FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA In vitro DEL ACEITE
ESENCIAL DE Origanum vulgare L. (ORÉGANO) SOBRE
Staphylococcus aureus ATCC 25923
TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO
FARMACÉUTICO
AUTORES
Bach. LACHOS PINTADO, EVERLY YANIRA
https://orcid.org/0000-0002-5212-0122
Bach. LOPEZ PEREZ, LUIS ALBERTO
https://orcid.org/0000-0002-5616-8801
ASESOR
Mg. FLORES LÓPEZ, OSCAR BERNUY
https://orcid.org/0000-0001-9091-2537
LIMA – PERÚ
2022
2
DEDICATORIA
A mis padres por hacer de mi la persona que hoy en día soy, por
los valores y la motivación que me brindaron para culminar esta
etapa, por apostar por mí y formarme con reglas y libertades,
llevándome así a cumplir mis objetivos y alcanzar mis anhelos.
Everly Yanira Lachos Pintado
A mis padres por hacer de mi la persona que hoy en día soy, por
los valores y la motivación que me brindaron para culminar esta
etapa, por apostar por mí y formarme con reglas y libertades,
llevándome así a cumplir mis objetivos y alcanzar mis anhelos.
Luis Alberto López Pérez
2
AGRADECIMIENTO
En primer lugar, agradecer a Dios por permitirme estar en esta
universidad, a mis maestros por todas las enseñanzas, a mis
compañeros por nuestras vivencias y sobretodo agradecer a mis
padres y hermanos por forjarme a seguir adelante y cumplir con
este objetivo, por apoyarme siempre y ser parte de este logro.
En primer lugar agradecer a Dios por permitirme estar en esta
universidad, a mis maestros por todas las enseñanzas, a mis
compañeros por nuestras vivencias y sobretodo agradecer a mis
padres y hermanos por forjarme a seguir adelante y cumplir con
este objetivo, por apoyarme siempre y ser parte de este logro.
3
ÍNDICE
RESUMEN viii
ABSTRACT ix
I. 10
II. 18
2.1 18
2.2 18
2.3 19
2.4 19
2.5 20
2.6 22
2.7 22
III. 22
IV. 28
4.1 28
4.2 30
4.3 30
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 33
ANEXOS 38
4
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1. Análisis de los datos recolectados con respecto al tamaño del halo de
inhibición de los grupos experimentales y control. 25
Tabla 2. Análisis de la distribución normal para cada grupo de tratamientos 26
Tabla 3. Análisis de la homogeneidad de varianzas 27
Tabla 4. Análisis de la varianza (ANOVA) de los grupos de tratamientos 27
Tabla 5. Análisis por subgrupos homogéneos de la prueba de Tukey 28
Tabla 6. Análisis de la sensibilidad de Staphylococcus frente al aceite de
Origanum vulgare L, a diferentes concentraciones, según la escala de Duraffourd
28
5
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Análisis gráfico de los diámetros de los halos de inhibición según grupo
de los grupos experimentales y control 26
6
INDICE DE ANEXOS
Anexo A. Instrumento de recolección de datos 39
Anexo B. Matriz de consistencia 40
Anexo C. Operacionalización de las variables 41
Anexo D. Identificación taxonómica de la especie vegetal 42
Anexo E. Certificado de análisis de la cepa de Staphylococcus aureus ATCC
25923 43
Anexo F. Fotografías del trabajo de campo 45
7
⮚ RESUMEN
Objetivo: Demostrar la actividad antibacteriana In vitro del aceite esencial de
Origanum vulgare (orégano) sobre Staphylococcus aureus ATCC 25923
Metodología: Se empleó un estudio de enfoque cuantitativo, con diseño
experimental de tipo transversal y prospectivo, la población de estudio vegetal fue
Origanum vulgare (orégano) recolectada en el Reque, provincia de Chiclayo,
departamento de Lambayeque y la población microbiológica fue Staphylococcus
aureus ATCC N°25923. La muestra vegetal empleada fue el aceite esencial de
Origanum vulgare (orégano) a las concentraciones de 100%, 75% y 50% las que
se evaluaron mediante el método de difusión en pozo.
Resultados: El valor promedio de los halos de inhibición para el aceite de
Origanum vulgare L. (orégano) al 50% fue de 11,16 + 0,36mm; de 13,13 + 0,31mm
para el 75% y para el 100% fue de 14,91 + 0,55mm, así mismo, el control negativo
(DMSO) obtuvo un halo promedio de 6,13mm + 0,18 y el control positivo
(ciprofloxacino) de 27,83mm + 0,28, el análisis estadístico se realizó mediante las
pruebas de ANOVA Y TUKEY encontrando diferencias estadísticamente
significativas en todos los grupos de datos analizados con un alfa de 0.05.
Conclusiones: El aceite esencial de Origanum vulgare L. (orégano) a las
concentraciones del 100%, 75% y 50% presentan actividad antibacteriana In vitro
sobre Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Palabras clave: Origanum vulgare, orégano, Staphylococcus aureus, actividad
antibacteriana.
8
⮚ ABSTRACT
Objective: To demonstrate the in vitro antibacterial activity of the essential oil of
Origanum vulgare (oregano) on Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Methodology: A quantitative approach study was used, with a cross-sectional and
prospective experimental design, the plant study population was Origanum vulgare
(oregano) collected in Reque, Chiclayo province, Lambayeque department and the
microbiological population was Staphylococcus aureus ATCC No. 25923. The plant
sample used was the essential oil of Origanum vulgare (oregano) at concentrations
of 100%, 75% and 50%, which were evaluated by the well diffusion method.
Results: The average value of the inhibition halos for Origanum vulgare L.
(oregano) oil at 50% was 11.16 + 0.36mm; 13.13 + 0.31mm for 75% and for 100%
it was 14.91 + 0.55mm, likewise, the negative control (DMSO) obtained an average
halo of 6.13mm + 0.18 and the positive control (ciprofloxacin) of 27.83mm + 0.28,
the statistical analysis was performed using the ANOVA and TUKEY tests, finding
statistically significant differences in all the data groups analyzed with an alpha of
0.05.
Conclusions: The essential oil of Origanum vulgare L. (oregano) at concentrations
of 100%, 75% and 50% have in vitro antibacterial activity on Staphylococcus aureus
ATCC 25923.
Keywords: Origanum vulgare, oregano, Staphylococcus aureus, antibacterial
activity.
9
I. INTRODUCCIÓN
Staphylococcus aureus es una bacteria patógena, frecuentemente aislada a
nivel hospitalario y comunitario, 1 elevando el costo, la estadía hospitalaria y el
número de muertes a nivel mundial. 2-4 Las infecciones causadas por S. aureus
generan una elevada morbimortalidad. De igual manera el 30% de la población
esta colonizada por esta bacteria, simultáneamente, S. aureus es la causa
principal de bacteriemias, endocarditis, infecciones osteomusculares, infección
de tejidos blandos, pulmonares e infecciones concernientes con dispositivos
médicos.5,6 La Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Organización
Panamericana de la Salud (OPS) reportaron que cada año, cerca de 700 mil
personas fallecen a consecuencia de la resistencia bacteriana a los
antimicrobianos. En el año 2016 se reportó que Staphylococcus aureus fue el
causante de 200 mil muertes de neonatos, por año. Por otro lado, se estima que
para el año 2050 la resistencia a los antimicrobianos matara por lo menos a 10
millones de personas cada año. 7 También se calcula que por lo menos el 64%
de los pacientes infectados por S. aureus metiloresitente (SARM) tiene una
mayor probabilidad de morir que los pacientes infectados por cepas no
resistentes, pero esto depende de factores como perfil de resistencia y el tipo
de paciente.8,4
La organización mundial de la salud (OMS) público un informe donde se reportó
que 144 países afirman que, las bacterias han elevado su  nivel de resistencia
hacia los antimicrobianos, lo que hace que las patologías de origen infeccioso
se prolonguen por más tiempo incrementando de esta manera el riesgo de
defunciones.8 El mismo informe revela datos epidemiológicos sobre la
resistencia de las infecciones causadas por S. aureus  a los antimicrobianos por
regiones, siendo estos los siguientes: Américas (90%), África (80%), Pacifico
Occidental (80%). Europa (60%) y Asia sudoriental (25%) 8.
Por otro lado, en Perú, en el hospital Cayetano Heredia se realizó un estudio de
Bacteriemia por Staphylococcus aureus entre los años 2017 y 2018, donde se
reportó que el 46.6% de pacientes es MRSA y el 53.4% MSSA, además la
10
mayoría de casos eran corresistentes a la mayoría de grupos de antibióticos. 9
También un estudio realizado por Magiña C. en diferentes hospitales de la
ciudad de Lima, se determinó que el 50% de cepas de Staphylococcus aureus
aislados de hemocultivos fueron resistentes a la meticilina. (7) De igual manera
en un estudio publicado por la revista Experiencia en Medicina del Hospital
Regional Lambayeque (10), encontró que S. aureus tiene una prevalencia del
10,67% en infecciones del tracto urinario, mayormente en el grupo etario
comprendido entre los 23 a 30 años, además se reportó la formación de la
enzima betalactamasa.
El Perú es un país que dispone de una amplia variedad de especies vegetales
que a un no cuentan con estudios científicos, como es el caso de Origanum
vulgare (orégano) especie vegetal que posee diversas propiedades
terapéuticas, con la cuales se puede implementar alternativas terapéuticas en
el tratamiento de las infecciones por Staphylococcus aureus y disminuir la
morbimortalidad en la población peruana.
En cuanto a las bases teóricas que respaldan y describen nuestras variables de
estudio, tenemos:
Staphylococcus aureus, pertenece  a  la  familia staphylococcaceae, es un
patógeno anaerobio Gram positivo de morfología esférica, tiene un diámetro de
aproximadamente 1 μm y que racimos en forma de uva. Es una bacteria
comensal presente de manera asintomática en diversas partes del cuerpo, como
la nariz, glándulas cutáneas, piel, membranas mucosas e intestino. La mayoría
de estudios demostraron que el 20% de individuos son portadores persistentes
nasales, el 30% son portadores intermitentes y el 50% son no portadores. 11 La
importancia clínica de S. aureus radica que a pesar de ser uno de los primeros
patógenos descritos aún sigue siendo una de las principales causas de
infecciones en humanos. Esta bacteria tiene una amplia plétora de infecciones,
así mismo tiene una gran capacidad de adaptación a las diferentes condiciones
medioambientales. Es la principal causa de infecciones tanto intrahospitalarias
como extrahospitalarias, puede generar graves consecuencias que van desde
afecciones en el torrente sanguíneo, la piel, tracto respiratorio inferior y tejidos
11
blandos, también se relaciona con infecciones causadas por instrumental
médico, como sucede con la infección del torrente sanguíneo asociado a la vía
central (CLABSI), infecciones internas como la endocarditis y osteomielitis. S.
aureus es responsable de enfermedades causadas por toxinas, entre estas se
incluye a síndrome de choque toxico, síndrome de piel escaldada y
enfermedades transmitidas por alimentos, esto debido a que Staphylococcus
aureus está equipado con un potente repertorio de toxinas y diversos factores
de virulencia. 12,13,11 Pruebas de susceptibilidad bacteriana, 14 se trata de una de
las funciones más significativas de los laboratorios clínicos que realizan análisis
microbiológicos. Es un proceso que se desarrolla mediante pruebas de
sensibilidad in vitro o también llamado antibiograma, el que tiene como objetivo
principal la evaluación de la respuesta un uno o varios antibióticos frente a un
microorganismo. Uno de los métodos más usados para la determinación de la
susceptibilidad bacteriana es el Método del antibiograma disco-placa o disco
difusión, este método está basado en el trabajo de Kirby-Bauer y colaboradores,
es el método recomendado por el National Committee for Clinical Laboratory
Standards (NCCLS) para la determinación de la susceptibilidad bacteriana a los
antimicrobianos. El fundamento de este método cosiste en colocar en la
superficie del agar contenido en una placa Petri previamente inoculada con el
microorganismo, discos de papel impregnados con los diversos antibióticos, tan
pronto el disco se ponga en contacto con la superficie húmeda de agar, el
antibiótico se difundirá de manera radial a través del espesor del agar, formando
una gradiente de concentración. Una vez transcurridas entre  18 a 24 horas de
incubación los discos aparecerán rodeados por un halo al que llamaremos halo
de inhibición. Las lecturas de los halos de inhibición se interpretaran de la
siguiente manera: sensible (S), intermedia (I) y resistente (R), según el NCCLS.
Aceites esenciales, según la Organización Internacional de Normalización (ISO)
en su ISO 9235, los aceites esenciales son compuestos que se originan a partir
mezclas complejas originadas del metabolismo secundario de las plantas,
producidos por diferentes estructuras secretoras, como los tricomas
glandulares. Los aceites esenciales pueden estar compuestos por terpenos, en
asociación con otros componentes por lo general volátiles los mismos que
12
proporcionan el olor y sabor a las plantas. Por lo general son compuestos
volátiles, hidrófobos, solubles en alcohol y con una densidad inferior a la del
agua. Químicamente lo AE están compuestos por más de 100 componentes,
entre los cuales se encuentra principalmente los compuestos terpénicos, entre
ellos los terpenoides el que representa más del 60% de la composición de los
productos naturales. 15 Se conocen cerca de 3000 tipos de AE, de los cuales
solo 300 tienen importancia comercial en el mercado de las fragancias. Hoy en
día los AE han demostrado tener una gran actividad biológica y farmacológica,
gracias a sus propiedades antioxidantes, bactericidas, antifúngicas, insecticidas
y antivirales, las que prometen ser una alternativa natural para la prevención y
tratamiento de diversas enfermedades.16,17 Existen diversos métodos de
extracción para los aceites esenciales, estos pueden obtenerse por destilación
mediante cualquiera de sus variantes, puede ser por hidrodestilación,
destilación por arrastre de vapor o destilación en seco, también se puede
obtener mediante procesos mecánicos como prensado, mediante extracción
con solventes volátiles, fluidos supercríticos y mediante microondas. 18-20
Origanum vulgare L. Es una Planta herbácea perenne, que agrupa por lo menos
a 38 especies. Su nombre deriva del griego “OROS” que significa montaña y
“GANOS” adorno, el cual se traduce a adorno de las montañas.21 Sus
características botánicas nos indican que es una especie vegetal aromática,
utilizada por su alto contenido en aceites esenciales, con aspecto leñoso en la
base, presenta tallos herbáceos que pueden llegar a medir hasta 1 metro de
altura. Sus hojas pueden ser pecioladas, ovaladas, generalmente enteras,
presenta vellosidades generalmente por debajo, además presenta glándulas de
forma esferoidal las mismas que contienen las esencias. Las flores se agrupan
en inflorescencias de manera esférica o alargada, generalmente florecen en
verano. 17 El aceite esencial obtenido de Origanum vulgare (orégano) está
constituido químicamente por más de 22 compuestos entre los cuales se
encuentran en cantidades más considerables el carvacrol y timol siendo el
carvacrol (monoterpeno fenólico) el compuesto más predominante y además en
cantidades menores, presenta monoterpenos, con notable predominio de los
hidrocarburos monoterpenos (limoneno, γ-terpineno y p- cimeno). También
13
contiene ácidos fenólicos como el cafeíco, rosmarínico y clorogénico, también
se encuentran en cantidades menores flavonoides, taninos, principios amargos
y triterpenos derivados de los ácidos ursólico. 22-27 Con respecto la actividad
biológica y farmacológica, que se le atribuye a Origanum vulgare (orégano),
encontramos efectos tales como: antitumoral, antimutagénico, antibacteriano,
antifúngico, antigenotóxico, antiespasmódico, analgésico, antinflamatorio,
antiparasitario, inhibidoras de la acetilcolinesterasa, antiplaquetario,
antiparasitario, hepatoprotector, antioxidante, hipoglucemiante, anti-Alzheimer y
trastornos de la piel. 28-30 Además estudios recientes han demostrado su efecto
sobre el cáncer de mama. 31 La actividad antibacteriana del aceite esencial de
orégano se le atribuye al carvacrol y timol, cuyo mecanismo de acción se debe
a que estos compuestos provocan alteraciones de tipo funcional y estructural en
la membrana celular de la de las bacterias.32 También puede inhibir el
metabolismo respiratorio y energético, además pueden cambiar la estructura del
ADN bacteriano. 33
Para enmarcarnos dentro del contexto de la investigación acerca del efecto
antibacteriano del orégano, citaremos los siguientes antecedentes
internacionales:
Lopes L. et al (2021)34 determino el efecto del aceite esencial de Origanum
vulgare L. (EOO) y carvacrol (CAR) sobre el crecimiento de bacterias patógenas
en la orofaringe, tuvo como. Según los resultados, se halló que el tamaño de los
halos de inhibición variaron de 21,00 mm, para E. coli, a 33,56 mm, para S.
aureus para EOO. El CAR tiene una CIM más baja para K. pneumoniae y una
concentración más alta para S. aureus. El MBC mostró valores similares al MIC.
Se concluyó que el aceite esencial de Origanum vulgare L. y el Carvacrol
mostraron actividad inhibitoria sobre el crecimiento bacteriano en la orofaringe.
Pérez O. et al (2021),35 evaluaron la capacidad antibacteriana in vitro del
extracto etanólico de hojas de Origanum vulgare frente  a Staphylococcus
aureus, Pseudomona aeruginosa y Escherichia coli. Según los resultados, se
observó halos de inhibición, con tamaño promedio de 21.64mm, 15.24mm y
11.45mm para S. aureus; de 13.31, 12.27 y 7.35 mm para P. aeruginosa, y 12.5,
14
11.40 y 10.6 mm para E. coli, para las diferentes concentraciones. Se llegó a la
conclusión que el extracto etanólico de O. vulgare tienen capacidad
antibacteriana sobre S. aureus, P. aeruginosa y E. coli.
Carrillo E. (2020), 36 evaluó de la capacidad inhibitoria de mezcla de aceites
esenciales de orégano (Origanum vulgare) y albahaca (Ocimum basilicum)
frente a Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes y S. Typhimurium.
Según los Resultados, se halló que la concentración de  orégano al 100%
mostro un  halo de inhibición de 25,33mm para L. monocytogenes; mientras que
la mezcla de  67% orégano y 33% albahaca mostro un halo de inhibición de
24,02mm para S. aureus y la mezcla de 12% orégano y 88% albahaca mostro
un halo de inhibición de 35,86mm en S. enterica ser. Typhimurium. Se llegó a la
conclusión que los aceites esenciales de albahaca (Ocimum basilicum)  y
orégano (Origanum vulgare) tienen efecto antibacteriano sobre Staphylococcus
aureus, Listeria monocytogenes y Salmonella typhimurium.
Con respecto a los antecedentes nacionales citamos a:
Medrano E. y Medrano D. (2021), 37 determinaron la actividad antimicrobiana y
efecto desinfectante del aceite esencial de Origanum vulgare L. (orégano) frente
a Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Según los resultados, se halló halos
de inhibición para Staphylococcus aureus de 8,0 mm, 8,0 mm, 9,3 mm y 14,7
mm, para Escherichia coli fue de 8,0 mmm, 9,3 mm, 15,7 mm y 12,0 mm a las
concentraciones de 20%, 40%, 80% y 100% respectivamente para cada cepa.
Conclusión: se concluye que las concentraciones de 80% y 100% presentan
efecto antimicrobiano, comprobando así la acción desinfectante del aceite
esencial de Origanum vulgare L. (orégano).
Sánchez J. y Perez Y. (2021),38 realizaron el estudio sobre la actividad
antimicótica del aceite esencial de la flor de Origanum vulgare “Orégano” y Piper
Aduncum “Matico” frente Candida albicans. Según los resultados, se observó
halos de inhibición promedios obtenidos para el aceite de orégano de 25.50mm,
29.78mm y 32.53mm y para el aceite de matico fueron de 6.87mm, 8.59mm y
11.84mm, para las concentraciones al 50%, 75% y 100% respectivamente. Se
concluyó que el efecto antimicótico del aceite de orégano fue superior al control
15
positivo de nistatina; el aceite de matico presento efecto antimicótico leve sobre
Candida albicans.
Condori F. (2020, 39 realizó el estudio sobre el efecto antibacteriano del aceite
esencial de Origanum majorana y Origanum onites frente a Staphylococcus
aureus atcc 25923, arequipa-2019. Según los resultados, se halló halos de
inhibición, con tamaño promedio de 7mm al 1%, 10mm al 5%,18mm al 10% y
21mm al 20% y de 35mm para la penicilina. Se llegó a la conclusión que el aceite
esencial de los Origanum majorana y Origanum onites posee actividad
antibacteriana frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
La importancia de la presente investigación radica en que actualmente la
resistencia bacteriana a los antibióticos se ha apuntado como un indiscutible
problema de salud pública, incrementando cada año la morbimortalidad. Por
otro lado, la búsqueda de nuevas propiedades terapéuticas a base de plantas
se ha convertido en nuestros días en una esperanza para el tratamiento de
algunas enfermedades que afectan a la población peruana y mundial ya que
más del 80 % de la población hace uso de la medicina tradicional en especial
los países que se encuentran en vías de desarrollo.
La justificación teórica del presente estudio, se basa en la poca información
bibliográfica acerca de estudios científicos que sustenten el efecto
antibacteriano de Origanum vulgare (orégano), además no hay estudios
suficientes que establezcan las concentraciones y dosis adecuada, para alcázar
la actividad antibacteriana. De igual forma este estudio pretende contribuir con
el conocimiento acerca de la seguridad y el efecto del aceite esencial de
Origanum vulgare (orégano), en el tratamiento de las infecciones causada por
bacterias, constituyendo una nueva alternativa de tratamiento natural.
Así mismo el presente estudio tiene una justificación social, porque de esta
manera se pretende incentivar a la población a hacer uso de Origanum vulgare
(orégano) como una nueva alternativa de tratamiento de enfermedades de
origen bacteriano, con información validada científicamente, y así reducir el
consumo de medicamentos sintéticos que causan diversas reacciones
adversas.
16
De esta manera el presente estudio plantea el siguiente objetivo general:
⮚ Demostrar la actividad antibacteriana In vitro del aceite esencial de
Origanum vulgare (orégano) sobre Staphylococcus aureus ATCC 25923.
La hipótesis general que se plantea en el presente estudio es la siguiente:
⮚ El aceite esencial de Origanum vulgare (orégano) posee actividad
antibacteriana In vitro sobre Staphylococcus aureus ATCC 25923.
17
II. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 Enfoque y diseño de investigación
Enfoque cuantitativo: Porque se utilizara herramientas de análisis
estadístico con el propósito de describir, explicar  y cuantificar el problema de
investigación.
Diseño experimental: Es experimental, debido a que se manipulara la
variable independiente y luego se analizara el efecto producido sobre la
variable dependiente.
Tipo de investigación: Transversal y Prospectivo.
Transversal: porque los datos serán recolectados en un tiempo único.
Prospectivo: porque los datos serán analizados transcurrido un determinado
tiempo en el futuro.
2.2 Población, muestra y muestreo
2.2.1 Población
⮚ La población vegetal en estudio estará constituida por Origanum
vulgare (orégano). Cultivado en el distrito de Reque, provincia de
Chiclayo, departamento de Lambayeque.
⮚ Cepas de Staphylococcus aureus ATCC N°25923, que serán
obtenidas del laboratorio Microclin de la ciudad de Trujillo.
2.2.2 Muestra
⮚ Aceite esencial de Origanum vulgare (orégano) en concentraciones
de 100%, 75% y 50%.
⮚ UFC de cepas Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Criterios de inclusión
▪ Muestras en las concentraciones indicadas  (100%, 75% y 50%).
▪ Cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923 puras.
18
Criterios de exclusión
▪ Muestras que no contengan la concentración indicada.
▪ Cepas de Staphylococcus aureus no identificadas.
2.2.3 Muestreo
Muestreo no probabilístico por conveniencia, significa que la elección de los
elementos o va a depender de la probabilidad sino de las diversas
condiciones que permitan realizar el muestreo.
2.3 Varibles de investigacion
Variable independiente: Aceite esencial de Origanum vulgare (orégano).
Definición conceptual: Aceite extraído a partir de las hojas Origanum vulgare
(orégano) por el método de arrastre de vapor de agua.
Definición operacional: concentración del aceite esencia de Origanum
vulgare (orégano).
Variable dependiente: Actividad antibacteriana sobre Staphylococcus
aureus ATCC 25923.
Definición Conceptual: Capacidad del aceite esencial de inhibir el crecimiento
bacteriano.
Definición operacional: Sensibilidad de Staphylococcus aureus frente al
aceite esencial de Origanum vulgare (orégano). Obtenida mediante la medida
del diámetro de los halos de inhibición.
2.4 Técnica e Instrumentos de recolección de datos
El instrumento que utilizó la presente investigación, fue una hoja de registro
(Guía de observación) en la que se registraron todas las observaciones
realizadas durante el proceso de investigación, para posteriormente ser
ingresado a una base de datos de manera ordenada para su posterior análisis
estadístico. (Ver anexo A).
19
2.5 Plan metodológico para la recolección de datos
2.5.1 Recolección de la muestra vegetal
Se recolectaron 5 kilogramos de Origanum vulgare (orégano) en el distrito de
Reque, provincia de Chiclayo, departamento de Lambayeque. La muestra fue
envuelta en papel kraff y posteriormente embalada en cajas de cartón
respectivamente rotuladas y trasladada al laboratorio.
2.5.2 Identificación de la muestra vegetal
Se remitió una muestra de la especie vegetal al especialista botánico, en la
ciudad de lima, para su identificación y clasificación taxonómica
correspondiente y emisión de la constancia respectiva (anexo D).
2.5.3 Obtención del aceite esencial
Se seleccionaron las muestras de la especie vegetal que presentaron
buenas condiciones y conservaron sus características organolépticas,
descartando aquellos que no cumplían con los criterios de inclusión.
Después de realizar la selección de la muestra vegetal se procedió a lavar
con agua potable y desinfectada con solución de hipoclorito de sodio al 0,1%
durante 3 minutos. Posteriormente fueron enjuagados con agua destilada
esteril hasta eliminar por completo el hipoclorito de sodio.  Una vez lavadas
se secaron bajo sombra sobre papel kraff por 48 horas. La extracción del
aceite esencial se realizará según la metodología empelada por Flores A. 40
el cual consistió en extraer aceite esencial de 5 kg de hojas frescas de
Origanum vulgare (orégano) empleando el método de arrastre con vapor de
agua también llamado método directo, en el que el material está en contacto
íntimo con el agua generadora del vapor. Se colocó en el mismo recipiente
el agua y el material a extraer, se calentó el agua a ebullición y el aceite
extraído es arrastrado junto con el vapor de agua hacia un condensador, que
enfría la mezcla, la cual es separada posteriormente para obtener el producto
deseado. Debido a la diferencia de propiedades físicas como densidad e
inmiscibilidad, el aceite esencial se separó del agua en una pera de
decantación, se agregó sulfato de sodio anhidro Na2SO4 al aceite como
20
secante para eliminar las trazas de agua; el aceite esencial se envasó en un
frasco de vidrio color ámbar y se mantuvo alejado de la luz solar a una
temperatura de 4°C hasta su uso.
2.5.4 Preparación de las concentraciones de trabajo
Una vez obtenido el aceite esencial, se procedió a realizar las respectivas
diluciones con dimetilsulfóxido (DMSO) obteniendo concentraciones al 100%,
75% y 50%.
2.5.5 Reactivación y estandarización del inoculo bacteriano
La reactivación de la cepa de Staphylococcus aureus ATCC se realizó según
la información técnica del catálogo de la empresa comercializadora de la
cepa, utilizando los medios de cultivo agar Baird - Parker, posteriormente se
incubará en medio de anaerobiosis a 37ºC + 1 por 24 – 48 horas, para
posteriormente preparar las diluciones según a ensayar.
2.5.6 Preparación y estandarización del inoculo bacteriano
A partir de la placa incubada por 24 horas, con la ayuda de un asa
bacteriológica se procedió a extraer 2 a 3 colonias y se preparó una
suspensión bacteriana; equivalente al tubo N° 0.5 de la escala de McFarland
en solución salina fisiológica esteril, esta se agitó por 30 segundos,
obteniendo el inoculo empleado para la determinación de la sensibilidad.
2.5.7 Determinación del efecto antibacteriano
El efecto antibacteriano se determinó mediante la técnica de difusión en pozo,
la cual consiste en colocar realizar pozos en las placas con el cultivo
bacteriano y colocar en estos 30 uL de las diferentes concentraciones al
100%, 75% y 50% del aceite esencial de Origanum vulgare (orégano). Luego
se llevó a incubación en estufa a 37°C, durante 24 horas. Trascurrido el
tiempo de incubación se procedió a medir los diámetros de los halos de
inhibición formados con la ayuda de un vernier digital o pie de rey, los datos
fueron registrados en la ficha de recolección de datos.
21
2.6 Procesamiento del análisis estadístico
Los datos recolectados serán analizados y procesados mediante el software
estadístico SPSS Ver. 26. Mediante las pruebas de normalidad, ANOVA y
TUKEY, con un alfa de 0.005, para contrastación de hipótesis.
2.7 Aspectos éticos
En el presente trabajo de investigación Se aplicará los principios de las
Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL). Se tendrá en cuenta la correcta
manipulación y desecho de las muestras sobre todo de la cepa de
Staphylococcus aureus, de acuerdo al manual de bioseguridad en
laboratorios de microbiología durante la ejecución del trabajo se tomará todas
las precauciones necesarias para evitar cualquier contaminación. 41,42
22
III. RESULTADOS
Tabla 1. Análisis de los datos recolectados con respecto al tamaño del halo de
inhibición de los grupos experimentales y control.
95% Intervalo de
confianza de la media
N Media Std. Std.Desviación Error Mínimo Máximo
Límite Límite
Grupos inferior superior
Aceite de orégano - 10 14,91 0,55 0,17 14,52 15,30 13,60 15,56
100%
Aceite de orégano - 10 13,13 0,31 0,10 12,91 13,35 12,55 13,52
75%
Aceite de orégano - 10 11,16 0,36 0,11 10,90 11,41 10,32 11,68
50%
Control negativo- 10 6,13 0,18 0,06 6,00 6,25 5,95 6,53
DMSO
Control positivo - 10 27,83 0,28 0,09 27,63 28,04 27,36 28,26
Ciprofloxacino
Fuente: SPSS ver. 26
En la tabla 1 se observa el análisis estadístico realizado a los datos de los halos de
inhibición obtenidos en los grupos experimentales y control donde se obtiene los
parámetros de media, desviación estándar, intervalos de confianza y valores
máximo y mínimo mediante el programa estadístico SPSS versión 26; se observa
que el valor promedio de los halos de inhibición para el aceite de Origanum vulgare
L. (orégano)  al 50% fue de 11,16 + 0,36mm; de 13,13 + 0,31mm para el 75% y
para el 100% fue de 14,91 + 0,55mm, así mismo, el control negativo (DMSO) obtuvo
un halo promedio de 6,13mm + 0,18 y el control positivo (ciprofloxacino) de
27,83mm + 0,28.
23
Figura 1.Análisis gráfico de los diámetros de los halos de inhibición según
grupo de los grupos experimentales y control
Fuente: SPSS ver. 26
En la figura 1, podemos observar la actividad antibacteriana según el diámetro de
los halos de inhibición obtenidos por los grupos control y experimentales sobre
Staphylococcus aureus, donde se puede apreciar un mayor efecto antibacteriano
por parte del control positivo (ciprofloxacino), con respecto a los grupos
experimentales, así mismo, se observa efecto antimicótico creciente con respecto
a la concentración del aceite siendo mayor a mayores concentraciones; por otro
lado, no se observa diámetros similares con el control negativo.
Tabla 2. Análisis de la distribución normal para cada grupo de tratamientos
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Grupos de trabajo Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Aceite de orégano - 100% 0,22 10,00 ,200* 0,86 10,00 0,08
Aceite de orégano - 75% 0,11 10,00 ,200* 0,96 10,00 0,79
Diámetro del halo de Aceite de orégano - 50% 0,26 10,00 0,05 0,89 10,00 0,16
inhibición (mm) Control negativo- DMSO 0,27 10,00 0,04 0,85 10,00 0,05
Control positivo - 0,15 10,00 ,200* 0,98 10,00 0,94
Ciprofloxacino
*. This is a lower bound of the true significance.
a. Lilliefors Significance Correction
Fuente: SPSS ver. 26
En la tabla 2, se observa el análisis de las pruebas de distribución normal de
Kolmogorov-Smirnov y Shapiro-Wilk realizada mediante el programa estadístico
24
SPSS versión 26, se observa valores de significancia superior al 0,05 establecido
en el estudio, por lo que se confirma la hipótesis de que los grupos de datos
analizados presentan una distribución normal.
Tabla 3. Análisis de la homogeneidad de varianzas
Levene p-
Statistic df1 df2 valor
Se basa en la media 1,582 4 45 0,195
Diámetro del Se basa en la mediana 1,016 4 45 0,409
halo de Se basa en la mediana y con gl 1,016 4 22,458 0,420
inhibición ajustado
Se basa en la media recortada 1,475 4 45 0,226
Fuente: SPSS ver. 26
La tabla 3, del mismo se puede apreciar el análisis realizado mediante la prueba de
Levene o de varianzas homogéneas a los grupos de datos analizados; así mismo,
se observa un valor p > 0.05, por lo tanto, se confirma que los grupos de datos
estudiados tienen varianzas homogéneas.
Tabla 4. Análisis de la varianza (ANOVA) de los grupos de tratamientos
Diámetro del halo de inhibición
Suma de cuadrados df Media al cuadrado F p-valor.
Entre grupos 2610,926 4 652,731 5150,513 0,000
Dentro de los grupos 5,703 45 0,127
Total 2616,628 49
Fuente: SPSS ver. 26
En la tabla 4 se muestra la prueba de ANOVA o de análisis de la varianza realizados
a los grupos de tratamiento experimental y control, donde se observa un p < 0,05,
por lo tanto, se confirma que existe diferencias estadísticamente significativas en al
menos uno de los grupos de datos analizados.
Tabla 5. Análisis por subgrupos homogéneos de la prueba de Tukey
HSD Tukeya
Grupos de trabajo N Subconjunto para alfa = 0.05
1 2 3 4 5
25
Control negativo- DMSO 10 6,12
Aceite de orégano - 50% 10 11,15
Aceite de orégano - 75% 10 13,12
Aceite de orégano - 100% 10 14,90
Control positivo -  Ciprofloxacino 10 27,83
Sig. 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos
homogéneos.
a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 10,000.
Fuente: SPSS ver. 26
La tabla 5 muestra la prueba de Tukey por subgrupos homogéneos la cual
complementa la información del análisis por sub grupos homogéneos y establece
jerarquías o niveles de clasificación de acuerdo a la media de los halos de inhibición
de cada grupo de trabajo, donde se puede apreciar mayor actividad antibacteriana
contra Staphylococcus aureus  para el control positivo con halo de 27,83mm;
seguido por el aceite de Origanum vulgare L al 100%, 75% y 50% y sin actividad
antibacteriana sobre este microorganismo al control negativo.
Tabla 6. Análisis de la sensibilidad de Staphylococcus frente al aceite de
Origanum vulgare L, a diferentes concentraciones, según la escala de
Duraffourd
Sensibilidad Muy Sumamente
Tratamiento nula Sensible sensible sensible
< 8 mm 8–<14 mm 14-<20 mm > 20 mm
Control negativo- DMSO 6,12
Aceite de orégano - 50%  11,15
Aceite de orégano - 75% 13,12
Aceite de orégano - 14,90
100%
Control positivo -
Ciprofloxacino 23,94
En la tabla 6, se muestra la escala valorativa de Duraffourd para la determinación
de la sensibilidad de Staphylococcus aureus frente al aceite de Origanum vulgare
L. a las concentraciones del 100%, 75% y 50%, se observa que Staphylococcus
aureus es sumamente sensible al ciprofloxacino,  quien muestra un halo superior a
20mm, además es muy sensible al aceite de Origanum vulgare al 100% y sensible
26
al aceite de Origanum vulgare L. al 50% y 75%, esta bacteria no presentó
sensibilidad antibacteriana al control negativo.
27
IV. DISCUSIÓN
4.1 Discusión
Los datos recolectados con respecto a la actividad antibacteriana In vitro del
aceite esencial de Origanum vulgare L. (orégano) sobre Staphylococcus
aureus ATCC 25923, correspondieron a los diámetros de los halos de
inhibición formados por el aceite de Origanum vulgare L. (orégano) a las
concentraciones del 50%, 75% y 100% sobre dicha bacteria; así mismo, se
emplearon grupos control; control negativo conformado por el dimetil
sulfóxido (DMSO) el cual se empleó para diluir el aceite y control positivo
conformado por el ciprofloxacino, los datos recolectados fueron analizados
estadísticamente empleando el software estadístico SPSS versión 26 con un
nivel de confianza del 95%.
En los resultados obtenidos del estudio; se observa que el valor promedio de
los halos de inhibición para el aceite de Origanum vulgare L. (orégano) al
50% fue de 11,16 + 0,36mm; de 13,13 + 0,31mm para el 75% y para el 100%
fue de 14,91 + 0,55mm, así mismo, el control negativo (DMSO) obtuvo un
halo promedio de 6,13mm + 0,18 y el control positivo (ciprofloxacino) de
27,83mm + 0,28.
Lopes L. et. al. (2021) determino el efecto del aceite esencial de Origanum
vulgare L. (EOO) y carvacrol (CAR) al evaluarlo sobre Staphylococcus aures,
observaron halos de inhibición promedio a 33,56 mm para el aceite al 100%,
los resultados de este estudio no se contrastan con los obtenidos ya que se
encontraron halos de inhibición promedio de menor tamaño para la misma
concentración.
Así mismo, Pérez O. et. al. (2021) evaluó la capacidad antibacteriana in vitro
del extracto etanólico de hojas de Origanum vulgare frente a Staphylococcus
aureus, Pseudomona aeruginosa y Escherichia coli a las concentraciones de
80 mg/mL, 40 mg/mL y 20 mg/mL, encontrando halos de inhibición promedio
frente a Staphylococcus aureus de 21.64mm, 15.24mm y 11.45mm, estos
resultados se muestran similares a los obtenidos; sin embargo, se debe
precisar que se evaluó el extracto etanólico de las hojas más el aceite.
28
Por otro lado, Carrillo E. (2020), evaluó de la capacidad inhibitoria de la
mezcla de aceites esenciales de orégano (Origanum vulgare) y albahaca
(Ocimum basilicum) frente a Staphylococcus aureus, Listeria
monocytogenes y S. Typhimurium, la mezcla de 67% orégano y 33%
albahaca mostró un halo de inhibición de 24,02mm para Staphylococcus
aureus, a pesar que el estudio muestra la capacidad inhibitoria la mezcla de
orégano (Origanum vulgare) y albahaca (Ocimum basilicum) frente a
Staphylococcus aureus coincide con el estudio en el poder antimicrobiano
del aceite de Origanum vulgare L. frente a Staphylococcus aureus.
Los estudios a nivel internacional presentan de manera general mayor efecto
antimicrobiano del aceite de orégano (Origanum vulgare L.) sobre
Staphylococcus aureus y otros microorganismos, esto puede estar
relacionado con la variedad de la planta y los distintos factores que influyen
en la riqueza de nutrientes y metabolitos de esta. Por otro lado, los estudios
a nivel nacional muestran resultados similares entre estos, como los que se
presentan a continuación.
Medrano E. y Medrano D. (2021), determinaron la actividad antimicrobiana y
efecto desinfectante del aceite esencial de Origanum vulgare L. (orégano)
frente a Staphylococcus aureus y Escherichia coli. halos de inhibición
obtenidos para Staphylococcus aureus de 8,0 mm, 8,0 mm, 9,3 mm y 14,7
mm, a las concentraciones de 20%, 40%, 80% y 100% resultados que se
corroboran con nuestro estudio al ser similares a las mismas
concentraciones.
Sánchez J. y Perez Y. (2021), realizaron el estudio sobre la actividad
antimicótica del aceite esencial de la flor de Origanum vulgare “Orégano” y
Piper Aduncum “Matico” frente Candida albicans. el aceite de orégano de
25.50mm, 29.78mm y 32.53mm; a pesar de no evaluar el estudio la actividad
antibacteriana, también confirma el poder antibacteriano del aceite de
Origanum vulgare “Orégano” en distintas partes de la planta.
Cabe precisar que en todos los estudios se ha demostrado la actividad
antibacteriana del aceite de Origanum vulgare “Orégano”, y los extractos de
29
diferentes partes de la planta frente a Staphylococcus aureus y otros
microorganismos, lo que corrobora los resultados del estudio y demuestra el
poder antimicrobiano de esta planta.
4.2 Conclusiones:
1. El aceite esencial de Origanum vulgare L. (orégano) presentó actividad
antibacteriana sobre Staphylococcus aureus ATCC 25923 a una
concentración del 100 % con un halo de inhibición promedio de 14,91 +
0,55mm.
2. El aceite esencial de Origanum vulgare L. (orégano) presentó actividad
antibacteriana sobre Staphylococcus aureus ATCC 25923 a una
concentración del 75 % con un halo de inhibición promedio de 11,16 +
0,36mm.
3. El aceite esencial de Origanum vulgare L. (orégano) presentó actividad
antibacteriana sobre Staphylococcus aureus ATCC 25923 a una
concentración del 50 % con un halo de inhibición promedio de 11,16 +
0,36mm.
4.3 Recomendaciones
− Se recomienda a futuras investigaciones identificar y cuantificar los
principios activos contenidos en diferentes partes de la planta, tanto del
aceite como de sus extractos.
− Realizar estudios comparativos y de sinergismo del aceite de Origanum
vulgare L. (orégano) con diferentes medicamentos y cepas
microbiológicas
− Promover el uso del aceite de Origanum vulgare L. (orégano) en el
tratamiento alternativo de ciertas enfermedades o como tratamiento
complementario al farmacológico.
30
⮚ REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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33
⮚
34
⮚ ANEXOS
Anexo A. Instrumento de recolección de datos
“ ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA In vitro DEL ACEITE ESENCIAL DE
Origanum vulgare L. (ORÉGANO) SOBRE Staphylococcus aureus ATCC
25923”
35
GRUPOS EXPERIMENTALES
“Concentración del aceite
esencial de Origanum vulgare GRUPOS CONTROL
L. (orégano)
Número de Control Control
placas 100% 75% 50% Negativo positivo
DMSO Ciprofloxacino
Placa N°01 14,87 13,02 11,04 6,04 28,04
Placa N°02 15,56 12,84 11,42 6,34 28,02
Placa N°03 15,09 13,52 11,68 5,96 27,66
Placa N°04 15,31 13,51 10,32 6,53 27,89
Placa N°05 15,11 13,16 11,41 6,08 27,55
Placa N°06 14,70 12,95 11,03 6,14 28,11
Placa N°07 14,54 13,40 11,12 5,99 28,26
Placa N°08 15,23 12,55 11,19 5,95 27,63
Placa N°09 15,07 13,24 11,07 6,10 27,36
Placa N°10 13,60 13,08 11,27 6,12 27,82
36
Anexo B. Matriz de consistencia
Autor (es): Bach. Lachos Pintado, Everly Yanira / Bach. Lopez Perez, Luis Alberto
Tema: “ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA In vitro DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare L. (ORÉGANO) SOBRE Staphylococcus aureus ATCC 25923”
Problema general Objetivo general Hipótesis General Variables ydimensiones Metodología
Variable Tipo de Investigación:
¿Cuál será la actividad Demostrar la actividad El aceite esencial de Origanum Independiente (x)
antibacteriana In vitro del aceite antibacteriana In vitro del aceite vulgare (orégano) posee X: Aceite esencial de Investigación de tipo cuantitativa,
esencial de Origanum vulgare esencial de Origanum vulgare actividad antibacteriana In vitro Origanum vulgare transversal prospectiva de diseño
(orégano) sobre Staphylococcus (orégano) sobre Staphylococcus sobre Staphylococcus aureus (orégano) experimental.
aureus ATCC 25923? aureus ATCC25923. 25923.
Indicadores: Población:
Problemas específicos Objetivos específicos Hipótesis específicas Conformada por la especie vegetal de
X1: Concentración Origanum vulgare (orégano)
P.E.1 ¿Cuál será la actividad O.E.1 Determinar la actividad H.E.1 El aceite esencial de del aceite
antibacteriana In vitro del aceite antibacteriana In vitro del aceite Origanum vulgare (orégano) a esencial. Cepas de Staphylococcus aureus ATCC
esencial de Origanum vulgare esencial de Origanum vulgare una concentración del 100 % 25923.
(orégano) a una concentración del (orégano) a una concentración actividad antibacteriana In vitro
100 % sobre Staphylococcus aureus del 100 % sobre Staphylococcus sobre Staphylococcus aureus Variable Muestra:
ATCC 25923? aureus ATCC 25923. ATCC 25923. Dependiente (Y) VegetalAceite esencial de Origanum vulgare (orégano)
a concentraciones del 100%, 75% y 50%
P.E.2 ¿Cuál será la actividad O.E.2 Determinar la actividad H.E.2 El aceite esencial de Y: Actividad
antibacteriana In vitro del aceite antibacteriana In vitro del aceite Origanum vulgare (orégano) a antibacteriana sobreStaphylococcus Biológica
esencial de Origanum vulgare esencial de Origanum vulgare una concentración del 75 % aureus. Cepas jóvenes de Staphylococcus aureus
(orégano) a una concentración del (orégano) a una concentración posee actividad antibacteriana ATCC.
70 % sobre cepas de del 70 % sobre Staphylococcus In vitro sobre Staphylococcus Indicadores:
Staphylococcus aureus ATCC aureus A ATCC 25923. aureus ATCC 25923. Técnicas de recopilación de
25923? Y1:   Diámetro de información:
P.E.3 Determinar la actividad H.E.3 El aceite esencial de los halos de ficha de recolección de datos
P.E.3 ¿Cuál será la actividad antibacteriana In vitro del aceite Origanum vulgare (orégano) a inhibición.
antibacteriana In vitro del aceite esencial de Origanum vulgare una concentración del 50 % Técnicas de procesamiento de
esencial de Origanum vulgare (orégano) a una concentración posee actividad antibacteriana información:
(orégano) a una concentración del del 50 % sobre Staphylococcus In vitro sobre Staphylococcus ● Pruebas de normalidad, ANOVA y TUKEY
50 % sobre cepas de aureus ATCC 25923. aureus ATCC 25923. mediante el software estadístico SPSS ver.
Staphylococcus aureus ATCC 26
37
25923?
38
Anexo C. Operacionalización de las variables
o
VARIABLE DEFINICIÓN
INDEPENDIENTE CONCEPTUAL DIMENSIONES INDICADOR
UNIDAD DE
MEDIDA
100%
Aceite esencial de Aceite extraído a partir Concentración
Origanum vulgare de las hojas de Porcentaje
(orégano) Origanum vulgare
(orégano) por el
método de arrastre de
vapor de agua.
75%
50%
VARIABLE DEFINICIÓN
DEPENDIENTE CONCEPTUAL DIMENSIONES INDICADOR
UNIDAD DE
MEDIDA
Actividad Capacidad del aceite Halo de Diámetro mm
antibacteriana In esencial de inhibir el inhibición < 8mm Nula
vitro sobre crecimiento bacteriano 9 - 15mm (+)
Staphylococcus 15-20mm (++) Sensible
aureus ATCC >20mm (+++)
25923. Muy sensible
Sumamente
sensible
39
Anexo D. Identificación taxonómica de la especie vegetal
40
Anexo E. Certificado de análisis de la cepa de Staphylococcus aureus ATCC
25923
41
42
Anexo F. Fotografías del trabajo de campo
Figura  2. Selección y Preparación de la muestra vegetal
Figura  3. Instalación del equipo de arrastre por vapor
43
Figura  4. Obtención del aceite esencial
Figura  5. Preparación de las concentraciones de trabajo del aceite esencial
44
Figura  6. Activación de la cepa de Staphylococcus
Figura:  7. Preparación del inóculo
45
Figura  8. Sembrado del inóculo en placas
Figura  9. Aplicación del aceite esencial frente a Staphylococcus aureus
ATCC 25923
46
Figura  10. Medición de halos de inhibición
47