ilustración 10: Espectrofotómetro, utilizado en la medición de la capacidad
antioxidante. ............................................................................................................... 30
Índice de Tablas
Tabla 1: Resultados del patrón de referencia para DDPH: Trolox .............................. 23
Tabla 2: Resultados de la actividad antioxidante del extracto acuoso de arándano ... 24
Tabla 3: Resultados de la actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de
arándanos ................................................................................................................... 25
Tabla 4: Resultados de la actividad antioxidante del extracto acuoso de fresas ......... 26
Tabla 5: Resultados de la actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de fresas
 ................................................................................................................................... 27
5
RESUMEN
Objetivo: Determinar capacidad antioxidante in vitro del extracto etanólico de
“arándano” y “fresa”
Materiales y métodos: Tratamiento de muestra, pesó 1 kg y obtuvo el zumo.
Elaboró extracto acuoso y extracto hidroalcohólico a concentración de 10%. Para
extracto, se pesó 500 gramos aleatoriamente, se preparó extracto a
concentración de 10%, en Baño María a 90 °C. Elaborar extracto hidroalcohólico
se pesó 200 gramos aleatoriamente y se maceró con etanol 70% a concentración
de 10% por 10 días a temperatura ambiente. Se filtraron mediante papel filtro
para pruebas antioxidantes.
Resultado: Capacidad antioxidante extracto acuoso arándanos (μM equivalente
Trolox) fueron: 956.295 en 1000 μg/mL, 849.591 en 500 μg/mL y 780.885 en 100
μg/mL; así mismo, extracto hidroalcohólico arándanos (μM equivalente Trolox)
fueron: 933.649 en 1000mμg/mL, 818.501 en 500 μg/mL y 665.353 en 100
μg/mL. Por otro lado, capacidad antioxidante extracto acuoso fresas (μM
equivalente Trolox) fueron: 903.327 en 1000 μg/mL, 702.201 en 500 μg/mL y
485.338 en 100 μg/mL; además, del hidroalcohólico arándano (μM equivalente
Trolox) fueron: 782.805 en 1000 μg/mL, 553.659 en 500 μg/mL y 313.767 en 100
μg/mL.
Conclusiones: Se verificó capacidad antioxidante in vitro del extracto etanólico
de VACCINIUM CORYMBOSUM Y FRAGARIA VESCA, mayor porcentaje
antioxidante el arándano.
Palabras claves: Capacidad antioxidante. Extracto etanólico. DPPH. ABTS.
ABSTRACT
Objective: To determine in vitro antioxidant capacity of ethanolic extract of
"blueberry" and "strawberry".
Materials and methods: Sample treatment, weighed 1 kg and obtained the juice.
6
Prepared aqueous extract and hydroalcoholic extract at 10% concentration. For
extract, 500 grams were weighed randomly, prepared extract at 10%
concentration, in water bath at 90 °C. To prepare hydroalcoholic extract, 200
grams were randomly weighed and macerated with 70% ethanol at 10%
concentration for 10 days at room temperature. They were filtered through filter
paper for antioxidant tests.
Result: Antioxidant capacity aqueous extract blueberries (μM Trolox equivalent)
were: 956.295 at 1000 μg/mL, 849.591 at 500 μg/mL and 780.885 at 100 μg/mL;
likewise, hydroalcoholic extract blueberries (μM Trolox equivalent) were: 933.649
at 1000mμg/mL, 818.501 at 500 μg/mL and 665.353 at 100 μg/mL. On the other
hand, antioxidant capacity aqueous extract strawberries (μM Trolox equivalent)
were: 903.327 at 1000 μg/mL, 702.201 at 500 μg/mL and 485.338 at 100 μg/mL;
furthermore, from hydroalcoholic cranberry (μM Trolox equivalent) were: 782.805
at 1000 μg/mL, 553.659 at 500 μg/mL and 313.767 at 100 μg/mL.
Conclusions: In vitro antioxidant capacity of the ethanolic extract of VACCINIUM
CORYMBOSUM AND FRAGARIA VESCA was verified, higher antioxidant
percentage the blueberry.
Keywords: Antioxidant capacity. Ethanol extract. DPPH. ABTS.
7
I. INTRODUCCIÓN
Los antioxidantes son componentes que se encuentran relacionados con los
alimentos y que puede retrasar o disminuir los efectos adversos de la oxidación,
función fisiológica normal en los humanos que produce daño y envejecimiento
celular a través de la formación de radicales libres1.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) señaló que en el 2017 cerca de 3,9
millones de fallecidos fue causa del  escaso consumo de frutas y verduras,
debido a que estos alimentos reducen el peligro de padecer alteraciones como
cardiopatías y algunos tipos de cáncer, por su alto contenido de flavonoides y
otros antioxidantes2. Además la OMS calculo que el 70% de muertes prematuras
son producidas por enfermedades no transmisibles e indico que por cada año
podrían salvarse 1,7 millones de vida si se consumiera cantidades suficientes de
frutas y verduras3.
En la Revista Científica de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad
de Trujillo, se indicó que el estrés oxidativo produce especies reactivas (ERO)
dañinas para el organismo, pudiendo desencadenar una serie de
enfermedades6. En la ciudad de Chiclayo la prevalencia en algunos tipos de
cáncer ha ido en aumento, indicando que un exceso de radicales libres en
nuestro organismo puede tener efectos genotóxicos7.
Los antioxidantes son una composición que disminuyen la velocidad de
oxidación y que a su vez, contrastan la formación de radicales libres, los mismos
que juegan un papel importante en enfermedades degenerativas26.
Los antioxidantes obtenidos de las plantas desde la perspectiva fitoquímico
pueden ser taninos, lignanos, estilbenos, cumarinas, quinonas, xantonas, ácidos
fenólicos, flavones, flavonoles, catequinas, antocianinas y proantocianinas los
cuales debido a sus cualidades redox pueden ejercer como generadores de
hidrógenos y de esta manera evitar o prorrogar el aumento de enfermedades
degenerativas26.
Chipana (2019), publicaron un estudio titulado “evaluación de la capacidad
antioxidante de harina de frutilla (fragaria ananassa) proveniente de las
variedades festival y benicia”. Su objetivo fue determinar el efecto de la
temperatura de secado sobre la capacidad antioxidante de la harina de frutilla.
8
En su metodología se realizaron ensayos de secado a temperaturas de 60°, 70°
y 80° y la capacidad antioxidante se determinó mediante los ensayos Folin
Ciocalteau y DPPH. En los resultados el contenido de fenoles totales fue entre
1402,7 y 1928,8 mg AG/ 100 g harina y los valores de DPPH, entre 459,8 y 722,2
mg Trolox/ 100 g harina.  Se concluyo que la capacidad antioxidante de harina
de frutilla deshidratada disminuye con el aumento de temperatura12.
Velásquez (2019), realizó un estudio titulado “estudio de la actividad antioxidante
de extractos de frutos de agraz (vaccinium meridionale)”. El objetivo fue
determinar la actividad antioxidante de varias muestras de agraz “Vaccinium
meridionale”. En la metodología se prepararon extractos acuosos y se
realizaron pruebas antioxidantes como: DPPH y ABTS. Los resultados no
mostraron diferencias entre las 6 muestras del fruto agraz. Se concluye que los
seis métodos de extracción presentan actividad antioxidante parecida y
estadísticamente no son diferentes13.
López (2017), realizó un estudio titulado “estudio comparativo de la actividad
antioxidante en fresas de cultivos de origen tradicional versus ecológico”. El
objetivo fue evaluar la actividad antioxidante de Fragaria x ananassa en
diferentes estados de conservación, para comparar el cultivo tradicional y el
ecológico. En su metodología las fresas de los dos cultivos se sometieron a
características físico-químicas, el contenido fenólico se evaluó por Folin-
Ciocalteu y la actividad antioxidante se determinó por los métodos DPPH y
ABTS. En los resultados obtenidos no se encontró diferencias en ambos cultivos,
pero se evidenció que el proceso de deshidratación del fruto produce la
destrucción de compuestos fenólicos, disminuyendo la función antioxidante. Se
finaliza que las fresas de ambos cultivos exponen igual contenido de fenoles
totales e igual actividad antioxidante15.
Barreto (2016), presentó un estudio titulado “efecto antibacteriano in vitro del
extracto etanolico de fragaria vesca l “fresa” sobre streptococcus mutans atcc
25175”. Tuvo como fin concluir que el efecto antibacteriano del extracto etanólico
de Fragaria vesca L “fresa” sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, a través
de un estudio experimental in vitro.  En la metodología se elaboró un extracto
etanólico de Fragaria vesca L “fresa” con alcohol de 70% y se elaboraron en
concentraciones de 25%, 50% y 75%, se realizó la siembra en placas con agar
Muller–Hinton–Sangre y utilizando el método de difusión de discos de Kirby y
9
Bauer se hizo la prueba de susceptibilidad. Los resultados se hicieron mediante
el análisis estadístico, siendo la densidad mínima bactericida para el extracto al
75% con un halo de 10.5mm y la densidad mínima inhibitoria fue la del 25%. Se
concluye que el extracto etanólico de Fragaria vesca L “fresa” si muestra poder
antibacteriano in vitro sobre Streptococcus mutans10.
Vargas (2018), realizó un titulado “evaluación de los macro componentes y su
capacidad antioxidante de psidium guajava l. (guayaba)”, tuvo como objetivo
evaluar el valor nutricional del Psidium guajava (guayaba) y su poder
antioxidante, utilizo la pulpa del fruto y se realizaron los estudios bromatológicos
correspondientes. El extracto etanólico se obtuvo de la pulpa seca y se obtuvo
su poder antioxidante a través del método DPPH, además cuantifico la cantidad
de flavonoides utilizando el método de Sotero y García, lo cual determinó
flavonoides presentes en la fruta, a través de la lectura de absorbancia a una
longitud de onda de 374 nm, obteniendo 43,89 ± 0.04 g quercetina/100g muestra
original un tipo de flavonoide.
Moya (2017), realizaron un estudio titulado “actividad fotoprotectora de
formulación tópica a base del extracto hidroalcohólico de fragaria vesca l.
(fresa)”. Tuvo como meta estimar la actividad fotoprotectora de una formulación
tópica a base de extracto hidroalcohólico de la fresa. Para la metodología se
proyectó un extracto hidroalcohólico y se realizó un screening fitoquímico. La
cantidad de polifenoles totales se midió por el método Folin Ciocalteu, la
actividad antioxidante se determinó por el método del radical DPPH y para la
actividad fotoprotectora se aplicó el método de Mansur. Los resultados indicaron
15,50 mg GAE/g de polifenoles totales, 81,22% de capacidad antioxidante del
extracto y la actividad fotoprotectora fue de 12,05. Se concluyó que Fragaria
vesca L. “fresa” contiene compuestos que le otorgan la actividad fotoprotectora
para proteger la piel de las radiaciones UVA-UVB9.
Método DPPH
Este método fue desarrollado por Brand - Williams et al., en el año 1995, su
fundamento consiste en que el radical DPPH tiene un electrón desapareado y es
de color azul-violeta, decolorándose hacia amarillo pálido por la reacción de la
presencia de una sustancia antioxidante, siendo medida
espectrofotométricamente a 517 nm. Por diferencia de absorbancia se determina
el porcentaje de captación de radical libre DPPH.12
10
Método ABTS
Este método fue desarrollado por RE et al., en el año 1999, el radical ABTS es
obtenido en la reacción de ABTS (7 mM) con persulfato potásico (2,45 mM,
concentración final) generados a temperatura ambiente (±25ºC) y en la oscuridad
durante 16 h. Esta absorbancia es medida continuamente durante 7 minutos. El
antioxidante sintético de referencia, Trolox, se realiza a una concentración de 0-
15 µM (concentración final) en etanol, dándose con las mismas propiedades, lo
que se hace también con ácido ascórbico (0-20 mg/100 mL). Finalmente, el
resultado se representa en TEAC (actividad antioxidante equivalente a Trolox) 13
La presente investigación tiene justificación definida, Así, permite fortalecer el
conocimiento con respecto a la capacidad antioxidante de la fresa y arándano
frente a la salud del organismo humano, debido a que, los antioxidantes son una
composición que disminuyen la velocidad de oxidación y que a su vez, contrastan
la formación de radicales libres, los mismos que juegan un papel importante en
enfermedades degenerativas; estos se caracterizan por su función primordial de
impedir o retrasar la oxidación de diversas sustancias específicamente de los
ácidos grasos, tales reacciones producen en el organismo alteraciones
fisiológicas que conllevarían a diversas enfermedades. Por lo tanto, la
investigación encuentra interés y capacidad para su desarrollo y ejecución, así
mismo, los investigadores nos encontramos con interés y capacidad para
desarrollar la presente investigación, la cual es importante para su aplicación en
la industria farmacéutica.
La presente investigación tuvo como objetivo general:
Determinar la capacidad antioxidante in vitro del extracto etanólico de “arándano”
y “fresa”
Debido a lo expuesto, se consideran la siguiente hipótesis general:
El extracto etanólico de Vaccinium corymbosum (arándano) y Fragaria Vesca
(fresa) presentan capacidad antioxidante
11
II. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1. Enfoque y diseño de la investigación
El sentido de la presente es de carácter cuantitativo, esto debido a que cuenta
con evidencias medibles; a su vez, experimental porque se realizan ensayos
necesarios, los mismos que muestran resultados posiblemente usado en la
industria farmacéutica.
2.2. Población, muestra y muestreo
v Población: Se recolectó 6 kilogramos de muestra de Vaccinium corymbosum
(arándano), y 6 kilogramos Fragaria Vesca (fresa), 3 kg para su tratamiento
de actividad antioxidante y 3 kg para la elaboración de pruebas de solubilidad
y marcha fitoquímica; recolectadas en el fundo “El Conquistador”, Sector
Huacariz, distrito, provincia y departamento de Cajamarca a una altitud de
2750 m.s.n.m.
v Muestra: Se utilizó 2 Kg de muestra para elaboración de extracto en pruebas
de solubilidad y marcha fitoquímica, y 1 kg para actividad antioxidante tanto
para Vaccinium corymbosum (arándano) y Fragaria Vesca (fresa),
recolectadas en el fundo “El Conquistador”, Sector Huacariz, distrito, provincia
y departamento de Cajamarca a una altitud de 2750 m.s.n.m.
El género Fragaria es una planta perenne, pequeña; que está compuesta por un
conjunto de hierbas enredaderas y trepadoras. La primera especie que se
encontró creciendo en forma abundante en el hemisferio norte fue Fragaria
vesca16.
La especie Fragaria Vesca, es un hibrido octoploide, que destaca por ser de
mejor calidad y productividad, sus frutos son grandes y de agradable sabor,
produce abundantes estolones17.
Fragaria spp. Cuenta con más de 160 especies y la especie Fragaria x
ananassa es un hibrido resultante del cruce de Fragaria chiloensis y Fragaria
virginiana, se cultiva especialmente en Ecuador, Bolivia y Perú17.
Esta especie se viene cultivando desde hace siglos en Europa, Asia y los
Estados Unidos de Europa, siendo su origen en Europa en la región alpina, años
después se descubrió una fresa monumental la cual se le conoce como fresón o
12
frutilla y que todos conocemos como fresa. Esta planta de la frutilla es pequeña
con un tamaño no menor a 50 cm de alto18.
Crece en forma salvaje en climas templados y subtropicales en todo el mundo y
se le conoce como fresa o frutilla16.
Crece en climas con temperaturas de 10 a 25°C, siendo el ideal de 12 a 18°C.
Las heladas y vientos fríos son desfavorables para su buen crecimiento y los
días con sol con periodo de 8 horas a 15°C y noches frescas, favorece su buen
crecimiento. La mejor producción de la fresa es durante sus dos primeros años,
después el rendimiento es menor, con frutos de menor calidad, debido a la
propagación de plagas y enfermedades que está expuesta la planta17,19.
2.3. Variables de investigación
Variable independiente: Capacidad antioxidante.
Variable dependiente: Extracto etanólico de Vaccinium corymbosum
arándano. Extracto etanólico de Fragaria Vesca – Fresa.
2.4. Técnicas e instrumentos para la recolección de datos
v Capacidad antioxidante mediante el ensayo DPPH.
2.5. Plan metodológico para la recolección de datos
v Proceso de extracción del extracto etanólico:
· Recolección y transporte de las muestras: Se recolectaron 6 Kg de
Vaccinium corymbosum (arándano) y 6kg de Fragaria Vesca (fresa)
expendidos en el fundo “El Conquistador”, Sector Huacariz, distrito,
provincia y departamento de Cajamarca, durante la mañana para evitar
el calentamiento solar. Luego fueron trasladados a laboratorios
Indacips-Perú, para posteriormente eliminar los frutos que no cumplan
con los criterios de inclusión, los seleccionados se lavaron con agua
destilada14.
§ Secado, trituración y tamizaje: Los frutos lavados se secaron sobre
papel craff a temperatura ambiente (±20°C) bajo sombra para obtener
un secado uniforme durante 5 días, Luego se procedió a triturar hasta
partículas diminutas con la ayuda de un mortero. La estabilización de
la muestra, se puede realizar a 110 °C por dos minutos en la estufa.
Después de triturarlos se prosiguió a tamizar con un tamizador N° 10
para obtener un polvo con buenas características reológicas15.
13
§ Obtención del extracto etanólico: Se utilizó un percolador ámbar (con
diámetro de 30 cm), se colocó algodón como filtro y arenilla fina para
un mayor filtrado. Se pesaron 200 gramos de cada muestra (arándano,
fresa) pulverizada y tamizada. Se humectó con solución etanólica al 70
% (previamente preparada para un volumen de 1000 mL v/v). Luego se
adicionó 100 mL más de la solución etanólica y se dejó macerar por 72
horas en oscuridad. Pasado el tiempo de maceración se prosiguió con
la percolación, vertiendo toda la solución de etanol hasta saturar las
muestras (arándano, fresa). Finalmente se prosiguió a obtener el
extracto por goteo durante 20 minutos hasta obtener aproximadamente
100 mL de cada extracto, finalmente se almacenó en frascos ámbar
rotulados para su posterior uso15.
v Determinación de la capacidad antioxidante mediante la técnica 2,2-
Difenil-1-Picrilhidrazilo. (DPPH)
Se determinó la actividad antioxidante del extracto polar usando la técnica
que utiliza el radical libre 2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPH), técnica
elaborada por Brand- William y mejor conocida como DPPH. La técnica se
basa en la reacción del       r  a     d    ical con compuestos antioxidantes, mediante
la cesión de un átomo de hidrógeno que es brindado por el agente
antioxidante. La reacción presenta una fase inicial rápida, seguida por una
reacción lenta, la cual puede medirse a través del tiempo por la
disminución de la absorbancia en función del tiempo. La reacción
química es una reacción de óxido – Reducción.
La reacción se presenta de la siguiente forma:
Ilustración 1: Reacción de radical con compuestos antioxidantes
De acuerdo con la metodología el reactivo DPPH presenta un color azul-
violeta intenso al inicio de la reacción, decolorándose a en amarillo ligero
luego de reaccionar con el analito. Este cambio de color nos indica la
transferencia de hidrógeno desde el antioxidante presente en la muestra
14
hacia el reactivo, es decir que la variación de color en la muestra
corresponde proporcionalmente a la actividad antioxidante.
Esta es medida a través de Espectroscopia Ultravioleta – Visible (UV) la
absorbancia del reactivo DPPH es de 517 nm, el valor de la misma se reduce
progresivamente al contacto con el antioxidante. La variación en la absorbancia
determino la actividad oxidante del analito y se calculó mediante la C.I.50
(capacidad inhibitoria media) por medio del porcentaje de reducción de DPPH, es
decir C.I.50 mide la concentración de antioxidantes requeridos para inhibir un
50% de las moléculas de DPPH, este proceso tiene un periodo de tiempo
aproximado entre 15 a 30 minutos, por lo que a menor cantidad de C.I.50 se
deduce una mayor capacidad antioxidante de la muestra.
Procedimiento
Se procedió a preparar las siguientes soluciones:
v Solución del patrón de referencia: Solución metanólica de Trolox a
1000uM (tipo de solución: solución madre). De la solución madre
del estándar de Trolox se realizaron diluciones en metanol
obteniendo soluciones de 100, 200, 400, 800 y 1000 uM, estas
soluciones sirvieron para realizar la curva de calibración.
v Solución DPPH: solución metanólica de DPPH al 0.1 mM
v Solución Blanco: Se usaron 0,7mL del solvente (metanol) y
adicionó 1,4mL de DPPH con 1,4mL de metanol más y 0,7mL de
agua destilada, esta solución se usó para ajustar el
espectrofotómetro a cero.
v Blanco de la muestra: 1,4mL de metanol más 0,7mL de muestra.
v Preparación de las muestras con solución DPPH: Se evaluó la
actividad antioxidante de la de acuerdo con el siguiente método;
se usaron 3 tubos de ensayo y en ellos se colocaron 0,7 mL de
cada muestra en concentraciones de 100 ug/mL, 500ug/mL y
1000ug/mL), se le adicionó 1,4 mL de la solución DPPH a 0,1 mM,
se homogenizó en vórtex y se dejó en reposo durante 30 minutos
a temperatura ambiente y protegido de la luz, transcurrido este
tiempo, se procedió a medir la absorbancia a 517 nm en el
espectrofotómetro Ultravioleta-Visible. Los análisis se realizaron en
15
triplicado (n=3) y los cálculos se expresaron en porcentaje DPPH
remanente (% DE INHIBICIÓN), así como también en
equivalentes Trolox.
v El porcentaje de DPPH remanente (% DE INHIBICIÓN) fue
Ilustración 2: Ecuación para la actividad antioxidante con DPPH
calculado según la ecuación:
Dónde:
• Ai: Absorbancia inicial de DPPH
• Af: Absorbancia final de DPPH después de 30 min.
El cálculo realizado para expresar la actividad antioxidante en
equivalentes Trolox fue el siguiente
v Se calculó el porcentaje de inhibición del radical DPPH con la
ecuación descrita.
v Se calculó la actividad antioxidante equivalente a Trolox. Se
despejó X en la ecuación de la recta del estándar de Trolox (Y = a
X + b), se sustituyó el valor de porcentaje de inhibición obtenido y
se resolvió la ecuación.
v Al valor resultante se multiplicó por el factor de dilución
correspondiente para obtener así la actividad antioxidante
equivalente al valor Trolox real. En el presente estudio
correspondió a: 4/0.1 (donde 4 es el volumen final de reacción
expresado en mL y 0,1 el volumen expresado en mL de la muestra
tomada). Los resultados se expresaron finalmente en umol de
Trolox/100mL
v Finalmente, para expresar los resultados por gramo de producto,
al valor obtenido anteriormente se multiplicó por el equivalente en
gramos de muestra contenido en 100 mL. Los resultados se
16
expresan en uM Equivalente Trolox.
2.6. Procesamiento del análisis estadístico
Los datos se expresaron como la media, SPSS ± la desviación estándar de la
media (DS) del grupo problema y del grupo control. El análisis se realizó
mediante el análisis de variancia ANOVA, seguido por la prueba de las
comparaciones múltiples de Tukey. Las diferencias se consideraron
estadísticamente significativas cuando p<0.05
2.7. Aspectos éticos
Esta investigación estuvo sujeta a los criterios éticos de protección de medio
ambiente y la veracidad de la información detallada.
17
III. RESULTADOS
Resultados de la Prueba de solubilidad
Tabla 1 Resultados de la prueba de
solubilidad del extracto etanolito Fragaria
vesca L (Fresa)
Reactivos fruto
Etanol (+
)
Cloroformo (-)
Éter etílico (-)
Butanol (-)
Metanol (+
)
Agua destilada (+++)
Acetato de etilo (-)
Fuente: Elaboración propia, 2021.
En la tabla 1, se observa que la Fragaria vesca L
(Fresa) es muy soluble en agua (+++).
Tabla 2 Resultados de la prueba de solubilidad de
extracto etanolico de vaccinium corymbosum
(arándano)
Reactivos fruto
Etanol (+)
Cloroformo (-)
Éter etílico (-)
Butanol (-)
Metanol (++
)
Agua destilada (+++)
Acetato de etilo (-)
18
Fuente: Elaboración propia, 2021.
En la tabla 2 se observa del fruto del extracto
etanólico de Vaccinium corymbosum (arándano) es
muy soluble en agua (+++) y soluble en metanol (++)
Leyenda: Muy soluble (+++), soluble (++), poco soluble (+),
insoluble (0)
Resultados de Scring Fitoquimico
Tabla 3. Resultados de metabolitos
secundarios de la marcha fitoquímica se
encuentran en extracto etanolito Fragaria
vesca L (Fresa)
COMPUESTOS REAC. POSITIVA RESULTA
DO
COMPUESTOS Coloración verde o azul
DERIVADOS DE (++)
FENÓLES
COMPUESTOS Precipitado denso blanco
DERIVADOS DE (++)
TANINOS
Chalconas, auronas, (+)
COMPUESTOS isoflavanonas:
DERIVADOS DE No hay coloración. (-)
FLAVONOIDES Isoflavanonas:
Amarillo rojizo. (-)
Flavanonoles: Rojo (-)
a magenta.
Flavonas y flavonoles:
Amarillo a rojo
COMPUESTOS
DERIVADOS DE Coloración rojo oscuro (-)
ANTOCIANINAS Y
19
FLAVONOIDES
CATÉQUICOS
Precipitado naranja
(-)
COMPUESTOS Precipitado blanco
DERIVADOS DE (-)
ALCALOIDES Precipitado blanco
(-)
Precipitado amarillo-
verdoso (-)
COMPUESTOS
DERIVADOS DE Coloración roja (-)
NAFTAQUINONAS,
ANTRAQUINONAS Y
ANTRANONAS
COMPUESTOS Esteroides: verde-azul
DERIVADOS DE Triterpenoides: rojo- (-
TRITERPENOIDES Y naranja )
ESTEROIDES (
+
)
COMPUESTOS Fluorescencia celeste
DERIVADOS DE (+)
CUMARINAS
Fuente: Elaboración propia, 2021.
Leyenda: Bastante (+++), Regular (++), Poco (+), Ausente (-)
En la tabla 3, se observa que la extracto etanolito
Fragaria vesca L (Fresa) presenta los siguientes
compuestos: fenólicos, taninos, cumarinas.
20
Tabla 4 Resultados de metabolitos secundarios
de la marcha fitoquímica se encuentran en
extracto etanolico de Vaccinium corymbosum
(arándano).
COMPUESTOS REACCIÓN RESULT
POSITIVA ADO
COMPUESTOS Coloración verde o
DERIVADOS DE azul (-)
FENÓLES
(+)
COMPUESTOS Precipitado denso (-)
DERIVADOS DE blanco
TANINOS
(-)
(-)
Chalconas, auronas,
isoflavanonas: No (+)
hay
coloración.
COMPUESTOS Isoflavanonas: (-)
DERIVADOS DE Amarillo rojizo.
FLAVONOIDES Flavanonoles: Rojo a
magenta. (-)
Flavonas y (-)
21
flavonoles:
Amarillo a rojo
COMPUESTOS
DERIVADOS DE Coloración rojo (-)
ANTOCIANINAS Y oscuro
FLAVONOIDES
CATÉQUICOS
Precipitado naranja
(-)
COMPUESTOS Precipitado blanco
DERIVADOS DE (-)
ALCALOIDES Precipitado blanco
(-)
Precipitado amarillo-
verdoso (-)
Fuente: Elaboración propia, 2021.
Leyenda: Bastante (+++), Regular (++), Poco (+), Ausente (-)
En la tabla 4, se observa extracto etanolico de Vaccinium
corymbosum (arándano)
presenta los siguientes compuestos: fenólicos, flavonoides,
alcaloides.
22
RESULTADOS DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
1. DEL TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
Se pesó 1 kg de la muestra y se obtuvo el zumo de la muestra. Luego se elaboró
un extracto acuoso y un extracto hidroalcohólico de cada muestra a una
concentración de 10%.
v Para elaborar el extracto acuoso: se pesó 500 gramos de muestra de
forma aleatorizada y se preparó un extracto a una concentración de
10%, en Baño María a 90°C.
v Para elaborar el extracto hidroalcohólico: se pesó 200 gramos de
muestra de forma aleatorizada y se maceró con etanol 70% a una
concentración de 10%, durante 10 días a temperatura ambiente.
Ambos extractos se filtraron mediante papel filtro Whatman para realizar las
pruebas antioxidantes.
1. DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE SEGÚN EL MÉTODO DPPH
Tabla 1: Resultados del patrón de referencia para DDPH: Trolox
En la tabla 1 se muestran las absorbancias del radical DPPH, debido a que el
método DPPH es indispensable y usado en la bibliografía para la determinación
de captación de radicales libres de los antioxidantes, por lo tanto debido a la
similitud se deduce que las condiciones analíticas son óptimas.
23
Ilustración 3: Recta de Trolox para DPPH
En la ilustración 3 se representa el porcentaje de inhibición el cual nos determina
la capacidad antioxidante que posee la muestra, notándose el incremento en
relación a la concentración de la muestra; debido a ello se deduce que a mayor
concentración tendremos mayor capacidad antioxidante, es decir cuando se
incrementa la concentración DPPH, así mismo, aumenta el porcentaje de
inhibición.
Resultados de la evaluación antioxidante mediante método
espectrofotométrico con radical DPPH en muestras.
Tabla 2: Resultados de la actividad antioxidante del extracto acuoso de
arándano
24
Ilustración 4: Actividad antioxidante del extracto acuoso de arándanos (uM
Equiv. Trolox)
En la tabla 2 e ilustración 4, se observa que según método de DPPH, se
obtuvieron: 956.295 en 1000 μg/mL, 849.591 en 500 μg/mL y 780.885 en 100
μg/mL, del extracto acuoso de arándanos expresados en μM Equivalente Trolox.
Tabla 3: Resultados de la actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de
arándanos
25
Ilustración 5: Actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de arándanos
(uM Equiv. Trolox)
En la tabla 3 e ilustración 5, se observa que según método DPPH, se obtuvieron:
933.649 en 1000mμg/mL, 818.501 en 500 μg/mL y 665.353 en 100 μg/mL, del
extracto hidroalcohólico de arándanos expresados en μM Equivalente Trolox.
Tabla 4: Resultados de la actividad antioxidante del extracto acuoso de fresas
26
Ilustración 6: Actividad antioxidante del extracto acuoso de fresas (uM Equiv.
Trolox)
En la tabla 4 e ilustración 6, se observa que según método de DPPH, se
obtuvieron: 903.327 en 1000 μg/mL, 702.201 en 500 μg/mL y 485.338 en 100
μg/mL, del extracto acuoso de fresas expresados en μM Equivalente Trolox.
Tabla 5: Resultados de la actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de
fresas
27
Ilustración 7: Actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de fresas (uM
Equiv.Trolox)
En la tabla 5 e ilustración 7, se observa que según método DPPH, se obtuvieron:
782.805 en 1000 μg/mL, 553.659 en 500 μg/mL y 313.767 en 100 μg/mL, del
extracto hidroalcohólico de fresas expresados en μM Equivalente Trolox.
28
REGISTRO FOTOGRAFICO
Ilustración 8: Muestras de arándanos y fresas, adicionadas para el análisis
29
Ilustración 9: Preparación de las muestras con solución DPPH y solución
patrn; Solución metanólica de Trolox a 1000 uM
Ilustración 10: Espectrofotómetro, utilizado en la medición de la capacidad
antioxidante.
30
IV. DISCUSIÓN
4.1. Discusión de resultados
En el presente trabajo de investigación se determinó la capacidad antioxidante
in vitro del extracto etanólico de Vaccinium corymbosum (arándano) y Fragaria
vesca (fresa), se nota una variación a favor del arándano en presentar mayor
capacidad antioxidante; debido a ello corresponde contrastar los aciertos
obtenidos en el estudio, con lo relacionado en la introducción.
Los metabolitos secundarios presentes en la pulpa del fruto de    guayaba son
compuestos fenólicos, taninos flavonoides del tipo chalconas y cumarinas. Los
metabolitos secundarios presentes en fruto de extracto etanólico de Vaccinium
corymbosum (arándano) y Fragaria vesca (fresa)   fueron compuestos fenólicos
y flavonoides. Estos hallazgos son muy similares a los encontrados por Pérez C,
(2019), y Camelo D, (2019), quienes realizaron la actividad antioxidante por
DPPH y las muestras poseían los compuestos-, fenólicos, flavonoides .
Las diferentes concentraciones extracto etanólico de Vaccinium corymbosum
(arándano) y Fragaria vesca (fresa) presentaron porcentajes de actividad
antioxidante al ser evaluado por el método de la captura de electrones DPPH
(1,1-difenil-2-picril-hidrazilo), siendo las concentraciones de guayaba al 75%
diluidas en el reactivo DPPH 42.69% y en metanol más el reactivo DPPH 46.35%
los que más alto porcentaje alcanzaron. Lo mismo acurre con el extracto
etanólico de Vaccinium Fragaria vesca (fresa) que a la misma concentración 75%
alcanzan concentraciones de 52.82% y 53.41% respectivamente. Las otras
concentraciones al 50% y al 25% también presentaron actividad antioxidante.
Estos resultados son comparados con los de Tovar del Rio J, (2018) y Martínez
J, (2017), quienes emplearon el mismo método para su estudio determinó que la
prueba de DPPH es una técnica útil y confiable para la determinación de la
actividad antioxidante en especies vegetales.
4.2. Conclusiones
1. El extracto etanolito Fragaria vesca L (Fresa) presenta metabolitos
fenólicos, taninos, flavonoides del tipo chalconas y cumarinas, la extracto
etanólico de Vaccinium corymbosum L. (arándano): compuestos
31
fenólicos, alcaloides y flavonoides.
2. En todas las concentraciones presentan capacidad antioxidante del
extracto Fragaria vesca L (Fresa) y Vaccinium corymbosum L.(arándano).
3. El extracto etanolito Fragaria vesca L (Fresa) y extracto etanólico de
Vaccinium corymbosum (arándano) presentaron capacidad antioxidante,
Vaccinium corymbosum L. (arándano) con el etanol más el reactivo DPPH
obtuvo 46,35 % y Vaccinium corymbosum L. (arándano) fue 53,41 %.
4.3. Recomendaciones
1. Se sugiere continuar con investigaciones similares a ésta, con la finalidad
de afianzar mejores resultados, de modo que, es importante encontrar
puntos que ajusten concentraciones y poder transformar el producto
cosmético.
2. Se recomienda realizar la prueba con distintas concentraciones en varios
grupos con la finalidad de obtener un principio activo con el cual se podría
desarrollar la fabricación de alguna forma farmacéutica.
3. A causa de la presencia de flavonoides y compuestos fenólicos cuya
propiedad es antioxidante, consigue ser de importancia y apoyo para la
aplicación y/o estudios posteriores para la formulación de productos
antioxidantes o productos con fines de industrialización o innovación
tecnológica.
V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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capacidad antioxidante de Psidium guajava L. (GUAYABA)..
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tópica a base..
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Fragaria vesca L. sobre Streptococcus mutans ATCC 25175..
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de frutilla (Fragaria ananassa)proveniente de las variedades Festival y
Benicia. 26 de septiembre de 2019..
5. Velásquez Diaz. Estudio de la actividad antioxidante de extractos de..
6. López do Campo J. Estudio comparativo de la actividad antioxidante en
fresas de..
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institución educativa Gabo, del municipio de Cartago, Valle..
8. Aragón J. Análisis Estadístico de la Patología de Forjados de Hormigón
Armado en la Edificación Gallega..
9. Bravo D, Molina V. Determinación del origen de patologías estructurales
existentes en la Catedral Nueva Inmaculada Concepción de Cuenca..
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Cajamarca: PE. Universidad Nacional de Cajamarca. 152p; 2013.
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diversos métodos químicos para determinar actividad antioxidante en pulpa
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flavonoides de propóleos comercializados en el mercado zonal
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by assay-guided comparision. Plant science”. Vol. 163 Pag. 1161- 1168.
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Alimentación y Nutrición. 2009. Tablas de Composición de Alimentos
Peruanos. X. Lima. Perú.
24.- Fujita, A.; Sarkar, D.; Wu, S.; Kennelly, E.; Shetty, K.; Genovese, M. 2015.
Evaluation of phenolic-linked bioactives of. Vaugh (Myrtaceae)) for
antihyperglycemia, antihypertension, antimicrobial properties and cellular
rejuvenation. Food Research International 77(2): 194-203
25.- Lock de Ugaz O. Investigación fitoquimica. Métodos de estudio de
productos naturales 2º ed. Perú: 1994
26.- Abasto K, Aviles E, Cespedes G, Claros E, Guillen V. Plantas medicinales
y sus usos. Revista científica Burbuja Universitaria [Revista en internet]
citado el 24 de mayo del 2010 http// www.
34
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27.- Sepulveda G.. La participación de los metabolitos secundarios en defensa
de las plantas. Instituto Politécnica Nacional Yautepec México
28.- Diccionario de la lengua española. Real Academia de la Lengua Española.
Madrid 2014
Disponible en: http//Lema.rea.es/drae2001/srv
29.- Durafford C, Lapraz J. 1983 Cuaderno de Fitoterapia Clinica. Editorial
Masson S.A. Barcelona
30.- Bertran G. Farmacologia Basica y Clinica. Editorial Mc Graw.12va edición
2013.
VI. ANEXO
ANEXO A: Técnicas e instrumentos de recolección de datos
ANEXO 1. FICHA DE RECOLECCIÓN DE DATOS PARA CAPACIDAD
ANTIOXIDANTE
MUESTRA ABSORBANCIA A PROMEDIO DE
517 nm ABSORBANCIAS
Concentración del Abs 1 Abs 2 Abs 3
extracto etanólico
arándano
1000 ug/mL
500 ug/mL
100 ug/mL
Concentración del Abs 1 Abs 2 Abs 3
extracto etanólico
fresa
5 µL
10 µL
35
15 µL
Concentración de Abs 1 Abs 2 Abs 3 Promedio de
Trolox absorbancias
5 µL
10 µL
15 µL
Fuente: Elaboración propia
Capacidad antioxidante mediante el ensayo DPPH.
Concentración % de Actividad
Antioxidante
Ensayo 1 Ensayo 2
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
Muestra 5
Muestra 6
Promedio %
Fuente: Elaboración propia
Prueba de solubilidad
N° Solvente Fórmula Resultado
1 Agua destilada
2 Cloroformo
3 Acetona
4 Etanol
5 Hexano
6 Metanol
7 Acetato de etilo
8 Diclorometano
36
Fuente: Elaboración propia
Leyenda: (+++) muy soluble, (++) soluble, (+) poco soluble, (-) insoluble
v Prueba tamizaje fitoquímico
Ensayos Metabolitos Extracto Extracto Extracto
Clorofórmico Alcohólico Acuoso
Sudan II Aceite y
grasas
Borntrager Quinonas
Baljet Lactonas
Dragendorff Alcaloides
Mayer
Lieberman – Triterpenos y
Buchard esteroides
Tricloro Compuestos
Férrico fenólicos
Antocianidina Antocianidina
Shinoda Flavonoides
Ninhidrina Aminoácidos
Felhing Azucares
reductores
Resina Resina
Espuma Saponinas
Mucílago Mucílago
Gelatina Taninos
Leyenda:
(+) presencia (-) ausencia
(NR) no se realizó
37
38
ANEXO B: Matriz de consistencia
Formulación del problema Objetivos Hipótesis
Problema General Objetivo General Hipótesis General
¿Presentará capacidad antioxidante el El extracto etanólico de Vaccinium
extracto etanólico de Vaccinium Determinar la capacidad antioxidante in vitro corymbosum (arándano) y Fragaria Vesca
corymbosum (arándano) y Fragaria Vesca del extracto etanólico de “arándano” y (fresa) presentan capacidad antioxidante
(fresa)? “fresa”
Problemas Específicos Objetivos Específicos Hipótesis Específicas
¿Presentará capacidad antioxidante el El extracto etanólico de Vaccinium
extracto etanólico de Vaccinium Evaluar la capacidad antioxidante del corymbosum (arándano) y el extracto etanólico
corymbosum (arándano)? extracto etanólico de “arándano” al 5%, 10% de Fragaria Vesca (fresa) al 5%, 10% y 15%
y 15% presentan capacidad antioxidante
¿Presentará capacidad antioxidante el El extracto etanólico de Vaccinium
extracto etanólico de Fragaria Vesca Evaluar la capacidad antioxidante del corymbosum (arándano) presenta mayor
(fresa)? extracto etanólico de “fresa” al 5%, 10% y capacidad antioxidante (arándano) que
15%. Fragaria Vesca (fresa).
39
¿Cuál de los extractos etanólico de El extracto etanólico de Vaccinium
Vaccinium corymbosum (arándano) y Identificar cuál de los extractos etanólico de corymbosum (arándano) presenta igual
Fragaria Vesca (fresa) presentará mayor “arándano” y “fresa” presenta mayor capacidad antioxidante (arándano) que
capacidad antioxidante? capacidad antioxidante Fragaria Vesca (fresa).
PROCEDIMIENTO PARA COLECTA DE DATOS USANDO EL CUESTIONARIO
40
ANEXOS C: Operacionalización de las variables
ESCALA
DEFINICIÓN DEFINICIÓN N° DE
| DIMENSIONES INDICADORES DE VALOR
CONCEPTUAL OPERACIONAL ÍTEMS
MEDICIÓN
VARIABLE
DEPENDIENTE
Metabolitos
Extracto etanólico -Prueba de - Hexano
secundarios de Prueba de 5%
de Vaccinium solubilidad - Acetato de
la planta Solubilidad
corymbosum -Marcha Método etilo
obtenidos Dilución – Marcha 10%
(arándano) fitoquímica cualitativo - Acetona
mediante fitoquímica
-Capacidad Metanol
maceración 15%
Extracto etanólico antioxidante - Agua
alcohólica.
de Fragaria
Vesca (fresa)
40
-15 muestras
de
Poder de una
Vaccinium
VARIABLE sustancia de
corymbosum
INDEPENDIENTE evitar o Espectro Compuestos
DPPH Nanómetros (arándano) mM
Capacidad disminuir la fotómetro oxidantes
-15 muestras
antioxidante degradación
de Fragaria
oxidativa
Vesca
(fresa)
41
ANEXOS D: Certificación de las plantas.
41
42
ANEXOS E: Evidencias del trabajo de campo
Fuente: Terán Ramírez, Elvia. Proceso de recolección 1.
43
Fuente: Carrión Lizana, Dani. Proceso de recolección 2.
Fuente: Carrión Lizana, Dani. Proceso de recolección 3.
44
Fuente: Terán Ramírez, Elvia. Proceso de recolección 4.
45
Fuente: Terán Ramírez, Elvia. Proceso de recolección 5.
Fuente: Terán Ramírez, Elvia. Proceso de recolección 6.
46
Fuente: Los Investigadores de fresa y arándanos. Proceso de recolección 7.
47
48